Page 138 - 《广西植物》2025年第2期

３ ４ ０ 广 西 植 物 ４５ 卷
式中: Ａ 样品 为实验组吸光度ꎻＡ 对照 为用蒸馏水 １.３ 数据分析
代替 ＤＰＰＨ 溶液的吸光度ꎬ按上述方法测定的吸 采用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２０１６ 软件进行数据分析ꎮ
光度ꎻＡ 空白 为用无水乙醇代替多糖溶液ꎬ按上述方 运用 Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ８ 软件进行单因素方差分析
法测定的吸光度ꎮ ( ｏｎｅ￣ｗａｙ ＡＮＯＶＡ ) 和 多 重 比 较 ( ＬＳＤ )ꎮ 采 用
１.２.３. ３ ＡＢＴＳ 自 由 基 清 除 能 力 的 测 定 配 制 ７ Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ８ 和 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ ＰｏｗｅｒＰｏｉｎｔ ２０１６ 软件
ｍｍｏｌＬ ＡＢＴＳ 水溶液和 ４.９ ｍｍｏｌＬ 过硫酸钾 进行数据统计和作图ꎮ
￣１
￣１
溶液各 １０ ｍＬꎬ将其等体积混合ꎬ于室温条件下暗
处反应 １６ ｈꎮ 用磷酸盐缓冲液稀释至 Ａ 在 ０.７ ２ 结果与分析
７３４ ｎｍ
左右ꎮ 分别取 ０.１ ｍＬ 浓度为 ０.５、１、２ ｍｇｍＬ 的
￣１
西南手参醇提物溶液ꎬ加入 ３.９ ｍＬ 制得的 ＡＢＴＳ ２.１ 西南手参醇提物中天麻素的含量
稀 释 溶 液ꎬ 混 匀ꎬ 静 置 ６ ｍｉｎꎬ 运 用 ＭＤ / 如图 １:Ａ 所示ꎬ在色谱条件下天麻素的色谱
ＳｐｅｃｔｒａＭａｘＭ２ 多功能细胞分析仪分 别 在 ５１０ ｎｍ 峰分离度良好ꎬ按 １.２.２ 方法测得天麻素的回归方
和 ７３４ ｎｍ 处测吸光度ꎮ 以维生素 Ｃ 作为阳性对 程为 Ｙ ＝ ３ × １０ Ｘ ＋ ２１ ０８５ꎬｒ ＝ ０.９９９ ８ꎮ 进样量在
７
照ꎮ 每个处理重复 ３ 次ꎮ ＡＢＴＳ 自由基清除率计 ０.３ ~ ４.２ μｇ 范围内与峰面积呈良好线性关系ꎮ 如
公式(Ｔａｎｇ ＆ Ｌｉｕꎬ ２００７): 图 １:Ｂ 所示ꎬ天麻素在西南手参中含量ꎬ其质量分
￣１
ＡＢＴＳ 自由基清除率(％)＝ (１－Ａ / Ａ ) ×１００ 数为 ２.５ ｍｇｇ ꎬ西南手参醇提物中所含天麻素
１ ０
(３) 为 ０.２５％ꎮ
式中: Ａ 为实验组吸光度ꎻＡ 为用蒸馏水代替 ２.２ 西南手参醇提取物的体外抗氧化活性
１ ０
西南手参醇提取物具有较强的体外抗氧化能
西南手参醇提物溶液ꎬ按上述方法测定的吸光度ꎮ
＋
１.２.４ 细胞的培养及增殖抑制率检测 力ꎬ对羟基自由基( 图 ２:Ａ)、ＡＢＴＳ 自由基( 图 ２:
１. ２. ４. １ 细 胞 的 培 养 人 肝 癌 ＳＭＭＣ￣７７２１ 细 胞 Ｂ)和 ＤＰＰＨ 自由基(图 ２:Ｃ)的清除率随着浓度的
增加呈上升趋势ꎬ２.０ ｍｇｍＬ 的西南手参醇提取
￣１
(Ｈａｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１９) 和 ＨｅｐＧ￣２ 细 胞 ( Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ
物对羟基自由基、ＡＢＴＳ 自由基和 ＤＰＰＨ 自由基的
＋
２０１９)、人乳腺癌 ＭＤＡ￣ＭＢ￣２３１ 细胞( Ｃａｎｅｒ ｅｔ ａｌ.ꎬ
２０２１) 以 及 人 胶 质 瘤 Ｕ２５１ 细 胞 ( Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ 清除率分别为 ８１.６８％、１９.９４％和 ４８.１６％ꎬ表明西
￣１ 南手参醇提取物对羟基自由基的清除具有显著
２０２０)在添加 １０％ ＦＢＳ、１００ ＵｍＬ 青霉素和 ０.１
ｍｇｍＬ 链霉素的 ＤＭＥＭ 培养基中培养ꎮ 人胃癌 作用ꎮ
￣１
ＢＧＣ￣８２３ 细胞( Ｈｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６) 和 ＭＫＮ￣４５ 细胞 天麻素具有很强的清除 羟 基 自 由 基 的 能 力
￣１
(Ｎａｇｈａｓｈｐｏｕｒ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２３) 在添加 １０％ ＦＢＳ、１００ (图 ２:Ｄ)ꎬ在浓度分别为 １.２５、２.５、５.０ μｇｍＬ
＋
￣１
￣１
ＵｍＬ 青霉素和 ０.１ ｍｇｍＬ 链霉素的 ＲＰＭＩ￣ 时对 ＤＰＰＨ 自 由 基 和 ＡＢＴＳ 自 由 基 均 无 清 除
１６４０ 培养基中培养ꎮ 培养环境为 ３７ ℃ 、５％ ＣＯ 能力ꎮ
２
２.３ 西南手参醇提取物对人肝癌细胞活率的影响
和 ５％饱和湿度ꎮ
１.２.４.２ 细胞活率检测 将细胞按照每孔 １×１０ 个细 如图 ３ 所 示ꎬ 西 南 手 参 醇 提 物 对 人 肝 癌
５
胞的密度接种至 ９６ 孔板ꎬ孵育过夜ꎮ 将含终浓度为 ＳＭＭＣ￣７７２１ 细胞和 ＨｅｐＧ￣２ 细胞具有抑制作用ꎬ并
０、１、２、３、４、５ ｍｇｍＬ 的西南手参醇提物培养基放 表现为浓度－时间依赖效应ꎮ 在同一时间处理下ꎬ
￣１
入 ９６ 孔板中ꎬ每个浓度 ４ 次重复ꎬ置于 ５％的 ＣＯ 培 两种人肝癌细胞活率随着西南手参醇提取物浓度
２
养箱ꎬ３７ ℃培养 ２４、４８、７２ ｈ 后每孔加入 １０ μＬ ＭＴＴ 升高ꎬ呈现出下降趋势ꎮ 在相同浓度下ꎬ随着处理
试剂ꎬ３７ ℃静置 ４ ｈꎬ吸去上清液ꎬ每孔加入 １５０ μＬ 时间的延长ꎬ细胞的存活率也呈现出下降趋势ꎮ
ＤＭＳＯ 溶液ꎬ于 ４９０ ｎｍ 处测吸光度ꎮ 每个处理重复 西南手参醇提物浓度高于 ３ ｍｇｍＬ 时ꎬ与对照
￣１
４ 次ꎮ 计算细胞存活率ꎬ计算公式(Ｈｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６ ꎻ 组相比均具有显著性差异(Ｐ<０.０５)ꎮ
Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０ꎻ Ｎａｇｈａｓｈｐｏｕｒ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２３): ２.４ 西南手参醇提取物对人胃癌细胞活率的影响
细胞存活率(％)＝ (Ａ －Ａ ) / (Ａ －Ａ )×１００ 西南手 参 醇 提 物 对 人 胃 癌 ＢＧＣ￣８２３ 细 胞 和
样品 空白 阴性 空白
式中: Ａ 空白 是无细胞组的吸光度ꎻ Ａ 阴性 是未加 ＭＫＮ￣４５ 细胞具有明显的抑制作用ꎬ并具有浓度－
药处理组的吸光度ꎮ 时间依赖效应( 图 ４) ꎮ 在同一时间处理下ꎬ 细胞