Page 16 - 《广西植物》2020年第3期
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２ ９ ６ 广 西 植 物 ４０ 卷
素 １００ ｍｇＬ (阳性对照)ꎬＤＭＳＯ ０ ｍｇＬ (空白
￣１
￣１
表 ２ ２６ 株可培养内生放线菌的物种组成
对照)涂布于含有 ＯＰ５０ 的 ＮＧＭ 平板上ꎬ每块平板
Ｔａｂｌｅ ２ Ｓｐｅｃｉｅｓ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒａｂｌｅ ２６ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ａｃｔｉｎｏｂａｃｔｅｒｉａ
挑去 ２０ 条处于 Ｌ４ 期的线虫ꎬ每组取 ５ 个平板ꎬ置
于 ２０ ℃ 下恒温箱 培 养ꎬ此 时 记 为 寿 命 实 验 第 ０ １６Ｓ ｒＲＮＡ
基因序列
天ꎮ 每天观察并记录线虫存活的数量ꎮ ＤＭＳＯ 在 相似性
菌株编号 相近种
线虫寿命实验中的安全剂量为 ２％ꎬ本研究未超过 Ｓｔｒａｉｎ ｃｏｄｅ Ｏｒｉｇｉｎ １６Ｓ ｒＲＮＡ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｉｄｅｎｔｉｔｙ
安全使用剂量ꎬ不会影响实验结果ꎮ
(％)
活性菌株粗提物液质谱图:取具有延缓线虫
ＩＭＤＧＸ ６０２８ Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓ ｎｉｉｇａｔｅｎｓｉｓ ９７.７６
衰老活性的菌株粗提物 ５ ｍｇꎬ配制成一定浓度的
溶液来进行液质联用( ＨＰＬＣ￣ＭＳ) 谱图扫描ꎬ液相 ＩＭＤＧＸ ６０４９ Ｂｒａｃｈｙｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓａｃｅｌｌｉ ９７.２３
ＩＭＤＧＸ ６１６９ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｕｓ ９９.６１
色谱柱为 Ｌｕｎａ ５ｕ Ｃ１８(２) １００Ａ １５０ ｍｍ × ４.６０
ｍｍ ５ ｍｉｃｒｏｎꎬ流动相为甲醇－水(含 ０.１％甲酸)ꎬ流 ＩＭＤＧＸ ６１９３ Ｓ. ｍａｒｏｋｋｏｎｅｎｓｉｓ ９８.７０
￣１ ＩＭＤＧＸ ６２２５ Ｇｏｒｄｏｎｉａ ｈｏｎｇｋｏｎｇｅｎｓｉｓ ９９.７４
速为 １ ｍＬｍｉｎ ꎬ分析时间为 ５０ ｍｉｎꎬ梯度洗脱ꎮ
质谱采 用 电 喷 雾 离 子 源 ( ＥＳＩ 源)ꎬ 源 喷 射 电 压 ＩＭＤＧＸ ６２４７ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｌｂａｄｕｎｃｕｓ ９９.６１
(ＩＳ)为 ４ ５００ Ｖꎬ雾化温度为 １８０ ℃ ꎮ 根据质谱图 ＩＭＤＧＸ ６３６４ Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ ｃａｒｂｏｘｙｄｉｖｏｒａｎｓ １００
信息分子离子峰ꎬ通过查阅 ＳｃｉＦｉｎｄｅｒ 来初步推断 ＩＭＤＧＸ ６５７８ Ｎｏｃａｒｄｉｏｉｄｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ９９.３５
代谢产物类型ꎮ ＩＭＤＧＸ ６０４６ Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｉｏｄｉｎｕｍ ９８.８０
１.３ 统计分析
ＩＭＤＧＸ ６０４８ Ｂｒａｃｈｙｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒａｃｏｎｇｌｏｍｅｒａｔｕｍ ９９.７４
所有数据采用 ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ １７.０ 进行统计分
ＩＭＤＧＸ ６１１８ Ｃｕｒｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｌｂｉｄｕｍ ９９.３３
析ꎬ图表采用 Ｅｘｃｅｌ ２０１３ 和 Ｇｒａｐｈｐａｄ ｐｒｉｍ ５ 绘制ꎬ
ＩＭＤＧＸ ６１１９ Ｄｅｍｅｑｕｉｎａ ｓａｌｓｉｎｅｍｏｒｉｓ ９９.１０
通过 ＤＮＡ Ｓｔａｒ 软件进行序列整理和 ＭＥＧＡ５.０ 软
ＩＭＤＧＸ ６１３１ Ｉｓｏｐｔｅｒｉｃｏｌａ ｊｉａｎｇｓｕｅｎｓｉｓ ９９.４９
件构建系统发育树及聚类分析ꎬＤａｔａＡｎａｌｙｓｉｓ 进行
ＩＭＤＧＸ ６１３７ Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｕｍ ９８.１５
液质联用分析ꎮ
ＩＭＤＧＸ ６１５０ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃａｒｐａｔｉｃｕｓ ９８.９５
２ 结果与分析 ＩＭＤＧＸ ６１７３ Ｌｙｓｉｎｉｍｉｃｒｏｂｉｕｍ ｐｅｌｏｐｈｉｌｕｍ ９８.３２
ＩＭＤＧＸ ６１９５ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｎｏｖａｅｃａｅｓａｒｅａｅ １００
２.１ 红树林伴生植物内生放线菌多样性分析 ＩＭＤＧＸ ６２３９ Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ ｐｒａｓｉｎａ ９８.４４
根据菌落形态特征进行初步排重后ꎬ选择 ６２ ＩＭＤＧＸ ６２７０ Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｅｒｍｅｎｓｅ ９７.７５
株菌进行 １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因扩增和序列比对分析ꎬ结 ＩＭＤＧＸ ６３１３ Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ ９９.０９
果表明 ６２ 株细菌中 ２６ 株为放线菌ꎬ分布于 ６ 个目 ＩＭＤＧＸ ６３１６ Ｍ. ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｕｍ ９９.４８
９ 个科 １５ 个属ꎮ ２６ 株内生放线菌在 １５ 个属的多
ＩＭＤＧＸ ６３２６ Ｃｕｒｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｉｔｒｅｕｍ ９９.４９
样性分布如图 １ 所示ꎬ链霉菌属( Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ) 分
ＩＭＤＧＸ ６３２９ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｄｒｏｚｄｏｗｉｃｚｉｉ ９９.３５
离出 ５ 株菌ꎬ占所分离放线菌株总数的 １９.２３％ꎮ
ＩＭＤＧＸ ６４５８ Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ ｓｙｎｎｅｍａｔａｆｏｒｍａｎｓ ９９.４９
此次研究分离到的稀有放线菌包括拟诺卡菌属
ＩＭＤＧＸ ６４６９ Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ ９９.８７
(Ｎｏｃａｒｄｉｏｐｓｉｓ)、短状杆菌属(Ｂｒａｃｈｙｂａｃｔｅｒｉｕｍ)、短小
杆菌 属 ( Ｃｕｒｔｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)、 Ｄｅｍｅｑｕｉｎａ、 戈 登 氏 菌 属 ＩＭＤＧＸ ６４６９￣１ Ｙｉｍｅｌｌａ ｌｕｔｅａ ９８.３９
(Ｇｏｒｄｏｎｉａ)、类诺卡氏菌属(Ｎｏｃａｒｄｉｏｉｄｅｓ)、Ｌｙｓｉｎｉｍｉ￣
ｃｒｏｂｉｕｍ、细杆菌属(Ｍｉｃｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ)、假诺卡氏菌属 根据放线菌菌株与典型菌株比对ꎬ１６Ｓ ｒＲＮＡ 基因
(Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａ)、微球菌属(Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ)、原小单孢 序列相似性小于 ９８.５％的菌株是新种的可能性为
菌属(Ｐｒｏｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ)、拟无枝酸菌属(Ａｍｙｃｏｌａ￣ ８０％(徐丽华等ꎬ２００７)ꎮ １６Ｓ ｒＲＮＡ 基因序列相似
ｔｏｐｓｉｓ)、Ｙｉｍｅｌｌａ、北里孢菌属(Ｋｉｔａｓａｔｏｓｐｏｒａ)ꎬ占分离放 性比对 分 析 结 果 显 示 菌 株 ＩＭＤＧＸ ６０２８、 ＩＭＤＧＸ
线菌总数的 ８０.７６％ꎮ ６０４９、 ＩＭＤＧＸ ６１３７、 ＩＭＤＧＸ ６１７３、 ＩＭＤＧＸ ６２７０、
２６ 株可培养内生放线菌的物种组成见表 ２ꎮ ＩＭＤＧＸ ６２３９ 和 ＩＭＤＧＸ ６４６９￣１ 与 有 效 发 表 菌 株
