Page 8 - 《广西植物》2025年第10期
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图 １ 番茄叶片感染 ＴＳＷＶ 后呈现的颜色表型
Ｆｉｇ. １ Ｃｏｌｏｒ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ｌｅａｖｅｓ ａｆｔｅｒ ＴＳＷＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ＴＳＷＶ￣Ｎ 质粒标准品使用ꎮ 将质粒标准品用无核 １.２.２ 叶片组织叶绿体超微结构的观察 将叶片
酸酶的水进行 １０ 倍梯度稀释ꎬ获得终浓度为 １.５× 剪下并切成 １ ｍｍ × ３ ｍｍ 的长方形小块ꎬ随后放
１０ ~ １.５×１０ ｃｏｐｉｅｓμＬ 的 ８ 个质粒样品ꎮ 随后 入 ２.５％戊二醛中固定ꎬＰＢＳ 洗涤后放入 １％ 锇酸
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￣１
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使用湖南艾科瑞生物工程有限公司的 ｑＰＣＲ 试剂 中固定ꎮ 洗涤后经酒精梯度(３０％→５０％→７０％→
盒ꎬ按 照 说 明 书 在 实 时 荧 光 定 量 ＰＣＲ 仪 ( ＡＢＩ ８０％→９０％ →９５％ →１００％ →１００％) 脱水ꎬ再放入
ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ６)上进行定量 ＰＣＲ 扩增ꎬ每个浓度设 丙酮溶液中ꎬ随后在 Ｓｐｕｒｒ 包埋剂中包埋ꎬ高温聚
置 ４ 个重复ꎮ 目的样品叶片使用湖南艾科瑞生物 合完成后进行超薄切片ꎬ最后进行醋酸双氧铀及
工程有限公司的植物总 ＲＮＡ 提取试剂盒及逆转 柠檬酸铅染色ꎬ洗涤烤干后置于 ＦＥＩ 透射电子显
录试剂盒进行总 ＲＮＡ 提取及逆转录ꎬ严格统一总 微镜( ＴａｉｃｎａｉＧ２ Ｓｐｉｒｉｔ) 下观察组织叶肉细胞中的
ＲＮＡ 逆转录初始量为 ２ μｇꎬ逆转录后将 ｃＤＮＡ 稀 叶绿体(Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６)ꎮ
释 １０ 倍进行荧光定量 ＰＣＲ 检测ꎮ 将样品的 Ｃｔ 值 １.２.３ 主要色素物质含量的测定 植物叶绿素、类
代入标准曲线方程中计算出 ＴＳＷＶ￣Ｎ 基因的拷贝 胡萝卜素检测试剂盒均购于北京盒子生工科技有
数ꎬ每个样品重复 ４ 次ꎮ 限公司ꎮ 按照说明书操作步骤测定各组叶片样品
