Page 117 - 《广西植物》2026年第1期

１ 期 袁媛等: 太白贝母种子低温萌发过程中 Ｃ３Ｈ 基因家族鉴定及表达分析 １ １ ３

Ａ. 胚率约 １２％ꎻ Ｂ. 胚率约 ２５％ꎻ Ｃ. 胚率约 ５０％ꎻ Ｄ. 胚率约 ９０％ꎻ Ｅ. 种胚突破种皮 １~ ３ ｍｍꎮ 下同ꎮ
Ａ. Ｅｍｂｒｙｏ ｒａｔｅ ｉｓ ａｂｏｕｔ １２％ꎻ Ｂ. Ｅｍｂｒｙｏ ｒａｔｅ ｉｓ ａｂｏｕｔ ２５％ꎻ Ｃ. Ｅｍｂｒｙｏ ｒａｔｅ ｉｓ ａｂｏｕｔ ５０％ꎻ Ｄ. Ｅｍｂｒｙｏ ｒａｔｅ ｉｓ ａｂｏｕｔ ９０％ꎻ Ｅ. Ｓｅｅｄ ｅｍｂｒｙｏ
ｂｒｅａｋｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｓｅｅｄ ｃｏａｔ ｂｙ １－３ ｍｍ. Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ.
图 １ 太白贝母种胚发育的 ５ 个时期
Ｆｉｇ. １ Ｆｉｖｅ ｓｔａｇｅｓ ｏｆ ｓｅｅｄ ｅｍｂｒｙｏ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｉｎ Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａ ｔａｉｐａｉｅｎｓｉｓ

表 １ 实时荧光定量 ＰＣＲ 引物
Ｔａｂｌｅ １ Ｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ
基因名称 基因 ＩＤ 正向引物 反向引物
Ｇｅｎｅ ｎａｍｅ Ｇｅｎｅ ＩＤ Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ
ＦｔＣ３Ｈ２２ ｃｌｕｓｔｅｒ２９７０４￣ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ５８５３６＿ｃ０＿ｇ１＿ｉ１ ＣＴＴＣＣＣＴＴＧＣＡＧＧＴＣＣＣＡＴＴ ＧＴＡＧＧＡＧＣＧＴＴＧＴＣＧＣＡＣＴＡ
ＦｔＣ３Ｈ３５ ｃｌｕｓｔｅｒ７１４１￣ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ７３９＿ｃ０＿ｇ１＿ｉ３ ＡＴＧＣＴＧＣＴＧＣＴＧＧＴＡＡＣＴＧＴ ＡＡＧＣＡＣＡＣＧＧＴＣＣＡＡＧＣＡＴＡ
ＦｔＣ３Ｈ３６ ｃｌｕｓｔｅｒ７５７８７￣ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ８３６２０＿ｃ０＿ｇ１＿ｉ１ ＡＴＴＣＴＣＣＣＡＡＡＴＧＣＡＧＣＣＣＡ ＣＡＴＴＣＧＡＡＡＣＣＧＡＡＣＣＣＴＧＣ
ＦｔＣ３Ｈ４０ ｃｌｕｓｔｅｒ６１３１￣ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ８６７３＿ｃ０＿ｇ２＿ｉ５ ＡＡＧＡＧＣＣＣＴＧＣＣＧＴＡＡＣＴＴＣ ＧＧＣＣＴＣＴＴＴＣＧＡＴＴＧＣＧＡＡＣ
ＦｔＣ３Ｈ４６ ｃｌｕｓｔｅｒ８９８５￣ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ２３１７＿ｃ０＿ｇ１＿ｉ１６ ＡＡＧＡＡＣＡＧＣＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＣ ＣＴＧＴＴＧＣＡＧＧＡＴＣＣＴＴＴＧＣＧ

化树、保守结构域和保守氨基酸基序的综合绘图ꎮ 表 ２ 实时荧光定量 ＰＣＲ 反应体系
１.２.７ 太白贝母候选 Ｃ３Ｈ 基因在 ＧＡ 和 ＡＢＡ 处理 Ｔａｂｌｅ ２ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ
３
下的表达模式分析 在转录组数据分析与注释的 试剂 Ｒｅａｇｅｎｔ 剂量 Ｄｏｓｅ (μＬ)
基础上ꎬ利用转录组数据挑选出太白贝母低温种 模板(ｃＤＮＡ) Ｔｅｍｐｌａｔｅ(ｃＤＮＡ) ０.５
子萌发过程中 ５ 个阶段表达水平最高的 ５ 个 Ｃ３Ｈ 正向引物 Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ ０.４
基因ꎬ利用 ＮＣＢＩ 的 Ｐｒｉｍｅｒ￣ＢＬＡＳＴ 设计特异性引 反向引物 Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ ０.４
物(表 １)ꎬ进行实时荧光定量 ＰＣＲ 实验ꎬ并将得到 双蒸水(ｄｄＨ ２ Ｏ) Ｄｏｕｂｌｅ ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ(ｄｄＨ ２ Ｏ) ８.７
２×ＣｈａｍＱ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＳＹ ＢＲ ｑＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ １０
的相对表达量数据进行整理ꎬ使用 ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ
８.３.０ 软件中的 ｔ 检验方法比较检验处理间差异显
表 ３ 实时荧光定量 ＰＣＲ 反应程序
著性并绘制图表ꎮ
Ｔａｂｌｅ ３ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ
(１)实时荧光定量 ＰＣＲ 反应体系构建:使用
反应温度 反应时间 循环圈数
反转录 ｃＤＮＡ 和相关引物进行体系构建(表 ２)ꎬ配 反应步骤
Ｒｅａｃｔｉｏｎ ｓｔｅｐ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｎｕｍｂｅｒ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ (℃ ) ｔｉｍｅ ｏｆ ｃｙｃｌｅｓ
置过程在冰中进行ꎮ
(２)实时荧光定量 ＰＣＲ 反应程序:对配置好 预变性 Ｐｒｅ￣ｄｅｎａｔｕｒａｔｉｏｎ ９５ ３ ｍｉｎ ４０
－ΔΔＣ ｔ 法进 变性 Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ９５ １０ ｓ
的体系进行上机操作( 表 ３)ꎬ最终通过 ２
行表达量计算ꎮ 每次试验均进行 ３ 次生物学重 吸收荧光值 ６０ ３０ ｓ
Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｖａｌｕｅ
９５ １５ ｓ
复ꎬ将均一化处理后的数据ꎬ使用 ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ
建立溶解曲线 ６０ １ ｍｉｎ
８.３.０ 软件中的 ｔ 检验方法比较检验处理间差异显
Ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ
９５ １ ｓ
著性并绘制图表ꎮ