Page 8 - 《广西植物》2025年第1期
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４ 广 西 植 物 ４５ 卷
片重复测定 ３ 次ꎬ取平均值ꎮ 每个物种测定 ３ 株ꎮ １.２.５ 叶片显微结构的参数测定
２０２３ 年 １０ 月 ７ 日 日 出 时 间 ( 北 京 时 间) 为 上 午 １.２.５.１ 叶片解剖结构 从进行光合测定的植株
６:３３:１５ꎬ日落时间( 北京时间) 为下午 １８:２０:１７ꎻ ( 每个物种各选取 ３ 株) 取样ꎬ每株选取与光合指
２０２３ 年 １０ 月 ８ 日 日 出 时 间 ( 北 京 时 间) 为 上 午 标测定时方位一致的成熟叶片各 ３ 片ꎬ参照李冬
６:３３:４１ꎬ日落时间(北京时间)为下午 １８:１９:１７ꎮ 林等(２０１９) 的方法制作石蜡切片ꎬ利用光学显微
１.２.２ 光合－光响应曲线的测定 试验于 ２０２３ 年 镜观测ꎬ并拍照ꎻ使用 ＣａｓｅＶｉｅｗｅｒ 软件测量上 表
１０ 月 １—６ 日 上 午 ７:００—１０:００ 进 行ꎮ 采 用 Ｌｉ￣ 皮细胞厚度( ｕｐｐｅｒ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓꎬＵＥＴ) 、下
６４００ＸＴ 便携式光合仪( 美国 Ｌｉ￣ｃｏｒ 公司) 进行光 表皮细 胞 厚 度 ( ｌｏｗｅｒ ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓꎬ ＬＥＴ) 、
合－光响应曲线的测定ꎬ测定时选取健康、无病虫 叶 片 厚 度 ( ｌｅａｆ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓꎬ ＬＴ ) 、 叶 肉 厚 度
害的完整叶片ꎬ通过预试验了解其大致饱和光强ꎬ ( ｍｅｓｏｐｈｙｌｌ ｔｈｉｃｋｎｅｓｓꎬＭＴ) ꎮ 每个样品选取 ３ 张切
在饱和光强下诱导 ３０ ｍｉｎ 以激活光合系统ꎮ 用 片ꎬ每个样品随机观察 ５ 个视野ꎬ测定统计各指
ＣＯ 钢 瓶 控 制 浓 度ꎬ 设 置 固 定 ＣＯ 浓 度 为 ４００ 标参数ꎮ
２ ２
￣１
μｍｏｌ ｍｏｌ ꎮ 设 定 光 强 梯 度 为 １ ５００、 １ ２００、 １.２.５.２ 叶片表皮特征 从进行光合测定的植株
(每个物种各选取 ３ 株) 取样ꎬ每株选取与光合指
１ ０００、８００、 ６００、 ４００、 ２００、 １５０、 １００、 ５０、 ２０、 １０、 ０
μｍｏｌｍ ｓ ꎮ 每个物种测定 ３ 株ꎮ 以光量子通 标测定时方位一致的成熟叶片各 ３ 片ꎬ将叶片切
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￣１
量密度(ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐｈｏｔｏｎ ｆｌｕｘ ｄｅｎｓｉｔｙꎬＰＰＦＤ)为 成小块放入 ２.５％的戊二醛溶液中固定ꎬ２４ ｈ 后进
横轴ꎬＰ 为纵轴绘制光合－光响应曲线ꎮ 利用叶子 行乙 醇 逐 级 脱 水 [ ３０％、 ５０％、 ７０％、 ９０％、 １００％
ｎ
飘(２０１０)的光合计算 ４.１.１ 软件的直角双曲线修 ( 其中 １００％为 ２ 次)ꎬ每次时间间隔 １５ ｍｉｎ]ꎬ之后
进行 ＣＯ 临界点干燥和镀金ꎬ利用真空电子扫描电
正模型拟合ꎬ并计算光响应曲线ꎮ ２
１.２.３ 光合－ＣＯ 响应曲线的测定 试验于 ２０２３ 年 镜(ＺＥＩＳＳ ＥＶＯ１８) 观察叶片上表皮、下表皮ꎬ并拍
２
１０ 月 １—６ 日上午 ７:００—１０:００ 进行ꎮ 测量前设 照记 录 ( 潘 李 泼 等ꎬ ２０２３ )ꎮ 使 用 Ａｘｉｏ Ｖｉｓｉｏｎ
置 ６００ μｍｏｌｍ ｓ 的光强对待测叶片进行诱 ＳＥ６４Ｒｅｌ. ４. ９. １ 软 件 观 察ꎬ 并 测 量 气 孔 长 轴
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￣１ (ｓｔｏｍａｔａｌ ｌｅｎｇｔｈꎬＳＬ)、短轴(ｓｔｏｍａｔａｌ ｗｉｄｔｈꎬＳＷ)ꎬ根
导ꎮ 空气流速设为 ０.５ Ｌｍｉｎ ꎬ叶片温度设为 ２８
℃ ꎬ固定光强设为 ６００ μｍｏｌｍ ｓ ꎬＣＯ 浓度梯 据宋杰 等 ( ２０１９) 的 公 式 计 算 气 孔 面 积 ( ｓｔｏｍａｔａｌ
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度设为 ４００、３００、２００、１５０、１００、５０、４００、４００、６００、 ａｒｅａꎬＳＡ)和气孔密度(ｓｔｏｍａｔａｌ ｄｅｎｓｉｔｙꎬＳＤ)ꎮ
８００、１ ０００、１ ２００、１ ５００、２ ０００ μｍｏｌ ｍｏｌ ( 用 １.３ 数据分析
￣１
ＣＯ 钢瓶控制浓度)ꎮ 测定时ꎬ在每个 ＣＯ 下平衡 利用 Ｅｘｃｅｌ ２０１６ 软件对试验结果进行处理ꎬ用
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ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ２６.０ 软件进行单因素方差检验ꎬ采
１５０ ~ １８０ ｓꎬ系统自动记录不同 ＣＯ 浓度下的 Ｐ ꎮ
２ ｎ
每个物种测定 ３ 株ꎮ 以参比室 ＣＯ 浓度( Ｃ ) 为横 用 Ｄｕｎｃａｎ 法进行多重比较ꎬ并对光合特征参数、
２ ｒ
轴、Ｐ 为 纵 轴 绘 制 Ｐ － Ｃ 曲 线 图ꎮ 利 用 叶 子 飘 叶绿素含量和叶片显微结构特征进行相关性分
ｒ
ｎ
ｎ
(２０１０)的光合计算 ４.１.１ 软件的直角双曲线修正 析ꎬ使用 Ｏｒｉｇｉｎ ２０２２ 软件绘图ꎮ
模型拟合ꎬ并计算 ＣＯ 响应曲线的光合参数ꎮ
２
１.２.４ 叶绿素含量的测定 从进行光合测定的植株 ２ 结果与分析
(每个物种各选取 ３ 株)上ꎬ分别采集 ４~８ 枚方位与
光合指标测定时方位一致的成熟叶片ꎬ进行叶绿素 ２.１ ４ 种石斛属植物净光合速率日变化比较
含量的测定ꎮ 用打孔器取 ２０ 片 １ ｃｍ 的小叶片ꎬ将 ４ 种石斛属植物均存在午间净光合速率( Ｐ )
２
ｎ
叶片剪碎后放入 ２５ ｍＬ 容量瓶内ꎬ用 ９５％ 乙醇定 下降的情况(图 １)ꎮ 由图 １ 可知ꎬ喇叭唇石斛和罗
容ꎬ避光静置 ２４ ｈ 后ꎬ用紫外可见分光光度计(美国 河石斛的 Ｐ 呈双峰曲线ꎬ第一个峰值远大于第二
ｎ
Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ 公司) 测定提取液在波长 ６６５ ｎｍ 和 个峰 值 且 二 者 夜 间 Ｐ 为 负 值ꎮ 在 上 午 ８: ００—
ｎ
６４９ ｎｍ 下的吸光值ꎬ根据李合生(２０００)的公式计算 １０:００时段内ꎬ喇叭唇石斛和罗河石斛的 Ｐ 相对较
ｎ
出叶绿素 ａ ( Ｃｈｌａ)、 叶 绿 素 ｂ ( Ｃｈｌｂ)、 总 叶 绿 素 高ꎬ罗河石斛的最大 Ｐ 出现在上午 ８:００ 左右ꎬ喇
ｎ
(Ｃｈｌ) 的 含 量 以 及 叶 绿 素 ａ 与 叶 绿 素 ｂ 的 比 叭唇石斛则出现在上午 １０:００ 左右ꎮ 滇桂石斛和
值Ｃｈｌａ / Ｃｈｌｂꎮ 钩状石斛白天 Ｐ 为正ꎬ夜间 Ｐ 存在为正值的情况ꎮ
ｎ
ｎ
