Page 40 - 《广西植物》2025年第7期
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1 2 3 2                                广  西  植  物                                         45 卷
                                                               B)显示ꎬ二级结构都具有典型的茎环状发夹结构ꎬ
            2  结果与分析                                           都具有稳定的自由能ꎮ miR167 成熟体均位于发
                                                               夹结构 5′端上臂ꎬ保守性较强ꎬ由于序列差异ꎬ二
            2.1 Tae ̄miR167 家族序列鉴定                              级结构环处差异较为明显ꎮ
                 从数据库中去冗余后得到 Tae ̄miR167 家族共                    2.2 Tae ̄miR167 成熟体表达分析

            18 个成员ꎬ分别于 5A、5B、5D 染色体分布各 4 个ꎬ                        不同器官表达分析显示ꎬTae ̄miR167 的 3 种
            4A、4D、6A、6D 染色体各 1 个ꎬ6B 染色体 2 个( 表                 成熟体在检测的小麦器官中都有表达ꎬ其相对表

            2)ꎮ 该 家 族 成 熟 区 序 列 分 别 为 Tae ̄miR167a              达量在根、叶和种子中较高ꎬ其次是穗和茎( 图 2:
            ( UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUA )、 Tae ̄miR167b             A-C)ꎮ 不同逆境胁迫处理下 qRT ̄PCR 表达结果
            ( UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUGA )            和    Tae ̄    显示ꎬTae ̄miR167 成熟体可响应干旱和低温等胁
            miR167c ( UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUGC ) 3 种             迫处理 ( 图 2:D -F)ꎮ 其中ꎬ相比未处理的对照
            类型ꎬ分别有 9 个、5 个、4 个成员ꎮ 3 个序列长度                      组ꎬTae ̄miR167b 在低温胁迫下表达上调 2.5 倍以
            分别为 21、22、22 ntꎬ仅在第 21 位、第 22 位的碱基                 上ꎬTae ̄miR167c 在 PEG 模拟的干旱胁迫下表达
            存在差异( 图 1:A)ꎮ 随机取 3 种成熟序列对应                        上调 3.5 倍左右ꎮ 这表明 Tae ̄miR167 可能在小麦
            miR167 前体序列做二级结构分析ꎮ 结果( 图 1:                       逆境胁迫响应中发挥潜在功能ꎮ


                                          表 2  Tae ̄miR167 染色体定位及成熟序列
                                 Table 2  Chromosome location and mature sequence of Tae ̄miR167
                 miRNA 名称          成熟区序列类型                    染色体定位                      miRNA 成熟序列
                 miRNA name    Type of mature region sequence  Chromosome location     miRNA mature sequence
                Tae ̄miR167 ̄a        Tae ̄miR167b         4A: 19582968 ̄19583096( ̄)   UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUGA
                Tae ̄miR167 ̄b        Tae ̄miR167b        4D: 447643807 ̄447643944( +)  UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUGA
                Tae ̄miR167 ̄c        Tae ̄miR167b         5A: 53588813 ̄53588907( ̄)   UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUGA
                Tae ̄miR167 ̄d        Tae ̄miR167a         5A: 53591846 ̄53591932( ̄)    UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUA
                Tae ̄miR167 ̄e        Tae ̄miR167a         5A: 580934152 ̄580934233( ̄)  UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUA
                Tae ̄miR167 ̄f        Tae ̄miR167a         5A: 620289755 ̄620289877( ̄)  UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUA
                Tae ̄miR167 ̄g        Tae ̄miR167a         5B: 66743165 ̄66743262( +)   UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUA
                Tae ̄miR167 ̄h        Tae ̄miR167b         5B: 66745758 ̄66745852( +)  UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUGA
                Tae ̄miR167 ̄i        Tae ̄miR167a         5B: 566674017 ̄566674110( ̄)  UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUA
                Tae ̄miR167 ̄j        Tae ̄miR167a         5B: 614463462 ̄614463584( ̄)  UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUA
                Tae ̄miR167 ̄k        Tae ̄miR167b         5D: 63632608 ̄63632702( ̄)   UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUGA
                Tae ̄miR167 ̄l        Tae ̄miR167a         5D: 63635086 ̄63635172( ̄)    UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUA
                Tae ̄miR167 ̄m        Tae ̄miR167a         5D: 460745849 ̄460745928( ̄)  UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUA
                Tae ̄miR167 ̄n        Tae ̄miR167a         5D: 496357742 ̄496357864( ̄)  UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUA
                Tae ̄miR167 ̄o        Tae ̄miR167c        6A: 149923007 ̄149923139( +)  UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUGC

                Tae ̄miR167 ̄p        Tae ̄miR167c         6D: 122258446 ̄122258573( ̄)  UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUGC
                Tae ̄miR167 ̄q        Tae ̄miR167c         6B: 331581309 ̄331581455( ̄)  UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUGC
                Tae ̄miR167 ̄r        Tae ̄miR167c         6B: 14030441 ̄214030593( ̄)  UGAAGCUGCCAGCAUGAUCUGC


            2.3 小麦 Tae ̄miR167c 前体克隆与过表达株系构建                    6A: 149923007-149923139) 序列为中心ꎬ从上下
                 为进一步研究 Tae ̄miR167c 对干旱胁迫响应                    游各取 400 bpꎬ设计引物进行 Tae ̄miR167c 前体序
            功能ꎬ在 小 麦 基 因 组 以 Tae ̄miR167c ( 位 于 小 麦             列克隆ꎮ 克隆序列经过测序鉴定正确后构建过表
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