Page 148 - 《广西植物》2026年第3期
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５ ２ ４ 广 西 植 物 ４６ 卷
１.４.５ 测定项目 行差异显著性检验ꎬ置信区间设定为 ９５％ꎮ 当 Ｐ<
１.４.５.１ 单株生物量测定 除去两面针表面泥土并 ０.０５ 时ꎬ 认 为 数 据 差 异 具 有 统 计 学 意 义ꎮ 使 用
洗净ꎬ用电子天平测量根、茎、叶鲜重ꎮ 将根、茎、 ＵＳＥＡＲＣＨ 软件 进 行 ＯＴＵ 聚 类ꎬ获 得 ＯＴＵ 数 据ꎮ
叶于 ７５ ℃ 中烘干至恒重ꎬ测定其干重ꎮ 利用 Ｒ 语 言 工 具 完 成 土 壤 微 生 物 主 成 分 分 析
１.４.５.２ 有效成分含量测定 清洗两面针根部ꎬ于 (ｐｒｉｎｃｉｐａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓꎬＰＣＡ)、物种组成柱状
７５ ℃ 中烘干至恒重ꎬ粉碎过 ６０ 目筛ꎮ 参考谢泽碧 图绘制和冗余分析(ｒｅｄｕｎｄａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓꎬＲＤＡ)ꎮ
等(２０２３)优化后的方法测定氯化两面针碱和白屈
菜红碱的含量ꎮ ２ 结果与分析
１.４.５.３ 土壤理化性质和酶活性的测定 参照姜霞
等(２０２５)的方法:采用 ｐＨ 计法测定土壤 ｐＨ 值ꎻ ２.１ 菌株 Ｙ１１８ 促生能力检测
采用重铬酸钾容量法测定土壤有机质ꎻ采用碱解 由图 １ 可知ꎬ菌株 Ｙ１１８ 能在阿须贝氏无氮培
扩散法测定土壤碱解氮ꎻ采用碳酸氢钠浸提－钼锑 养基上正常生长ꎬ表明其具有一定的固氮能力ꎻ在
抗分光光度法测定土壤速效磷ꎻ采用乙酸铵溶液 解钾培养基上未见透明圈ꎬ表明其不具有解钾能
浸提－火焰光度计法测定土壤速效钾ꎻ采用苯酚 力ꎻ在纤维素刚果红培养基和无机磷培养基上出
钠－次氯酸钠比色法测定脲酶活性ꎻ采用 ３ꎬ５ －二 现无色透明圈ꎬ表明其具有一定的产纤维素酶和
硝基水杨酸比色法测定蔗糖酶活性ꎻ采用紫外分 解磷能力ꎮ
光光度 法 测 定 过 氧 化 氢 酶 活 性ꎮ 参 照 刘 莹 等 ２.２ 菌剂 Ｙ１１８ 对两面针单株生物量的影响
(２０２５)的方法ꎬ采用磷酸苯二钠比色法测定磷酸 由表 １ 可知ꎬ与 ＣＫ 组相比ꎬ各处理组单株生
酶活性ꎮ 物量均显著增加(Ｐ<０.０５)ꎮ 叶鲜重、叶干重、根鲜
１.４.５.４ 土壤微生物基因组 ＤＮＡ 提取 委托生工 重和 根 干 重 均 在 Ｔ３ 处 理 时 最 大ꎬ 升 幅 分 别 为
生物工程( 上海) 股份有限公司完成ꎮ 参阅 Ｅ. Ｚ. １１８.４％、７３.５％、１９２.２％、８９.４％ꎻ茎鲜重在 Ｔ２ 处
ＴＭ Ｍａｇ￣Ｂｉｎｄ Ｓｏｉｌ ＤＮＡ Ｋｉｔ 试剂盒说明书ꎬ从土 理时最大ꎬ升幅为 ５９.５％ꎻ茎干重在 Ｔ１ 处理时最
Ｎ.Ａ
壤样品中提取 ＤＮＡꎮ 在琼脂糖凝胶上检测提取的 大ꎬ升幅为 ５４.３％ꎮ 这表明菌剂 Ｙ１１８ 能促进两面
®
基因组 ＤＮＡ 的浓度和完 整 性ꎮ 使 用 Ｑｕｂｉｔ ４. ０ 针生物量的积累ꎬ其中以 Ｔ３ 处理最佳ꎮ
ＤＮＡ 检测试剂盒对基因组 ＤＮＡ 进行准确定量ꎬ以 ２.３ 菌剂 Ｙ１１８ 对两面针有效成分含量的影响
确定 ＰＣＲ 反应需加入的 ＤＮＡ 量ꎮ 扩增细菌 １６Ｓ 氯化两面针碱和白屈菜红碱的回归方程分别
２
ｒＤＮＡ 片段的引物序列为 ３４１Ｆ(ＣＣＴＡＣＧＧＧＮＧＧＣ 为 Ｙ ＝ ５５.６０４Ｘ－１.９７６(Ｒ ＝ ０.９９９ ８)、Ｙ ＝ ４９.９２２Ｘ＋
２
ＷＧＣＡＧ)、８０５Ｒ(ＧＡＣＴＡＣＨＶＧＧＧＴＡＴＣＴＡＡＴＣＣ)ꎮ ３３.４０８(Ｒ ＝ ０.９９９ ６)ꎮ 由表 ２ 可知ꎬ氯化两面针
扩 增 真 菌 ＩＴＳ 片 段 的 引 物 序 列 为 ＩＴＳ１Ｆ 碱和白屈菜红碱的含量随菌剂 Ｙ１１８ 用量的增加
(ＣＴＴＧＧＴＣＡＴＴＴＡＧＡＧＧＡＡＧＴＡＡ)、ＩＴＳ２Ｒ(ＧＣＴＧＣ 呈上升趋势ꎮ 与 ＣＫ 相比ꎬＴ２－Ｔ４ 处理下氯化两面
ＧＴＴＣＴＴＣＡＴＣＧＡＴＧＣＩＴＳ)ꎮ ＰＣＲ 反 应 体 系 如 下: 针碱和白屈菜红碱的含量均显著增加( Ｐ<０.０５)ꎬ
ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ １５ μＬꎬ上下游引物各 １ μＬꎬ模板 两者 均 在 Ｔ４ 处 理 最 大ꎬ 升 幅 分 别 为 １６０. ９％ 和
ＤＮＡ ２０ ｎｇꎬ加入 ｄｄＨ Ｏ 补足至 ３０ μＬꎮ ＰＣＲ 扩增 ５３.８％ꎮ 这表明菌剂 Ｙ１１８ 可以促进两面针氯化两
２
条件如下:９５ ℃ 预变性 ３ ｍｉｎꎻ９４ ℃ / ２０ ｓꎬ５５ ℃ / 面针 碱 和 白 屈 菜 红 碱 的 积 累ꎬ 其 中 以 Ｔ４ 处 理
２０ ｓꎬ７２ ℃ / ３０ ｓꎬ进行 ５ 个循环ꎻ最后 ７２ ℃ / ５ ｍｉｎꎬ 最佳ꎮ
４ ℃ 保存ꎮ 纯化后的 ＰＣＲ 产物用 Ｑｕｂｉｔ ３.０ 荧光定 ２.４ 菌剂 Ｙ１１８ 对土壤理化性质与酶活性的影响
量 仪 进 行 文 库 浓 度 测 定ꎮ 检 测 合 格 后ꎬ 采 用 由表 ３ 可知ꎬ与 ＣＫ 组相比ꎬ各处理组土壤 ｐＨ
Ｉｌｌｕｍｉｎａ 平台对土壤细菌和真菌的基因序列进行 值均显著升高( Ｐ<０.０５)ꎬ以 Ｔ４ 处理 ｐＨ 最高ꎬ升
扩增子测序ꎮ 幅为 ９.０％ꎮ 有机质含量随菌剂 Ｙ１１８ 用量的增加
１.５ 数据处理 呈先降低后上升趋势ꎬ以 Ｔ４ 处理有机质含量最
数据统计分析采用 Ｅｘｃｅｌ ２０１９ 和 ＳＰＳＳ ２３. ０ 高ꎬ升幅为 ６.５％ꎮ 碱解氮含量随菌剂 Ｙ１１８ 用量
软 件 完 成ꎮ 使 用 单 因 素 方 差 分 析 ( ｏｎｅ￣ｗａｙ 的增加呈波动趋势ꎬＴ１ 和 Ｔ３ 组碱解氮含量较 ＣＫ
ＡＮＯＶＡ)对数据进行分析ꎬ并通过 Ｄｕｎｃａｎ’ ｓ 法进 显著提高(Ｐ<０.０５)ꎬ以 Ｔ３ 处理碱解氮含量最高ꎬ
