Page 164 - 《广西植物》2026年第5期

８ ９ ６ 广 西 植 物 ４６ 卷
Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＳＹＢＲ ｑＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ( Ｖａｚｙｍｅꎬ中国南 复)ꎮ 本研究通过 Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ ５.０ 软件进行基
京)ꎬ按制造商说明书进行ꎮ 本研究中ꎬ所有基因 因特异性引物设计( 表 １)ꎬ采用 ２ －ΔΔＣｔ 法计算候选
设 ３ 个生物重复( 每个生物重复包含 ３ 个技术重 基因相对表达量ꎮ

表 １ ｑＲＴ￣ＰＣＲ 的基因表达引物序列
Ｔａｂｌｅ １ Ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｑＲＴ￣ＰＣＲ

基因名称 正向引物(５′→３′) 反向引物(３′→５′)
Ｇｅｎｅ ｎａｍｅ Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ (５′→３′) Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ (３′→５′)
ＰＡＬ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ６２３２＿ｃ０＿ｇ３ ＣＴＣＧＣＴＣＡＧＴＧＣＣＴＧＣＴＴ ＴＧＴＣＧＡＡＣＣＡＧＧＣＣＣＡＡＴＡ
ＰＡＬ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ６２３２＿ｃ０＿ｇ４ ＣＴＧＧＣＡＧＣＧＡＴＴＧＧＴＡＡＧＣ ＴＴＴＧＡＡＧＣＣＡＴＡＧＴＣＣＡＡＧＣＴＡＧ
Ｃ４Ｈ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ２０２４３＿ｃ０＿ｇ１ ＣＴＴＧＡＣＧＣＡＣＡＧＡＡＧＡＡＣＧＧ ＴＡＧＡＴＧＴＡＣＣＴＧＣＡＡＣＡＴＴＧＡＴＧＴＴ
Ｃ４Ｈ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ９３７５７＿ｃ０＿ｇ２ ＧＣＴＴＣＡＡＧＴＧＧＧＣＧＡＣＡＡＴＣ ＡＧＧＡＧＡＧＧＡＧＡＣＴＡＣＧＡＣＡＡＣＡＴＴＣ
ＨＣＴ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ２８８４４＿ｃ０＿ｇ１ ＣＴＧＧＣＡＧＣＧＡＴＴＧＧＴＡＡＧＣ ＧＴＡＴＴＧＡＡＧＣＴＣＣＧＡＧＣＡＧＴＡＧＧ
ＨＣＴ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ４７０９＿ｃ１＿ｇ１ ＴＴＴＧＡＧＧＡＣＡＣＣＣＡＧＣＣＡＣＴ ＣＡＣＡＡＴＣＡＡＡＣＣＴＴＧＡＴＡＣＣＴＧＡＡＴ
Ａｃｔｉｎ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ１３６６＿ｃ１＿ｇ１ ＴＴＧＣＣＡＴＣＣＡＡＧＣＣＧＴＴＣＴ ＴＧＡＧＧＴＡＡＴＣＡＧＴＣＡＡＡＴＣＴＣＴＴＣＣ

１.６ 数据统计及分析 值<０ꎬ表明模型具有良好的稳定性和预测能力ꎬ未

试验数据用 Ｅｘｃｅｌ ２０２１ 进行整理ꎬＳＰＳＳ ２２.０ 出现过拟合现象(图 ２:Ｄ)ꎮ
进行 统 计 分 析ꎬ 使 用 迈 维 云 平 台 ( ｈｔｔｐｓ: / / ｃｌｏｕｄ. ２.１.２ 差异积累代谢物(ＤＡＭｓ) 筛选 根据 ＶＩＰ >１
ｍｅｔｗａｒｅ.ｃｎ / )进行作图ꎮ 和 ＦＣ≥２ 或 ＦＣ≤０.５ 为标准筛选 ＤＡＭｓ 并绘制火
山图ꎮ ＲＬ＿ｖｓ＿ＷＬ 中 ＤＡＭｓ 共 ３０７ 个ꎬ其中上 调
２ 结果与分析 ＤＡＭｓ １６９ 种、下调 ＤＡＭｓ １３８ 种( 图 ３:Ａ)ꎮ 红光

处理主要促进了有柄石韦叶片中黄酮的积累ꎬ共
２.１ 代谢组分析 １０９ 种ꎬ占上调 ＤＡＭｓ ６４.４９％ ( 图 ３:Ｂ)ꎮ 根据代
２.１.１ 代谢物统计分析 基于数据库比对ꎬ从 ＷＬ 谢物的 ｌｏｇ ＦＣ 值绘制含量差异动态分布图ꎬ标注
２
和 ＲＬ 中共鉴定到 １ ７７２ 种化合物ꎬ其中黄酮 ５７４ 上 调 和 下 调 的 前 １０ 种 代 谢 物ꎬ 橙 皮 苷
种(３２.３９％)、萜类 ３４３ 种(１９.３５％)、酚酸类 ３２３ ( ｈｅｓｐｅｒｉｄｉｎ )、 柳 叶 素 ( ｌａｎｃｅｒｉｎ )、 金 腰 素
种(１８.２３％)ꎬ还有生物碱、木质素和香豆素等共 ９ (ｃｈｒｙｓｏｓｐｌｅｎｅｔｉｎ) 等 黄 酮 类 代 谢 物 含 量 大 幅 增 加
类化合物( 图 ２:Ａ)ꎮ 主成分分析( ＰＣＡ) 表明 ＷＬ (图 ３:Ｃ)ꎮ
和 ＲＬ 样本间分离度良好ꎬ存在显著性差异且相同 ２.１.３ 差异积累代谢物(ＤＡＭｓ) 通路分析 将定性
处理的重复样品代谢表征相似ꎬ其中第一主成分 后的 ＤＡＭｓ 比对到 ＫＥＧＧ 数据库ꎬ结果显示有 ２３
(ＰＣ１)和第二主成分(ＰＣ２)贡献率分别为 ４７.６４％ 个差异显著代谢物被注释到 １３ 条代谢通路中ꎬ在
和 １５.５７％(图 ２:Ｂ)ꎮ 通过对 ＷＬ 和 ＲＬ 差异代谢 黄酮和黄烷醇生物合成、黄酮生物合成和次生代
物聚类分析ꎬＲＬ 中上调差异代谢物多于 ＷＬꎬ说明 谢物生物合成途径中显著富集( 图 ４:Ａ)ꎮ 上调
红光处理可促进有柄石韦叶片中大部分次生代谢 ＤＡＭｓ 中ꎬ共 ９ 个差异显著代谢物被注释到 ７ 条代
物的积累ꎮ 以正交偏最小二乘法判别分析( ＯＰＬＳ￣ 谢通路中ꎬ在黄酮和黄烷醇生物合成和次生代谢
ＤＡ)依据各组的代谢谱来区分不同组别ꎬ结果显 物生物合成途径中显著富集(图 ４:Ｂ)ꎻ下调 ＤＡＭｓ
示 Ｒ Ｘ ＝ ０.６１７ꎬＲ Ｙ ＝ １.０００ꎬＱ ＝ ０.９５ꎬ说明该模型 中ꎬ共 １３ 个差异显著代谢物被注释到 １１ 条代谢通
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可以充分揭示和预测两组间的差异( 图 ２:Ｃ)ꎮ 为 路中ꎬ在黄酮生物合成和异黄酮生物合成途径显
了进一步检查 ＯＰＬＳ￣ＤＡ 模型的可靠性ꎬ采用 ２００ 著富集(图 ４:Ｃ)ꎮ 具体而言ꎬ下调代谢物富集的
次响应的置换检验对模型进行验证ꎬ随机模型的 黄酮生物合成途径是植物体内合成各类黄酮类化
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Ｒ Ｙ 和 Ｑ 值小于原模型的 Ｒ Ｙ 和 Ｑ 值且 Ｑ 截距 合物的核心通路ꎬ其代表性下调代谢物包括柚皮
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