Page 9 - 《广西植物》2025年第10期

１０ 期 李妤等: ＴＳＷＶ 侵染番茄引起紫脉的叶绿体超微结构病变和质体色素物质代谢的关系 １ ７ ３ ９

中叶绿素 ａ、叶绿素 ｂ、总叶绿素及类胡萝卜素的含 表 １ 引物序列
量ꎬ每样品设置 ３ 次生物学重复ꎮ Ｔａｂｌｅ １ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ
１.２.４ 实时荧光定量 ＰＣＲ( ＲＴ￣ｑＰＣＲ) 检测质体色 引物名称 序列(５′－３′)
素代谢相关基因 使用湖南艾科瑞生物工程有限 Ｐｒｉｍｅｒ ｎａｍｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′－３′)
公司的植物总 ＲＮＡ 提取试剂盒及逆转录试剂盒 ＺＤＳ￣Ｆ ＴＴＧＧＡＧＣＧＴＴＣＧＡＧＧＣＡＡＴ
进行总 ＲＮＡ 提取及逆转录ꎬＲＮＡ 逆转录初始量统 ＺＤＳ￣Ｒ ＡＧＡＡＡＴＣＴＧＣＡＴＣＴＧＧＣＧＴＡＴＡＧＡ
一为 ２ μｇꎬ逆转录后将 ｃＤＮＡ 稀释 １０ 倍进行质体 ＺＩＳＯ￣Ｆ ＴＡＴＧＡＧＧＡＴＴＡＣＣＡＧＧＣＡＴＣＣ
色素代谢相关基因( 类胡萝卜素合成途径关键酶 ＺＩＳＯ￣Ｒ ＡＣＡＧＣＧＴＧＴＧＡＧＣＴＡＡＧＣＡＣ

基 因 ＺＤＳ、 ＺＩＳＯ、 ＰＳＹ１、 ＨＱＴ、 ＺＥＰ、 ＰＤＳ、 ＣＲＴＩＳＯ、 ＰＳＹ１￣Ｆ ＴＧＧＣＣＣＡＡＡＣＧＣＡＴＣＡＴＡＴＡ
ＬＣＹＢ、ＬＣＹＥ) 及 色 素 代 谢 转 录 调 控 因 子 ( ＡＰ２ａ、 ＰＳＹ１￣Ｒ ＣＡＣＣＡＴＣＧＡＧＣＡＴＧＴＣＡＡＡＴＧ
ＭＹＢ１２、ＰＩＦ１ａ) 的相对荧光定量 ＰＣＲ 检测ꎬ引物 ＨＱＴ￣Ｆ ＣＣＡＴＣＣＡＣＴＴＣＡＴＣＡＡＣＡＣＧ

序列见表 １ꎮ ＨＱＴ￣Ｒ ＣＣＣＴＣＡＴＴＴＴＴＧＧＡＣＴＴＧＧＡ
ＺＥＰ￣Ｆ ＴＴＧＧＧＴＴＣＴＡＧＧＡＧＧＣＡＡＴＧ
２ 结果与分析 ＺＥＰ￣Ｒ ＣＣＣＧＣＡＧＧＴＡＡＡＡＧＴＡＡＣＣＡ
ＰＤＳ￣Ｆ ＧＴＧＣＡＴＴＴＴＧＡＴＣＡＴＣＧＣＡＴＴＧＡＡＣ
２.１ ＴＳＷＶ￣Ｎ 基因实时荧光定量 ＰＣＲ 体系的建立 ＰＤＳ￣Ｒ ＧＣＡＡＡＧＴＣＴＣＴＣＡＧＧＡＴＴＡＣＣ
２ ９ ＣＲＴＩＳＯ￣Ｆ ＴＴＴＴＧＧＣＧＧＡＡＴＣＡＡＣＴＡＣＣ
质粒标准品浓度为 １.５×１０ ~ １.５×１０ ｃｏｐｉｅｓ
μＬ 范围内ꎬＣｔ 值与质粒标准品浓度之间呈现出 ＣＲＴＩＳＯ￣Ｒ ＧＡＡＡＧＣＴＴＣＡＣＴＣＣＣＡＣＡＧＣ
￣１
良好 的 线 性 关 系 ( 图 ２ )ꎬ 标 准 曲 线 斜 率 为 ＬＣＹＢ￣Ｆ ＴＣＧＴＴＧＧＡＡＴＣＧＧＴＧＧＴＡＣＡＧ
－２.９３３ ７ꎬ系数 Ｒ ＝ ０.９９１ ２ꎬ扩增效率为 １００％ꎬ标 ＬＣＹＢ￣Ｒ ＡＧＣＴＡＧＴＧＴＣＣＴＴＧＣＣＡＣＣＡＴ
２
准曲线方程为 ｙ ＝ －２.９３３ ７ｘ＋３６.８８４ꎮ 该标准曲线 ＬＣＹＥ￣Ｆ ＧＧＡＴＣＡＧＣＡＧＴＣＴＡＡＧＣＴＴＴＣＴＧ
可用于后续 ＴＳＷＶ￣Ｎ 基因含量的测定ꎮ ＬＣＹＥ￣Ｒ ＣＧＡＴＴＡＣＣＡＣＴＡＡＡＴＣＣＡＧＴＡＣＧ
２.２ 不同紫脉程度叶片中 ＴＳＷＶ￣Ｎ 基因拷贝数的 ＡＰ２ａ￣Ｆ ＡＧＴＧＧＧＧＡＡＣＡＡＡＡＴＴＧＡＣＧ
变化 ＡＰ２ａ￣Ｒ ＴＧＣＴＧＣＡＴＧＴＧＣＴＧＴＡＴＣＡＡ
无症叶片中也存在极少量的 ＴＳＷＶ￣Ｎ 基因拷 ＭＹＢ１２￣Ｆ ＧＣＣＡＧＣＴＴＧＴＧＡＴＡＧＴＧＣＣＡＴ
贝数ꎬ而早期、中期、中后期、晚期叶片中的 ＴＳＷＶ￣ ＭＹＢ１２￣Ｒ ＡＡＧＧＣＴＴＣＣＣＴＴＧＧＣＣＴＣＴＡ
４
Ｎ 基因 拷 贝 数 逐 渐 增 加ꎬ 依 次 为 １. ９ × １０ 、５. ３ × ＰＩＦ１ａ￣Ｆ ＴＣＣＡＴＡＴＣＡＧＣＡＧＴＴＴＴＴＴＧＧＴＣＴＣ
４ ４ ５
１０ 、９.１×１０ 、１.１×１０ 拷贝数ꎬ晚期叶片中 ＴＳＷＶ￣ ＰＩＦ１ａ￣Ｒ ＧＣＴＧＣＴＧＣＣＧＧＡＴＴＴＡＣＴＡＴＴＡＣ
Ｎ 基因拷贝数约为早期叶片的 ５ 倍ꎬ约为中期叶片 β￣ＡＣＴＩＮ￣Ｆ ＣＣＴＣＡＧＣＡＣＡＴＴＣＣＡＧＣＡＧ
的 ２ 倍(图 ３)ꎮ β￣ＡＣＴＩＮ ￣Ｒ ＣＣＡＣＣＡＡＡＣＴＴＣＴＣＣＡＴＣＣＣ
２.３ 紫脉叶片中叶绿体超微结构病变分析
ＴＳＷＶ 侵染的番茄植株不同程度紫脉叶片中
来越大ꎻ晚期的叶绿体结构畸变严重ꎬ基质和基粒
叶绿体超微结构与无症叶片相比发生了明显的变
几乎完全解体消失ꎬ内含大量大小不一的质体小
化(图 ４)ꎮ 无症叶片叶绿体呈椭圆形ꎬ类囊体片
球(直径为 ３００ ~ ５００ ｎｍ)ꎮ 可见与早期、中期、中
层、基粒片层和基质片层清晰可见、垛叠整齐ꎬ紧
贴细胞质膜沿细胞周缘排列整齐有序ꎬ在基质中 后期相比ꎬ晚期的质体小球电子密度明显降低ꎬ除
分布有大小各异的不同电子致密的质体小球( 直 表面仍然呈黑色外ꎬ内部变浅至灰色ꎮ
不同紫脉叶片中叶绿体的超微结构特征指标
径为 ５０ ~ １００ ｎｍ)ꎻ早期紫脉叶片的叶绿体膨大、
片层结构疏松、间隙变大、淀粉粒增多变大ꎬ质体 分析显示ꎬ与无症组相比ꎬ不同紫脉程度叶片的叶
小球( 直径为 １００ ~ ２００ ｎｍ) 的数量增多ꎬ体积增 绿体中质体小球的数量和直径及基粒数差异显
大ꎻ中期和中后期紫脉叶片的叶绿体类囊体片层 著ꎻ随着紫脉程度的加深ꎬ叶绿体中质体小球的数
结构解体消失ꎬ质体小球(直径为 ２００ ~ ３００ ｎｍ) 的 量及直径呈现逐渐增加的趋势ꎬ而基粒数呈逐渐
数量和直径逐渐增加ꎬ淀粉粒数量增多ꎬ 体积也越 减少的趋势(表 ２)ꎮ