Page 105 - 《广西植物》2025年第10期

１０ 期 钟楚等: 铝胁迫对穿心莲抗氧化能力和碳氮代谢的影响 １ ８ ３ ５

冲洗干净附着的蛭石和珍珠岩ꎬ再用去离子水将 中ꎬ２００ Ｗ 室温下超声 １ ｈꎮ 将超声后的样品转移
整株冲洗干净ꎬ将根与地上部分离ꎬ装入牛皮纸信 至 １.５ ｍＬ 离心管中ꎬ１２ ０００ ｒｍｉｎ ￣１ 离心 ５ ｍｉｎꎮ
封ꎬ１０５ ℃ 杀青 ３０ ｍｉｎꎬ７５ ℃ 烘干至恒重ꎮ 称重后 取 ０.５ ｍＬ 上清液转移至洁净的离心管中ꎬ之后放

将样 品 粉 碎 成 粉 末ꎮ 称 取 适 量 样 品ꎬ 加 Ｈ ＳＯ ￣ 置在真空离心浓缩仪中ꎬ真空干燥直至无明显可
２ ４
Ｈ Ｏ 在 ２６０ ℃ 下消煮ꎬ采用靛酚蓝比色法测定总 见的液体ꎮ 加入 ０.５ ｍＬ 超纯水ꎬ用移液器反复吹
２ ２
氮含量( 吕伟仙等ꎬ ２００４)ꎮ 取适量样品ꎬ用去离 吸ꎬ使样品充分溶解ꎮ １２ ０００ ｒｍｉｎ 离心 ５ ｍｉｎꎬ
￣１
子水在沸水浴中提取 ３０ ｍｉｎꎬ过滤后采用靛酚蓝 将上清液转移至新的离心管中备用ꎮ
＋ 取 ２００ μＬ 上清液ꎬ加入 ２０ μＬ 正亮氨酸ꎬ混
比色法测定滤液中的铵(ＮＨ )含量ꎮ
４
１. ２. ３ 抗 氧 化 指 标 采 用 Ｂｒｅｎｎａｎ 和 Ｆｒｅｎｋｅｌ 匀ꎮ 加入 １００ μＬ 三乙胺溶液、１００ μＬ 异硫氰酸苯
(１９７７)的方法进行过氧化氢( Ｈ Ｏ ) 含量检测ꎻ采 酯(ＰＩＴＣ) 溶液ꎬ混匀后室温放置 １ ｈꎮ 加 入 ４００
２ ２
用硫代巴比妥酸( ｔｈｉｏｂａｒｂｉｔｕｒｉｃ ａｃｉｄꎬＴＢＡ) 法测定 μＬ 正己烷ꎬ剧烈振荡 １５ ｓꎬ１２ ０００ ｒｍｉｎ 离心 ２
￣１
丙二 醛 ( ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅꎬ ＭＤＡ) 含 量 ( 李 合 生ꎬ ｍｉｎꎮ 取下层 液 上 机 进 行 ＨＰＬＣ 分 析 [ 伍 丰 ＬＣ￣
２０００)ꎻ采用 ＮＢＴ(氮蓝四唑)光还原法测定超氧化 １００ 高效液相色谱仪ꎬ氨基酸专用柱( ２５０ ｍｍ ×
￣１
物歧化酶(ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅꎬＳＯＤ)活性ꎬ以抑制 ４.６ ｍｍꎬ５ μｍ)]ꎮ 流动相 Ａ 为 ０.０５ ｍｏｌＬ 乙酸
ＮＢＴ 光还原反应 ５０％所需的酶量为 １ 个酶活单位 钠水溶液[冰乙酸调节 ｐＨ 值为(６.５０±０.０５)]ꎻ 流
(Ｕ)ꎻ过氧化氢酶( ｃａｔａｌａｓｅꎬＣＡＴ) 活性以分解过氧 动相 Ｂ 为甲醇 ∶ 乙腈 ∶ 水 ＝ ２０ ∶ ６０ ∶ ２０(Ｖ ∶ Ｖ ∶ Ｖ)ꎻ
￣１
化氢使反应溶液在 ２４０ ｎｍ 波长下的吸光值( Ａ ) 进样量 １０ μＬꎬ流速 １.０ ｍＬｍｉｎ ꎬ柱温 ３５ ℃ ꎬ检
２４０
的下降速率表示ꎬ在 １ ｍｉｎ 内减少 ０.１ 的酶量为 １ 测波长 ２５４ ｎｍꎮ
１.３ 统计分析
个酶活单位(Ｕ)ꎮ
１.２.４ 代谢酶活性 参考 Ｚｈｏｎｇ 等(２０１７) 的方法 ３ 个以上处理两两差异比较采用单因素方差
分析ꎬＬＳＤ 法多重比较ꎻ２ 个处理间差异比较采用
测定谷氨酰胺合成酶( ｇｌｕｔａｍｉｎｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅꎬＧＳ)、
谷氨酸合成酶(ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅꎬＧＯＧＡＴ) 和谷氨 Ｓｔｕｄｅｎｔ 双尾 ｔ 检验法ꎬ数据以平均值 ±标准差表
酸脱氢酶( ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅꎬＧＤＨ) 活性ꎻ参 示ꎮ 数据统计分析采用 ＳＰＳＳ １９.０ꎬ直方图绘图采
考吴 良 欢 等 ( １９９８ ) 的 方 法 测 定 谷 草 转 氨 酶 用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２０２３ꎬ热图绘制在基迪奥生物云
(ｇｌｕｔａｍｉｃ￣ｏｘａｌｏａｃｅｔｉｃ ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅꎬＧＯＴ) 和谷丙 转 平台(ｈｔｔｐｓ: / / ｗｗｗ.ｏｍｉｃｓｈａｒｅ.ｃｏｍ / )完成ꎮ
氨 酶 ( ｇｌｕｔａｍｉｃ￣ｐｙｒｕｖｉｃ ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅꎬ ＧＰＴ) 活 性ꎮ
ＧＳ 活性以每小时 ５４０ ｎｍ 处吸光值( Ａ ) 变化 １ ２ 结果与分析
５４０
为 １ 个酶活单位(Ｕ)ꎻＧＯＧＡＴ 和 ＧＤＨ 的活性以每
＋ ２.１ 铝胁迫对穿心莲生长和抗氧化能力的影响
分钟氧化或还原 １ μｍｏｌ 的 ＮＡＤＨ 或 ＮＡＤ 作为 １
３＋
个酶活单位( Ｕ)ꎻＧＯＴ 和 ＧＰＴ 的活性以 １ ｈ 内产 如图 １:Ａ 所示ꎬ随着营养液中 Ａｌ 浓度的增
￣１
生 １ μｍｏｌ 丙酮酸为 １ 个酶活单位(Ｕ)ꎮ 加ꎬ穿心莲的生长逐渐受到抑制ꎮ 在 ５０ ｍｍｏｌＬ
３＋
参考 Ｋｕｌｉｃｈｉｋｈｉｎ 等(２００９) 的方法测定苹果酸 Ａｌ 处理 ７ ｄ 时植株明显受害ꎬ表现为植株矮小ꎬ
３＋ ￣１
酶 ( ｍａｌｉｃ ｅｎｚｙｍｅꎬ ＭＥ) 和 苹 果 酸 脱 氢 酶 ( ｍａｌａｔｅ 花青素积累增加ꎮ 当 Ａｌ 浓度达 １００ ｍｍｏｌＬ
ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅꎬＭＤＨ) 的活性ꎬ以每分钟氧化或还原 时ꎬ植株叶片脱落ꎬ几乎死亡ꎮ 因为该浓度下叶片
＋ 失去活性ꎬ所以不进行取样和分析ꎮ Ｌｉｕ 等(２０２２)
１ μｍｏｌ 的 ＮＡＤＨ 或 ＮＡＤＰ 作为 １ 个酶活单位(Ｕ)ꎮ
－
１.２.５ 有机酸含量 采用试剂盒检测苹果酸和柠 研究发现高浓度的 Ｃｌ 对植物也有伤害作用ꎮ 为
－
檬酸的含量ꎬ试剂盒购自苏州格锐思生物科技有 了进一步验证 Ｃｌ 是否也参与了 ＡｌＣｌ 导致的植物
３
￣１
限公司(货号分别为 Ｇ０８６２Ｆ 和 Ｇ０８６４Ｗ)ꎬ按照产 生长抑制ꎬ采用 ５０ ｍｍｏｌＬ ＡｌＣｌ 、２５ ｍｍｏｌＬ ￣１
３
￣１ ￣１
品说明书进行测定ꎮ Ａｌ ( ＳＯ ) 、７５ ｍｍｏｌＬ Ｋ ＳＯ 和 １５０ ｍｍｏｌＬ
２
４
３
２
４
１.２.６ 游离氨基酸组分 采用高效液相色谱法检 ＫＣｌ 互为对照ꎬ处理 ７ ｄ 后比较植株生长表型ꎮ 结
测 １７ 种游离氨基酸ꎮ 称取 ０.１ ｇ 样品ꎬ加入乙醇 果如图 １:Ｂ 所示ꎬＫ ＳＯ 和 ＫＣｌ 处理的穿心莲植株
２
４
水溶液ꎬ研磨成匀浆ꎮ 用移液器吸取 １ ｍＬ 匀浆液 生长与对照没有明显差别ꎬ而 ＡｌＣｌ 和 Ａｌ ( ＳＯ ) ３
４
３
２
至玻璃管中ꎬ充氮气 ５ ｍｉｎ 后密闭ꎬ放置在超声仪 处理后植株生长明显受到抑制ꎬ 表明 ＡｌＣｌ 处理对
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