Page 187 - 《广西植物》2024年第5期
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５ 期 步园园等: 氮磷钾肥对有柄石韦生理及绿原酸合成积累的影响 ９ ７ ５
程为 ｙ ＝ ３.００４ ２４×１０７ｘ－３２９ ４３ꎬＲ ＝ ０.９９９ ２ꎮ 色 磷处理与低磷处理的 ＳＯＤ 活性无显著性差异( 图
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谱柱:ＸＢｒｉｄｇｅ Ｃ (４.６ ｍｍ × ２５０ ｍｍꎬ５ μｍ)ꎬ检测 １:Ａ)ꎮ 不同磷浓度下有柄石韦的 ＣＡＴ 活性变化
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波长 ３２６ ｎｍꎬ柱温 ２５ ℃ ꎬ流速 １.０ ｍＬｍｉｎ ꎬ乙腈 趋势与 ＳＯＤ 活 性 变 化 趋 势 相 反ꎬ 正 常 磷 浓 度 时
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(Ｃ) ~ ０.１％磷酸溶液(Ａ)梯度洗脱ꎬ洗脱程序: ０ ~ ＣＡＴ 活性最低ꎬ低磷处理和高磷处理分别较正常
５ ｍｉｎꎬ １０％ → １５％ Ｃꎬ ９０％ → ８５％ Ａꎻ ５ ~ １２ ｍｉｎꎬ 磷升高了 ８２.６４％和 ７７.４１％ꎬ均达到显著水平( 图
１５％→１９％ Ｃꎬ８５％ → ８１％ Ａꎻ １２ ~ １８ ｍｉｎꎬ １９％ → １:Ｂ)ꎮ 正常施磷时脯氨酸含量最高ꎬ高磷处理与
２７％Ｃꎬ８１％ →７３％ Ａꎻ１８ ~ ４０ ｍｉｎꎬ２７％ → ８０％ Ｃꎬ 低磷处理无显著性差异(图 １:Ｃ)ꎮ
７３％→ ２０％ Ａꎻ４０ ~ ６０ ｍｉｎꎬ８０％ → １０％ Ｃꎬ２０％ → ２.１.３ 不同钾浓度对有柄石韦抗性生理的影响
９０％Ａꎮ 不同钾浓度处理间有柄石韦 ＳＯＤ 活性存在显著性
１.６ ＣＧＡ 合成关键酶活性测定 差异ꎬ低钾处理 ＳＯＤ 活性最高ꎬ高钾处理 ＳＯＤ 活
ＣＧＡ 合成关键酶均采用酶联免疫法ꎬ按照试 性最低(图 １:Ａ)ꎮ ＣＡＴ 活性在正常施钾肥情况下
剂盒(广西君奇生物科技有限公司ꎬ２０２３０１) 方法 最低ꎬ低钾处理下 ＣＡＴ 活性显著高于正常施钾和
步骤进行测定ꎬ精确称取有柄石韦鲜样 ０.１ ｇ ꎬ加 高钾处理ꎮ 钾浓度对有柄石韦的脯氨酸含量的影
入 １ ｍＬ 的 ＰＢＳ(ｐＨ 为 ７.２ ~ ７.４) 缓冲液ꎬ４ ℃ 冷冻 响与氮、磷处理的影响一致ꎬ即正常施钾显著高于
研磨匀浆ꎬ１０ ０００ ｒｍｉｎ 、４ ℃ 离心 ２０ ｍｉｎꎬ获得 低钾处理和高钾处理ꎬ低钾处理与高钾处理间无
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酶提取液ꎮ 样品孔加入样品稀释液ꎬ空白孔不加ꎬ 显著性差异(图 １:Ｃ)ꎮ
除空白孔外标准孔和样品孔分别加入辣根过氧化 ２.２ 氮磷钾肥对有柄石韦 ＣＧＡ 含量及合成关键酶
物酶(ＨＲＰ)标记的检测抗体ꎬ恒温箱 ３７ ℃ 反应 ６０ 活性的影响
ｍｉｎ 后取出ꎬ弃去废液加入洗涤液重复洗涤 ５ 次ꎬ ２.２.１ 氮磷钾肥对有柄石韦 ＣＧＡ 含量的影响 由
拍干后每孔加入底物ꎬ３７ ℃ 避光孵育 １５ ｍｉｎ 后每 图 １ 可知ꎬ不同水平氮、磷和钾肥对有柄石韦 ＣＧＡ
孔加入硫酸终止液ꎬ测定 ４５０ ｎｍ 下各孔的 ＯＤ 值ꎮ 含量存在显著影响ꎮ 正常施氮 ＣＧＡ 含量最高ꎬ达
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关键酶活性定义为每克蛋白质在每分钟内降解 １ １２.９２ ｍｇｇ ꎬ低氮和高氮处理分别较正常施氮降
μｍｏｌ 四甲基联苯胺(ＴＭＢ)为一个酶活性单位ꎮ 低了 １５.８７％和 １９.６６％ꎬ均达到了显著水平ꎮ 高磷
１.７ 数据分析 和高钾处理不利于有柄石韦的 ＣＧＡ 积累ꎬ与正常施
用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２０１９ 软件处理数据(数据以 磷和正常施钾肥相比分别下降了 ２８. ３３％ 和 ３９.
平均值±标准差表示)ꎬ用 ＳＰＳＳ ２５ 软件对数据进 ７１％ꎬ钾浓度对有柄石韦 ＣＧＡ 含量影响更显著ꎮ
行方差分析、多重比较、Ｐｅａｒｓｏｎ 相关性分析ꎬＯｒｉｇｉｎ ２.２.２ 氮处理对有柄石韦 ＣＧＡ 合成关键酶活性的
２０２１ 软件作图ꎮ 影响 低氮处理的 ＰＡＬ 活性最高ꎬ而高氮处理与
正常施氮的 ＰＡＬ 活性无显著变化(图 ２:Ａ)ꎮ 低氮
２ 结果与分析 处理的 Ｃ４Ｈ 活性较正常施氮降低了 ２３.３９％ꎬ达到
显著水平(图 ２:Ｂ)ꎮ 高氮处理的 ４ＣＬ 活性较正常
２.１ 氮磷钾肥对有柄石韦抗性生理的影响 施氮相比下降了 １３.２３％ꎬ低氮处理和正常施氮间
２.１.１ 不同氮浓度对有柄石韦抗性生理的影响 无显著性差异(图 ２:Ｃ)ꎮ 高氮处理的 ＨＣＴ 活性比
由图 １ 可知ꎬ高氮处理的 ＳＯＤ 活性是低氮处理的 正常施氮显著升高了 ２１.０５％ꎬ而正常施氮的 ＨＣＴ
２.１８ 倍ꎬ正常施氮与低氮处理的 ＳＯＤ 活性无显著 活性最低( 图 ２:Ｄ)ꎮ 高氮处理下 ＨＱＴ 活性与正
性差异(图 １:Ａ)ꎮ 正常施氮的 ＣＡＴ 活性最低( 图 常施氮相比降低了 １２.６％ꎬ均达到显著水平( 图 ２:
１:Ｂ)ꎬ与低氮和高氮处理达到显著水平ꎮ 低氮处 Ｅ)ꎮ 氮浓度对 Ｃ３Ｈ 活性无显著影响(图 ２:Ｆ)ꎮ
理下脯氨酸含量最低ꎬ为 ４２.０９ μｇｇ ꎬ与正常氮 ２.２.３ 磷处理对有柄石韦 ＣＧＡ 合成关键酶活性的
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处理达到显著水平ꎬ与高氮处理无显著差异ꎮ 随 影响 高磷处理下 ＰＡＬ 活性最低ꎬ较正常施磷处
着施氮量增加ꎬ脯氨酸含量呈现先升高后下降的 理组降低了 １２.８５％ꎬ而低磷处理较正常施磷 ＰＡＬ
趋势(图 １:Ｃ) 活性无显著变化(图 ３:Ａ)ꎮ 磷处理对 Ｃ４Ｈ 活性的
２.１.２ 不同磷浓度对有柄石韦抗性生理的影响 影响与氮处理相似ꎬ呈先升高后降低的趋势(图 ３:
在磷处理试验中ꎬ正常施磷的 ＳＯＤ 活性最高ꎬ而高 Ｂ)ꎮ 低磷处理 ４ＣＬ 活性与正常施磷相比无显著变
