Page 7 - 《广西植物》2022年第5期
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ጢ 期 张强等᧥ 过表达大豆类受体蛋白激酶基因 ቴᒦۗᣞ 促进转基因拟南芥叶片的衰老 Ꭾ ሕ ϟ
作为 ᓂ᥋ᓂ༁ 家族中被研究较为广泛的一员ᖔ 增ᤥ 反应程序᧥ँ࿗ ቩ 预变性 ሕԡ ༁ᖔሕጢ 个循环ྉँ࿗ ቩ
ାዶϟ 在油菜素内酯 ྉାɯ 信号转导途径 ྉ̀ᔀ ᔀᡷ ሕԡ ༁ᖔᤃ ቩ ሕԡ ༁ᖔᎮ ቩ ሕԡ ༁ɯᖔ循环结束后 Ꭾ ቩ ϟԡ
ᑕᖔ ԡԡᎮɯܦ植物先天免疫反应ྉ 韦莉等ᖔԡϟँɯܦ细 ቝᔽႿ 延伸反应ᖔ࿗ ቩ 保温ᤥϟᠮ 的琼脂糖凝胶电泳
胞死亡调控ྉԻၤᆍࣼ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡϟँɯ 等方面发挥作用ᤥ 检测 ۪ऊ 产物ᖔ回收特异性目标条带ᖔ送样测序ᖔ
大豆 ቴᒦۗᣞ 基因ྉ᥈ᔀႿାᑕႿҴ 登录号᧥ ዶɟᤃऐᎮሕँϟɯ 选取测序正确的克隆进行后期载体的构建ᤥ
是植物分子遗传学研究组李小平副教授前期以大 ϓॹ ቴᒦۗᣞԣ 过表达载体构建ܓ拟南芥遗传转化及纯
豆科丰 ሕ࿗ 为材料筛选到的一个编码 શ᥋末端富含 合体筛选
亮氨酸重复序列的类受体蛋白激酶基因ᖔ前期研 通过农杆菌介导法将重组植物过表达载体
究结果发现人工诱导衰老处理显著提高了该基因 ᡱା᥈ۼᎮ 转入野生型拟南芥ᖔ并将收取的种子种
在大豆初生叶片中的转录水平ᖔ初步分析显示该 在含有 ԡ ቝ੫ኼᓂ 的 ାᑕ༁ᡷᑕ 的 ϟᣰ ᥘ୩ 培养基上筛
᥋ϟ
基因可能参与大豆叶片衰老的调控过程ᤥ 本研究 选阳性植株ᖔ提取 ఋሕ 代转基因植株总 શዶᖔ反转
在此基础上构建了大豆 ቴᒦۗᣞ 基因过表达载体并 录成 ዹ᧕શዶᖔ利用特异性引物对转基因植株进行
转化野生型拟南芥ᖔ对转基因拟南芥叶片衰老进 ఋ᥋ी۪ऊ 鉴定ᖔ选取其进行后续表型实验ᤥ
程进行分析ᖔ进一步揭示该基因在植物叶片衰老 ϓॹጇ 叶绿素荧光参数测定
中的功能ᖔ以期为延缓叶片衰老从而提高大豆作
使用便携式叶绿素荧光测定仪ྉ ۪ዶᥘ᥋ጢԡԡᖔ
物产量和改善作物品质提供理论依据ᤥ 德国ɯ测定 ϟԡԡ Pቝᆍኼቝ ኼ༁ 光强下植株叶片的
᥋
᥋ϟ
稳态荧光 Þ ܦ最大荧光 Þ ࣂ和最小荧光 Þ ࣂ后ᖔ将叶
ϟজ 材料与方法 ቂ ᅳ
片暗适应 ሕԡ ቝᔽႿ 后ᖔ测定初始荧光 Þᅳ 和暗下最大
荧光 Þ ᤥ 根据测定的荧光参数计算得出光系统֒
ቂ
ϓॹϓ 材料及培养方法
ྉ۪୩֒ɯ最大光化学效率 Þ ᣑÞ ᢉ ྉ Þ ͱÞ ɯᣰ Þ ᖔ实
ቂ
ᅳ
ቂ
ቂ
צ
本试验所使用的拟南芥ྉ ዛʗᐹᤇᔠʐᅳᡓᔠ ᡙ၊ᐹᤀᔠᐹႥᐹɯ
际光化学量子效率 ಌ ᢉ ྉ Þ ࣕͱÞ ɯᣰ Þ ࣕᖔ光化学
为哥伦比亚野生型ྉۼఋɯ拟南芥ྉ ऊᆍࣼቝᤦᔽᑕ᥋ԡɯᤥ 培 ۪୩֒ ቂ ቂ
淬灭系数 फۗ ᢉ ྉÞ ࣕͱÞ ɯᣰ ྉÞ ࣕͱ Þ ࣕɯᖔ光合电子传
养环境条件如下᧥温度为 ԡ ጲ ጢ ቩ ᖔ光暗周期为 ቂ ቂ ᅳ
递速率 ጶఋ ᢉ ಌ ġ ۗۗÞᦵ ġ ዛ ġ ԡጢᖔ式中᧥ۗۗÞᦵ
᥋
ϟᤃ ၤ 光照 ᣰऐ ၤ 黑暗ᖔ光照强度为 ϟԡԡ Pቝᆍኼ ቝ ኼ ۪୩֒
是光辐射通量ଫዛ 是叶片吸收光能系数ᤥ
᥋ϟ
༁ ᖔ相对湿度为 ऐԡᠮᤥ
ϓॹԣ 总 ቴટዛ 的提取和反转录 ϓॹᣤ ᤹ᦵዛ 含量和抗氧化酶活性测定
取样叶 ԡϟ ੫ 在液氮中充分研磨后立即转入
采用 ͐᧧ዶ᥈ጶશ 的植物 શዶ 提取试剂盒
含有 ϟ ቝᓂ ጢԡ ቝቝᆍኼᓂ 磷酸缓冲溶液ྉᡱ̀ Ꭾऐᖔ含
᥋ϟ
શᔀᑕ༁ᢃ ۪ᑕႿᡷ ᥘᔽႿᔽ ᔽᡷ 按照操作说明提取大豆品种
᥋ϟ
科丰 ሕ࿗ 叶片总 શዶᖔ 经微量紫外分光光度 计 ϟቝቝᆍኼᓂ ጶ᧕ఋዶ 和 ϟᠮ ۪۪ɯ 的离心管中ᖔ在 ࿗
ྉᥘᔀʢᔽႿᡷᆍႿᖔ 美国ɯ检测其纯度和浓度ᖔ琼脂糖凝胶 ቩ 下ϟጢ ԡԡԡ 离心 ϟጢ ቝᔽႿᖔ取上清液弃沉淀ᖔ再
电泳检测其完整性后ᖔ利用 ఋၤᔀʢቝᆍ 公 司 提供的 ϟጢ ԡԡԡ 离心 ጢቝᔽႿᖔ回收上清液用于 ᥘ᧕ዶ 含量和
ዹ᧕શዶ 试剂盒按照反转录说明书合成 ዹ᧕શዶ 第一 抗氧化酶活性的测定ᤥ 抗氧化酶活性的测定参照
文献ྉ陈斌等ᖔԡϟጢɯᤥ 超氧化物歧化酶ྉ୩ᨃ᧕ɯ 活
条链ᤥ
ϓॹᇺ ቴᒦۗᣞԣ 全长 ዞᦵટዛ 引物设计及 ቴ௴ۗࣷቴ 基因扩增 性检测采用氮蓝四唑ྉશାఋɯ 光化还原法ଫ过氧化
利用 ۪ʢᔽቝᔀʢ ۪ʢᔀቝᔽᔀʢ ጢԡ 软件设计 ቴᒦۗᣞ 基因 物酶ྉ۪ᨃ᧕ɯ 活性检测采用愈创木酚法ଫ过氧化氢
的特异性引物ᖔ根据 ᥈ᑕᡷᔀऔᑕᢃ 技术构建表达载体的 酶ྉऊዶఋɯ 活性检测活性采用 ̀ ᨃ 分解法 测 定ᤥ
要求ᖔ在引物 ጢࣕ端加上 ዶዶዶዶዶ᥈ऊዶ᥈᥈ऊఋऊ᥈ᖔ引物 ᥘ᧕ዶ 含量的测定参考中国科学院上海植物生理研
序列如下᧥ 究所ྉϟँँँɯ的方法ᤥ
ቴᒦۗᣞ᥋ᨃᣮ᥋è᧥ጢࣕዶዶዶዶዶ᥈ऊዶ᥈᥈ऊఋऊ᥈ዶఋ᥈ዶ᥈ዶ ϓॹ᎒ 转 ቴᒦۗᣞԣ 基因拟南芥中衰老相关基因表达
ఋऊዶ᥈ఋዶዶ᥈ఋఋऊऊऊऊఋ᥈ሕࣕ ଫ શዶ 提取步骤同上ᖔ其反转录及定量 ۪ऊ 体
ቴᒦۗᣞ᥋ᨃᣮ᥋᧥ጢࣕዶ᥈ዶዶዶ᥈ऊఋ᥈᥈᥈ఋఋఋఋዶዶఋऊఋ 系的配制均依据 ͐ࣼᑕႿᡷ ఋ᥋۪ऊ Ҵᔽᡷ ྉ ୩ɟା ᥈ʢᔀᔀႿɯ
ऊఋऊఋఋऊఋऊऊዶዶ᥈ఋዶዶ᥈ዶዶ᥈ሕࣕᤥ 的说明书操作ᖔ具体数据分析参照 ᣮࣼᔀ 等ྉԡϟᎮɯ
采用高保真 ۪ၤࣼ༁ᔽᆍႿ ᧕શዶ 聚合酶进行 ۪ऊ 扩 步骤进行ᤥ
