Page 120 - 《广西植物》2026年第5期

８ ５ ２ 广 西 植 物 ４６ 卷
花深山含笑花瓣作为研究对象ꎬ选取白色的深山 的方法ꎮ 称量 １００ ｍｇ 样本于 ２ ｍＬ 离心管中ꎬ加入
含笑花瓣作为对照ꎬ通过靶向代谢组学分析花瓣 １ ０００ μＬ 的 ６０％甲醇 (含 ０.１ ｍｏｌＬ 盐酸和质量
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中花青素的种类及含量ꎬ对不同花色间差异显著 分数为 ０.１％ 的乙二胺四乙酸二钠盐) 溶液ꎬ涡旋
的花青素类物质进行筛选ꎬ探究红花深山含笑红 振荡 ６０ ｓꎻ加入 ２ 颗钢珠ꎬ放入组织研磨器中ꎬ加入

色深度与特定花色苷种类和含量之间的关联性ꎬ 液氮ꎬ５０ Ｈｚ 研磨 １２０ ｓꎻ２４０ Ｗ 超声功率在 ４ ℃ 下
以期为后续开展红花深山含笑花色呈色机理研究 超声 １０ ｍｉｎꎻ４ ℃ 下 １２ ０００ ｒｍｉｎ 离心 １０ ｍｉｎꎬ
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提供参考ꎬ为花色遗传育种提供一定的科学依据ꎮ 取上清液过 ０.２２ μｍ 膜ꎬ过滤液加入至检测瓶中ꎬ
用于 ＵＰＬＣ￣ＭＳ 检测ꎮ 各组样品的每份生物学重
１ 材料与方法 复独立提取和检测ꎮ
１.５ 花青素代谢物测定
１.１ 试验材料 使用超高效液相色谱( ｕｌｔｒａ￣ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ
试验 材 料 为 白 色 深 山 含 笑 花 ( ｗｈｉｔｅ ｆｌｏｗｅｒꎬ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙꎬ ＵＰＬＣ) 和串联 质 谱 ( ｔａｎｄｅｍ ｍａｓｓ
ＷＦ)、浅 红 色 红 花 深 山 含 笑 花 ( ｌｉｇｈｔ ｒｅｄ ｆｌｏｗｅｒꎬ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙꎬ ＭＳ / ＭＳ)分析花青素代谢物ꎮ 液相条
ＬＦ)和深红色红花深山含笑花 ( ｄｅｅｐ ｒｅｄ ｆｌｏｗｅｒꎬ 件:ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ (２.１ ｍｍ × １００ ｍｍꎬ
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ＤＦ)ꎮ 样品采集参照柳寒等(２０２１) 的方法ꎬ采集 １.７ μｍ)色谱柱ꎬ０.２５ ｍＬｍｉｎ 的流速ꎬ５０ ℃ 的柱
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地点为湖南省浏阳市柏加镇红花深山含笑资源圃 温ꎬ进样量 ２ μＬꎮ 正离子模式ꎬ流动相为 １％甲酸
(１１３°１２′０４″Ｅ、２８°０２′１１″Ｎ)ꎮ 选择光照充足ꎬ栽 水溶液(Ａ)和 １％甲酸甲醇( Ｂ)ꎮ 梯度洗脱程序:
培管理措施与条件均相同ꎬ长势一致ꎬ无病虫害的 ０.０ ~ ２.０ ｍｉｎꎬ５％ Ｂꎻ２.０ ~ １５.０ ｍｉｎꎬ５％ ~ ７０％ Ｂꎻ
健康植株ꎬ以 ＷＦ 为对照ꎬＬＦ 和 ＤＦ 为样品ꎮ 采集 １５.０ ~ １５.１ ｍｉｎꎬ７０％ ~ ９５％ Ｂꎻ１５.１ ~ １８.０ ｍｉｎꎬ９５％
当日开放的花朵ꎬ白色、浅红色和深红色 ３ 个不同 Ｂꎻ１８.０ ~ ２０.０ ｍｉｎꎬ９５％ ~ ５％ Ｂꎻ２０.０ ~ ２５.０ ｍｉｎꎬ
株系分别随机摘取 ３０ 片花瓣混合ꎬ作为 １ 次生物 ５％ Ｂ(Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０)ꎮ
学重复ꎬ共 ３ 次 生 物 学 重 复ꎮ 花 瓣 液 氮 速 冻 １０ 质 谱 条 件: 电 喷 雾 离 子 源 ( ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ
ｍｉｎꎬ随后立即放置于－ ８０ ℃ 的超低温冰箱保存ꎬ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎꎬ ＥＳＩ)ꎮ 正离子喷雾电压为 ３ ５００ Ｖꎬ鞘气
用于后续试验分析ꎮ 流速 ４７ ａｒｂꎬ辅助气流速 １５ ａｒｂꎮ 毛细管温度 ３２０
１.２ 花瓣花色分析 ℃ꎬ以分辨率 ７０ ０００ 进行一级全扫描ꎬ一级离子扫

使 用 英 国 皇 家 园 艺 学 会 比 色 卡 ( Ｒｏｙａｌ 描范围为 ２２０~１ ３００ ｍ/ ｚꎬ并采用 ＨＣＤ 进行二级裂
Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｃｏｌｏｕｒ ＣｈａｒｔꎬＲＨＳＣＣ) 对花瓣 解ꎬ碰撞能量为 １０、５０、６０ ｅＶꎬ二级分辨率为 １７ ５００ꎬ
样品进行色彩比对测定ꎬ将各样品测定出的色卡 采集信号前 ８ 离子进行碎裂ꎬ同时采用动态排除法
∗ ∗ ∗
编号转换为分光色差体系 ( ＣＩＥ Ｌ ａ ｂ ) 数值ꎬ 去除不必要的 ＭＳ / ＭＳ 信息(Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０)ꎮ
对花瓣颜色进行量化( 滕彩玲等ꎬ２０２２)ꎮ Ｌ 值表 １.６ 数据处理分析
∗
示亮度ꎬ数值越大越亮ꎻａ 值表示红绿属性ꎬ数值 通过 Ｐｒｏｔｅｏｗｉｚａｒｄ 软件( Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００６) 中
∗
越大越红ꎻｂ 值表示黄蓝属性ꎬ数值越大越黄ꎻ彩 的 ＭＳＣｎｖｅｒｔ 工 具 将 原 始 质 谱 ｒａｗ 文 件 转 换 为
∗

度 Ｃ ∗ ＝ ａ ∗ ２ ＋ ｂ ∗ ２ ( 尹旭敏等ꎬ２０２０)ꎬ数值越 ｍｚＭＬ 文件格式ꎻ采用 ＲＸＣＭＳ 软件( Ｎａｖａｒｒｏ￣Ｒｅｉｇ
大ꎬ色彩度越丰富ꎮ 每组样品 ３ 片花瓣ꎬＷＦ 测定 ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１５) 进行峰检测、峰过滤和峰对齐处理ꎬ

基部、上部ꎬＬＦ 和 ＤＦ 测定基部、斑点和边缘ꎮ 得到物质峰面积列表ꎻ采用 ＱＣ￣ＳＶＲＣ 归一化方法
１.３ 试验试剂与仪器设备 (Ｇａｇｎｅｂｉｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７) 实现数据矫正ꎬ消除系统

甲醇、３７％ 盐酸、乙二胺四乙酸二钠盐、甲酸、 误 差ꎻ 采 用 Ｅｘｃｅｌ 软 件 进 行 数 据 处 理ꎻ 采 用
超纯水等ꎻ液相色谱仪( Ｖａｎｑｕｉｓｈꎬ Ｔｈｅｒｍｏ 公司)、 ＫＮＡｐＳＡｃＫ、ＨＭＤＢ 和 ＫＥＧＧ 等公共数据库进行代
质谱仪 (Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅꎬ Ｔｈｅｒｍｏ 公司)、万分之一分析 谢物的鉴定ꎻ采用 Ｒ 软 件 Ｒｏｐｌｓ( Ｔｈéｖｅｎｏｔ ｅｔ ａｌ.ꎬ

天平、水浴锅、冷冻离心机、混匀仪、组织研磨器、 ２０１５)分别对样本数据进行主成分分析 ( ｐｒｉｎｃｉｐａｌ
超声波清洗器、滤膜、钢珠等ꎮ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓꎬＰＣＡ) 和正交偏最小二乘判别
１.４ 样品制备及代谢物提取 分 析 ( ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｐａｒｔｉａｌ ｌｅａｓｔ ｓｑｕａｒｅ￣ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｅ
样品制备与代谢物提取参照 Ｈｏｎｇ 等(２０２０) ａｎａｌｙｓｉｓꎬＯＰＬＳ￣ＤＡ)ꎬ分析各样本间花青素组成的