Page 189 - 《广西植物》2023年第1期
P. 189
１ 期 贾凯等: 细叶十大功劳叶中总生物碱大孔树脂纯化及抗氧化研究 １ ８ ５
１.２.２ 上样溶液及总生物碱粗品的制备 取细叶 当稀释后测定各流分中的总生物碱质量浓度ꎬ进
十大功劳叶粉末约 １００ ｇ(过 ４０ 目筛)ꎬ精密称定ꎬ 行不同上样浓度对树脂饱和吸附量的实验ꎮ
加 ８ 倍生药体积的 ７５％乙醇加热回流提取 ３ 次ꎬ １.２.４.２ 上样流速和上样量的确定 取相同质量预
每次 ２ ｈꎮ 冷至 ４０ ℃ ꎬ滤过ꎬ滤液合并ꎬ减压浓缩 处理过的 ＡＢ￣８ 大孔吸附树脂ꎬ湿法装柱(１.０ ｃｍ ×
至无醇味ꎬ静置过夜ꎮ 过滤除去析出的黑色胶状 ２０ ｃｍꎬ装柱量 １０ ｍＬ)ꎮ 将上样溶液( 生药浓度为
物质ꎬ滤液加水定容至相当于原生药 ２５ 倍体积 ５０ ｍｇｍＬ )以不同流速上样ꎬ进行不同上样流速
￣１
￣１
(相当于含生药量 ４０ ｍｇｍＬ )ꎬ即得上样溶液ꎮ 对树脂饱和吸附量的实验ꎮ
依法可制得其他浓度的上样溶液ꎮ 按相同的提取 １.２.４.３ 洗脱杂质用水量的确定 取预处理过的
方法ꎬ滤液经浓缩、真空干燥至恒重ꎬ即得总生物 ＡＢ￣８ 大孔吸附树脂ꎬ湿法装柱(１.０ ｃｍ × ２０ ｃｍꎬ装
碱粗品(纯度 １３.３３％)ꎬ置于干燥器中备用ꎮ 柱量 １０ ｍＬ)ꎮ 将 ２６０ ｍＬ 上样溶液( 生药浓度为
１.２.３ 大孔吸附树脂型号的选择 ５０ ｍｇｍＬ )以 ２ ＢＶｈ 流速上样ꎬ吸附完全后ꎬ
￣１
￣１
１.２.３.１ 树脂的预处理 分别取一定量的不同型号 用水洗脱ꎬ每 １ ＢＶ 为 １ 个流分ꎬ测定总生物碱质
树脂( Ｄ１０１、ＡＢ￣８、ＡＤＳ￣３、ＤＡ２０１、ＮＫＡ￣９、ＬＤ６０５) 量浓度ꎬ同时将每一流分浓缩干燥ꎬ称其固形物质
置于 ９５％ 乙醇中浸泡 １２ ｈꎬ充分溶胀后ꎬ湿法装 量ꎬ以总生物碱在固形物中的含量高低确定洗脱
柱ꎬ９５％乙醇洗至流出液加适量水无白色浑浊出 杂质用水量ꎮ
现ꎬ再用纯化水洗至无乙醇味为止ꎬ备用ꎮ １.２.４.４ 乙醇洗脱剂浓度及用量的确定 取 ４ 等份
１.２.３.２ 不同树脂的静态吸附实验和解吸实验考察 预处理过的 ＡＢ￣８ 大孔吸附树脂ꎬ湿法装柱( １. ０
精密称取上述已处理好的树脂各 １.０ ｇꎬ分别置 ｃｍ × ２０ ｃｍꎬ装柱量 １０ ｍＬ)ꎮ 将 ２６０ ｍＬ 上样溶液
于 １００ ｍＬ 锥形瓶中ꎬ加入上样溶液 ２０ ｍＬ(生药浓 (生药浓度为 ５０ ｍｇｍＬ ) 以 ２ ＢＶｈ 流速上
￣１
￣１
￣１
度为 ４０ ｍｇｍＬ )ꎬ置恒温振荡水槽中振荡吸附 ２ 样ꎬ吸附完全后ꎬ用水洗脱 ３ ＢＶ 后ꎬ分别用 ３０％、
ｈ(３０ ℃ ꎬ１２０ ｒｍｉｎ )ꎬ然后静置 ２４ ｈꎮ 滤过ꎬ滤 ４０％、５０％、６０％乙醇洗脱ꎬ收集洗脱液ꎬ每 １ ＢＶ 为
￣１
液经适当稀释后测定吸光度计算出总生物碱质量 １ 个流分ꎬ绘制洗脱曲线ꎮ
浓度ꎬ计算饱和吸附量和静态吸附率ꎮ 将抽滤后 １.２.４.５ 验证性实验 取预处理过的 ＡＢ￣８ 大孔吸
的树脂吸干表面水分后分别转移至 １００ ｍＬ 锥形 附树 脂ꎬ 湿 法 装 柱 ( ２. ６ ｃｍ × ３０ ｃｍꎬ 装 柱 量 １００
瓶中ꎬ加入 ９５％乙醇 ３０ ｍＬꎬ置恒温振荡水槽中振 ｍＬ)ꎮ 将 ２. ６ Ｌ 上 样 溶 液 ( 生 药 浓 度 为 ５０ ｍｇ
￣１
￣１ ｍＬ )以 ２ ＢＶｈ 流速上样ꎬ吸附完全后ꎬ用水洗
￣１
荡解吸 ２ ｈ(３０ ℃ ꎬ１２０ ｒｍｉｎ )ꎬ然后静置 ２４ ｈꎮ
滤过ꎬ滤液经适当稀释后测定吸光度计算出总生 脱 ３ ＢＶ 后ꎬ再用 ５０％乙醇洗脱 ４ ＢＶꎬ收集乙醇洗
物碱质量浓度ꎬ计算吸附率与解吸率ꎮ 脱液ꎬ浓缩、干燥ꎬ测定总生物碱质量浓度ꎮ 重复 ３
１.２.３.３ 不同树脂的动态吸附、洗脱实验考察 分 次验证实验ꎮ
别将预处理过的 Ｄ１０１、ＡＢ￣８、ＬＤ６０５ 树脂湿法装 １.２.５ 总 生 物 碱 抗 氧 化 活 性 测 定 采 用 常 用 的
柱(１.０ ｃｍ × ２０ ｃｍꎬ装柱量 １０ ｍＬ)ꎮ 缓慢加入上 ＤＰＰＨ 自由基清除法来评价总生物碱的抗氧化活
样溶液 １００ ｍＬ( 生药浓度为 ４０ ｍｇｍＬ )ꎬ控制 性ꎮ 参照文献( 李侠等ꎬ２０１８) 方法并略作修改ꎮ
￣１
流速为 ２ ＢＶｈ ꎬ收集流出液ꎮ 将吸附后的各树 精密称取 ＤＰＰＨ １０ ｍｇꎬ置 ２５０ ｍＬ 容量瓶 中ꎬ用
￣１
￣４
脂柱先后用纯化水 ５０ ｍＬ、８０％乙醇 １００ ｍＬ 洗脱ꎬ ９５％乙醇溶 解 并 稀 释 至 刻 度ꎬ摇 匀ꎬ即 得 １ × １０
控制流速为 ２ ＢＶｈ ꎬ收集流出液ꎮ 各流出液经 ｍｏｌＬ (４０ μｇｍＬ ) 的 ＤＰＰＨ 工作液ꎮ 精密称
￣１
￣１
￣１
适当稀释后测定吸光度ꎬ计算出总生物碱质量浓 取“１.２. ２” 项 中 总 生 物 碱 粗 品 ( 黑 绿 色 固 体)、
度、动态吸附率、动态解吸率ꎮ “１.２.４.５” 项中总生物碱纯化品( 黄绿色固体) 和
１.２.４ ＡＢ￣８ 大孔吸附 树 脂 纯 化 总 生 物 碱 的 工 艺 阳性对照品 Ｖ 各 １０ ｍｇꎬ置于 １００ ｍＬ 容量瓶中ꎬ
Ｃ
研究 用 ９５％乙醇溶解并稀释至刻度ꎬ摇匀ꎬ即得质量浓
￣１
１.２.４.１ 上样溶液浓度的确定 取预处理过的 ＡＢ￣ 度为 １００ μｇｍＬ 的各待测溶液ꎮ 各待测溶液对
８ 大孔吸附树脂ꎬ湿法装柱(１.０ ｃｍ × ２０ ｃｍꎬ装柱 半稀释成 ５ 个浓度ꎮ 实验组精密量取上述不同浓
量 １０ ｍＬ)ꎮ 将不同生药浓度的十大功劳上样液以 度的待测溶液 ２ ｍＬ 与 ＤＰＰＨ 工作液 ２ ｍＬ 置于 １０
２ ＢＶｈ 的流速上样ꎬ每 ２ ＢＶ 为 １ 个流分ꎬ经适 ｍＬ 具塞试管中ꎬ摇匀ꎬ室温下暗处放置 ３０ ｍｉｎꎮ
￣１
