Page 71 - 《广西植物》2026年第9期

９ 期 胡靖翊等: 地黄新变型金黄花地黄的表型和分子鉴定 １ ５ ０ ７

包头九峰山 １ ２８２ ｍ 的山坡上ꎮ 目前ꎬ中国植物志 业大学认知园ꎮ
电子 版 ( ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ. ｃｎ￣ｆｌｏｒａ. ａｃ. ｃｎ / ｉｎｄｅｘ. ｈｔｍｌ) 共 １.２ 仪器
收录了地黄属 ７ 个物种ꎮ ＦＡ２２４ 型电子天平( 上海浦春计量仪器有限
地黄的典型花冠特征为紫红色ꎮ 据« 中国植 公 司)ꎻ ５４２７Ｒ 型 台 式 冷 冻 高 速 离 心 机 ( 德 国

物志»(中国科学院中国植物志编辑委员会ꎬ２０１６) Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ 公 司)ꎻ Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴＸ 型 多 功 能 酶 标 仪
记载ꎬ地黄花冠筒外面紫红色ꎬ花冠裂片内面黄紫 (美国 Ｂｉｏ Ｔｅｋ 公司)ꎻ１２６０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ Ⅱ型高效液相
色ꎬ外面紫红色ꎮ 然而ꎬ近两年网络媒体上传播在 色谱仪(美国 Ａｇｉｌｅｎｔ 公司)ꎻＣ２００ 型凝胶成像系统
北京、山东等地发现了开黄花的地黄ꎬ但其形态特 (美国 Ａｚｕｒｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ 公司)ꎻＴ１００ 型 ＰＣＲ 仪( 美
征、药材品质及其与地黄和黄花地黄的关系缺乏 国 Ｂｉｏ￣Ｒａｄ 公司)ꎮ
研究报道ꎬ限制了这种新资源类型的进一步开发 １.３ 试药
应用ꎮ 本课题组 ２０２３ 年 ５ 月在河南洛阳市偃师区 对照品梓醇、益母草苷、桃叶珊瑚苷、地黄苷

邙岭镇连霍高速南侧发现了一个野生地黄居群ꎬ Ｄ、地黄苷 Ａ 均购自成都曼思特生物科技有限公
其花冠颜色与地黄野生种质资源和栽培品种均有 司ꎻ多糖多酚植物基因组提取试剂盒( 北京索莱宝
非常明显的区别ꎬ我们将其初命名为“ 偃师黄”ꎬ并 科技有限公司)ꎻＰｒｉｍｅＳＴＡＲ ＨＳ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ
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且经形态解剖学观察和文献( 闫坤等ꎬ２００７ꎻ李晓 试剂盒 ( 北 京 ＴａＫａＲａ 生 物 公 司)ꎻ ＤＬ２０００ ＤＮＡ
东等ꎬ２０１１ꎻＹａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６ꎻ程永琴等ꎬ２０１６) 对 Ｍａｒｋｅｒ(北京 ＴａＫａＲａ 生物公司)ꎻ琼脂糖凝胶 ＤＮＡ
比研究ꎬ确定此地黄为一新变型———金黄花地黄 回收试剂盒[天根生化科技( 北京) 有限公司]ꎻ引
(Ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ ｆ. ａｕｒｕｍ Ｆ. Ｑ. Ｗａｎｇ)ꎮ 然 物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成ꎮ
而ꎬ金黄花地黄与其他地黄属植物的亲缘关系、花 １.４ 总花青素苷含量测定
色形成 的 机 制、 药 效 成 分 含 量 及 遗 传 基 础 尚 不 取金黄花地黄花花萼、蕾期花冠( 花冠 １)、开
清楚ꎮ 花期花冠( 花冠 ２)、雌蕊、雄蕊的新鲜样品ꎬ分别
本研究描述了金黄花地黄的形态特征ꎬ根据 称取 ０.１００ ０ ｇ 并将其剪成约 ０.２ ｍｍ × ０.２ ｍｍ 的
多拷贝核基因 ＩＴＳ 和单拷贝核基因 Ｒ２５５ 的序列 大小ꎬ置于 １０ ｍＬ 离心管中ꎬ向离心管中加入 ９ ｍＬ
分析金黄花地黄与地黄属植物的亲缘关系ꎬ以比 的 １％盐酸甲醇溶液(均使用分析纯)ꎬ设置 ３ 次生
色法测定花器官中总花青素的含量ꎬ利用 ＨＰＬＣ 物学重复ꎮ 将花青素提取液用锡箔纸进行避光处
测定叶和块根中 ５ 种环烯醚萜苷类成分的含量ꎬ 理ꎬ放置于 ４ ℃ 冰箱过夜浸提总花青素苷ꎮ 取含
通过与地黄杂交并回交分析花色的遗传特征ꎬ以 有浸提液的离心管在 ４ ℃ ꎬ１２ ０００ ｒｍｉｎ 的条件
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期为这一地黄新种质资源类型的开发利用提供 下离心 ５ ｍｉｎ(或静置 ２０ ｍｉｎ)ꎬ取上清液用于总花
依据ꎮ 青素苷含量的测定ꎮ 将 ２００ μＬ 提取液置于 ９６ 孔
板中ꎬ采用酶标仪测定其在 ５３０ ｎｍ 和 ６５７ ｎｍ 波长
１ 材料与方法 下的吸光值ꎻ根据公式总花青素苷含量 Ｑ( ｍｇ
ｇ )＝ (Ａ －０.２５×Ａ ) / Ｍ(鲜重) 计算待测样品中
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５３０ ６５７
１.１ 样品 总花青素苷含量ꎮ
２０２３ 年 ５ 月ꎬ本课题组在河南洛阳市偃师区 １.５ 基于 ＤＮＡ 测序的进化分析
邙岭镇(１１２°４３′５６.５３１″Ｅ、３４°４５′５７.２１９″Ｎ) 发现 使用多糖多酚植物基因组提取试剂盒提取金
一个金黄花地黄居群ꎬ河南农业大学王丰青教授 黄花地黄样品的 ＤＮＡꎮ 扩增多拷贝核基因 ＩＴＳ 和

鉴 定 此 地 黄 为 Ｒｅｈｍａｎｎｉａ ｇｌｕｔｉｎｏｓａ ｆ. ａｕｒｕｍ Ｆ. 单拷贝核基因 Ｒ２５５ 的 ＰＣＲ 引 物 参 考 李 建 芳 等
Ｑ. Ｗａｎｇꎮ 本研究取块根种植在河南农业大学认 (２０２３)的方法设计ꎬ引物序列见表 １ꎮ
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知园内ꎬ２０２４ 年 ４ 月和 ５ 月观测植株形态ꎬ测定其 使用 ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ ＨＳ ＤＮＡ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ 试剂盒
叶和块根中 ５ 种环烯醚萜苷类成分的含量ꎬ并提 进行 ＰＣＲ 扩增ꎬ反应体系:ＤＮＡ 模板 １ μＬꎬ上游引
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取其叶片 ＤＮＡ 进行分子鉴定ꎮ 地黄栽培品种 ＨＦꎬ 物 １ μＬꎬ 下 游 引 物 １ μＬꎬ ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ ＨＳ ＤＮＡ
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作为与金黄花地黄进行有性杂交的亲本ꎬ经河南 Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ(２.５ ＵμＬ ) ０.２５ μＬꎬｄＮＴＰ Ｍｉｘｔｕｒｅ ２
农业大学王丰青教授鉴定为地黄ꎬ种植于河南农 μＬꎬ５ × ＰｒｉｍｅＳＴＡＲ Ｂｕｆｆｅｒ( Ｍｇ ２＋ ｐｌｕｓ) ５ μＬꎬｄｄＨ Ｏ
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