Page 27 - 《广西植物》2022年第9期

ँ 期 梁森林等᧥ᡱ̀ 区带精制逆流色谱法分离制备越南槐中具有抑制 ሂͱ糖苷酶活性的生物碱 ϟ ࿗ ᤃ ሕ
᥋ϟ
᥋ϟ
基线分离ᖔ 对流动相᧥ 甲醇 ͱ 水ܦ 乙腈 ͱ 水ܦ 甲醇 ͱ ᓂ ̀ऊ᤟ᖔ下相加入 ϟԡ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ ఋጶዶɯ 为溶剂系统
ԡ঎ϟᠮ ఋጶዶ 水ܦ乙腈ͱԡ঎ϟᠮ ఋጶዶ 水ܦ甲醇ͱԡ঎ϟᠮ 磷酸 对总生物碱进行 ᡱ̀ 区带精制逆流色谱分离ᖔ其结
水ܦ乙腈ͱԡ঎ϟᠮ 磷酸水的分离效果进行了比较ᖔ结 果如图 ࿗᧥ዶ 所示ᖔ࿗ँ ጲ ँऐ ቝᔽႿ 馏分经 ۪̀ᓂऊ 检测
果显示ᖔ当选用乙腈ͱԡ঎ϟᠮ 磷酸水ྉጢ ᨒ ँጢɯ 作为流 为化合物 ϓᖔϟᤃ԰ ጲ ϟᎮऐ ቝᔽႿ 馏分为化合物 ԣᖔ但化合
动相ᖔ流速为 ԡ঎ऐ ቝᓂኼቝᔽႿ 时ᖔ越南槐地上部分总 物 ԣ 中夹杂有化合物 ϓᖔ未能实现完全分离ᤥ 由于
᥋ϟ
生物碱中各成分能实现基线分离ᖔ分离效果见图 ԰ᤥ 待分离物质的解离常数在一定的条件下为常数ᖔ
其解离程度主要由保留酸决定ᤥ 调整保留酸的浓
度ᖔ会导致矩形峰的宽度及出峰时间发生改变ᤥ
因此ᖔ为了获得更好的洗脱效果ᖔ加 ԰ԡ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ ᥋ϟ
̀ऊ᤟ 于固定相中ᖔ流动相中 ఋጶዶ 的浓度不变ᖔ用
ᡱ̀ 区带精制逆流色谱分离总生物碱的效果如图
࿗᧥ା 所示ᖔᤃऐ ጲ ϟϟሕ ቝᔽႿ 出现了化合物 ϓᖔϟ࿗ऐ ጲ ԰ԡԡ
ቝᔽႿ 出现了化合物 ԣᖔ经 ۪̀ᓂऊ 分析ᖔ其纯度分别为
ँऐ঎Ꭾᠮ和 ँऐ঎԰ᠮᤥ

ϟ঎ 苦参碱ଫ԰঎ 氧化苦参碱ᤥ
ϟ঎ ᥘᑕᡷʢᔽႿᔀଫ ԰঎ ᨃ଴ᢃቝᑕᡷʢᔽႿᔀ঎
图 ԰জ 总生物碱的 ۪̀ᓂऊ 色谱图
èᔽ੫঎ ԰জ ۪̀ᓂऊ ዹၤʢᆍቝᑕᡷᆍ੫ʢᑕቝ ᆍ஦ ᡷᆍᡷᑕ᤟ ᑕ᤟Ҵᑕ᤟ᆍᔽʛ༁ 图 ሕজ ᡱ̀ 区带精制逆流色谱分离原理图
èᔽ੫঎ ሕজ ୩ዹၤᔀቝᑕᡷᔽዹ ஦ᔽ੫ࣼʢᔀ ᆍ஦ ۪Ի኏ऊऊऊ ༁ᔀᡱᑕʢᑕᡷᔽᆍႿ ᡱʢᔽႿዹᔽᡱ᤟ᔀ
ᇺॹԣ ᡓ̵ 区带精制逆流色谱色谱条件的优化
在分离生物碱的经典 ᡱ̀ 区带精制逆流色谱 ᇺॹᇺ 样品对 ሂͦ葡萄糖苷酶抑制活性的影响
正向置换模式下ᖔ总生物碱中的各类化合物依据
以样品浓度和抑制率作图ᖔ求得各样品的 ᧧ऊ ጢԡ
其解离常数及疏水性不同ᖔ在保留酸的前方形成
值如表 ԰ 所示ᤥ 结果表明ᖔ越南槐地上部分总提
一系列的溶质区带ᖔ达到平衡后ᖔ每个溶质区带和
取物及总生物碱对 ሂͱ葡萄糖苷酶抑制作用微弱ᖔ
保留酸以相同的速率移动ᤥ 以本实验为例ᖔ固定
而苦参碱和氧化苦参碱均对 ሂͱ葡萄糖苷酶有一定
相水相位于管道的上半部分ᖔ有机流动相位于下
的抑制活性ᖔ且氧化苦参碱的抑制作用明显强于
半部分ᖔ保留酸形成了一个陡峭的边界ᖔ如图 ሕ 所
苦参碱ᤥ
示ᖔ在边界右侧ᖔ碱性待分离物质从保留酸中获得
质子并进入固定相中ྉ 位置ഀɯᖔ当保留酸边界向
表 ԣই 样品的 ሂͦ葡萄糖苷酶抑制活性
前推移时ᖔ溶质正离子被置于高 ᡱ̀ 值范围内ྉ 位
ఋᑕᤦ᤟ᔀ ԰জ ሂ᥋੫᤟ࣼዹᆍ༁ᔽʛᑕ༁ᔀ ᔽႿၤᔽᤦᔽᡷᆍʢᢃ ᑕዹᡷᔽ׹ᔽᡷᢃ ᆍ஦ ༁ᑕቝᡱ᤟ᔀ༁
置྆ɯᖔ被夺去质子后回到疏水性的非离子形式迅
速进入流动相中ྉ 位置æɯᖔ溶质穿过边界后重新 样品 ᧧ऊ ጢԡ ō୩᧕
᥋ϟ
୩ᑕቝᡱ᤟ᔀ ྉቝ੫ኼᓂ ɯ
置于低 ᡱ̀ 值范围内ྉ位置ብɯᖔ获得质子而回到固
定相中ྉ位置ഀɯᖔ这一过程不断重复直至保留碱 总提取物 ఋᆍᡷᑕ᤟ ᔀ଴ᡷʢᑕዹᡷ ᗵ
流出色谱柱ᤥ 会出现具有最小重叠的矩形平台峰 总生物碱 ఋᆍᡷᑕ᤟ ᑕ᤟Ҵᑕ᤟ᆍᔽʛ༁ ᗵ
ྉऊᑕᔽ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡ԰ԡɯᖔ物质被高度浓缩在平台内ྉఋᆍႿ੫
苦参碱 ᥘᑕᡷʢᔽႿᔀ Ꭾ԰࿗঎ᤃԡōँԡ঎ँሕ
ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡϟሕɯ而杂质被有效祛除并集中在平台两侧
氧化苦参碱 ᨃ଴ᢃቝᑕᡷʢᔽႿᔀ ϟϟጢ঎ँԡōϟ࿗঎ԡጢ
ྉۼᑕႿ੫ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡϟ԰ɯᤥ 本实验首先使用了二氯甲
阿卡波糖 ዶዹᑕʢᤦᆍ༁ᔀ ԡ঎ϟጢōԡ঎ԡϟ
烷ͱ甲醇ͱ水ྉጢ ᨒሕ ᨒ԰ᖔႬᣑ Ⴌɯྉ上相加入 ϟԡ ቝቝᆍ᤟ኼ