Page 8 - 《广西植物》2023年第7期

１ １ ７ ６ 广 西 植 物 ４３ 卷
ＧｅｎＢａｎｋ 数据库ꎬ通过 ＭＥＧＡ Ｘ 软件使用邻位算 ｈ 取样 １０ ｍＬꎬ通过 ＨＰＬＣ 分析 Ｒｂ 残留量ꎮ
１
法(ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣ｊｏｉｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ)构建系统发育树ꎬ采用 １.８ 数据处理分析
Ｂｏｏｔｓｔｒａｐ ＝ １ ０００ 检验各分支的置信度( Ｓｕｄｈｉｒ ｅｔ 数据处理分析均使用 ＳＰＳＳ ｖ２４.０ 软件进行ꎬ统
ａｌ.ꎬ ２０１８)ꎮ 计学 差 异 显 著 性 通 过 Ｄｕｎｃａｎ 和 ＬＳＤ 检 验 进 行
１.７ 菌株 ＳＣ３ 的降解特性 评估ꎮ
１.７.１ 菌株 ＳＣ３ 对单体皂苷的降解 配制含人参

皂苷 Ｒｂ 质 量 浓 度 分 别 为 ２５、 ５０、 １００、 ２００、 ４００ ２ 结果与分析
１
ｍｇｍＬ 的 ＭＳＭ 液体培养基ꎬｐＨ ７.０ꎬ含人参皂苷
￣１
Ｒｇ 的 ＭＳＭ 培 养 基 配 置 浓 度 同 上ꎮ 在 无 菌 条 件 ２.１ 三七皂苷类自毒物质降解菌的分离及筛选
１
下ꎬ将 ＳＣ３ 供试菌液以 ５％( Ｖ / Ｖ) 接种量接入培养 基于光学显微镜形态鉴定ꎬ从 ＬＢ 培养基上挑
选颜色或形态特征具有差异的微生物ꎬ经划线纯
基中ꎬ以不接种菌株为对照ꎬ培养基置于 ３０ ℃ 、
￣１
１８０ ｒｍｉｎ 条件下的摇床中培养ꎬ所有试验重复 ３ 化后 获 得 细 菌 分 离 物 ８ 株ꎬ 编 号 分 别 为 ＳＡＺ３、
次ꎮ ９６ ｈ 后ꎬ每瓶培养基取 ３ ｍＬ 菌液在 ９ ５００ ｒ ＰＳＣＺ２、ＳＣＺ１、ＳＣ２、ＳＣ３、ＳＢＺ１、ＰＳＢＺ１ 和 ＳＤＺ１ꎮ 基
ｍｉｎ 条件下离心 ２ ｍｉｎꎬ取上清液过 ０.２２ μｍ 有机 于香草醛法初步测定了潜在三七皂苷降解菌的降
￣１
滤膜ꎬ参考 Ｚｈｏｕ 等(２００８) 的方法通过 ＨＰＬＣ 检测 解能力ꎬ结果如表 １ 所示ꎮ 通过检测方法线性考
样品含量ꎮ 察的 结 果 显 示ꎬ 在 三 七 总 皂 苷 浓 度 为 ５０ ~ ２５０
￣１
１.７.２ 接种量对降解效果的影响 以含 ４００ ｍｇ ｍｇｍＬ 时吸光度与浓度线性关系良好ꎬ可用于
ｍＬ 人参皂苷 Ｒｂ 的液体 ＭＳＭ 培养基(ｐＨ ７.０) 为 目标范围内含量的计算ꎮ 在以三七总皂苷为唯一
￣１
１
碳源的 ＭＳＭ 液体培养基中ꎬ其自然降解率约为
基础ꎬ控制 ＳＣ３ 供试菌液以 ５％、１０％、１５％、２０％
(Ｖ / Ｖ)的接种量接入培养基中ꎬ于 ３０ ℃ 、１８０ ｒ １５％ꎮ 这些菌株对三总皂苷的相对降解率范围在
ｍｉｎ 条件下振荡培养ꎬ以不接种降解菌的培养基 ３.３１％ ~ ８７.４２％之间ꎬ其中菌株 ＳＣ３ 对三七总皂苷
￣１
为对照ꎮ ３ 次重复ꎬ在培养 １２０ ｈ 后ꎬ通过 ＨＰＬＣ 分 的降解率最大ꎮ
析样品ꎮ
表 １ 总皂苷的生物降解
１.７. ３ 培 养 温 度 对 降 解 效 果 的 影 响 以 含 ４００
￣１ Ｔａｂｌｅ １ Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ
ｍｇｍＬ 人参皂苷 Ｒｂ 的液体 ＭＳＭ 培养基( ｐＨ
１
７.０) 为 基 础ꎬ 控 制 ＳＣ３ 供 试 菌 液 以 ５％、 １０％、 菌株编号 来源 降解率
Ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ
Ｓｔｒａｉｎ Ｎｏ. Ｓｏｕｒｃｅ
１５％、２０％( Ｖ / Ｖ) 的 接 种 量 接 入 培 养 基 中ꎬ 于 ３０ ｒａｔｅ (％)
℃ 、１８０ ｒｍｉｎ 条件下振荡培养ꎬ以不接种降解菌
￣１
ＳＡＺ３ 广西那坡 １４.０３±１.１５ｅ
的培养基为对照ꎮ ３ 次重复ꎬ在培养 １２０ ｈ 后ꎬ通 Ｎａｐｏꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ
ＰＳＣＺ２ 广西那坡 ５０.９２±１.１３ｃ
过 ＨＰＬＣ 分析样品ꎮ
Ｎａｐｏꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ
１.７.４ ｐＨ 对降解效果的影响 将 ＳＣ３ 供试菌液以 ＳＣＺ１ 广西那坡 ５０.２４±２.０８ｃ
５％(Ｖ / Ｖ)的接种量接种到含 ４００ ｍｇｍＬ 人参皂 Ｎａｐｏꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ
￣１
ＳＣ２ 广西那坡 ７２.５８±５.７２ｂ
苷 Ｒｂ 的液体 ＭＳＭ 培养基中ꎬ控制培养基 ｐＨ 为
１ Ｎａｐｏꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ
４.０、５.０、６.０、７.０ 和 ８.０ꎬ于 ３０ ℃ 、１８０ ｒｍｉｎ 条件 ＳＣ３ 广西那坡 ８７.４２±２.２１ａ
￣１
Ｎａｐｏꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ
下振荡培养ꎬ以不接种降解菌的培养基为对照ꎮ ３
ＳＢＺ１ 广西田林 ２７.３１±１.１５ｄ
次重复ꎬ在培养 １２０ ｈ 后ꎬ通过 ＨＰＬＣ 分析样品ꎮ Ｔｉａｎｌｉｎꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ
１.７.５ 人参皂苷 Ｒｂ 降解过程跟踪 根据单因素试 ＰＳＢＺ１ 广西田林 ３.３１±０.８２ｆ
１
Ｔｉａｎｌｉｎꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ
验结果ꎬ在优化条件下测量 ＳＣ３ 菌株对人参皂苷
ＳＤＺ１ 云南文山 ４.８１±４.４３ｆ
Ｒｂ 的降解曲线ꎮ 以 ４００ ｍｇｍＬ 人参皂苷 Ｒｂ 的 Ｗｅｎｓｈａｎꎬ Ｙｕｎｎａｎ
￣１
１ １
液体 ＭＳＭ 培养基为基础ꎬ调 ｐＨ 至 ７. ０ 左 右ꎬ将 注: 数值为平均值±标准差ꎮ 不同小写字母表示不同组间降
ＳＣ３ 供试菌液以 ５％ ( Ｖ / Ｖ) 的接种量接入培养基 解率存在显著差异 (Ｐ<０.０５)ꎮ
Ｎｏｔｅ: Ｖａｌｕｅｓ ａｒｅ ｘ ± ｓ. Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ
￣１
中ꎬ以未接种菌株为对照组ꎬ于 ３０ ℃ 、１８０ ｒｍｉｎ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓ
条件下振荡培养ꎬ设 ３ 次重复ꎮ 培养期间每隔 １２ (Ｐ<０.０５).