Page 66 - 《广西植物》2020年第4期
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５ ０ ４ 广 西 植 物 ４０ 卷
Ｂｌａｓｔ 比 对ꎬ 发 现 该 基 因 的 ｃＤＮＡ 序 列 与 咖 啡 的 ＣＹＰ７１ 家 族 蛋 白 ( ＧｅｎＢａｎｋ 登 录 号 分 别 为
(Ｃｏｆｆｅａ ｅｕｇｅｎｉｏｉｄｅｓꎬ ＸＭ ＿ ０２７３１９２８２)、 小 果 咖 啡 Ｏ４８９５８、Ｑ６ＸＱ１４ 和 Ｑ９ＬＶＤ２.１) 进行同源序列比
(Ｃｏｆｆｅａ ａｒａｂｉｃａꎬＸＭ＿０２７２１３４５６) 中编码植物细胞 对ꎬ发现 ＭｏＣＹＰ７１ 蛋白具植物细胞色素 Ｐ４５０ 的
色素 Ｐ４５０ 基因的 ｍＲＮＡ 序列均有 ８８％的一致性ꎮ 所 有 保 守 结 构 域 ( 图 ２ )ꎬ 脯 氨 酸 富 集 区
( ＰＰＳＰＰＲＬＰ )、 Ｋ 螺 旋 ( ＫＥＴＦＲ )、 Ｉ 螺 旋
(ＧＧＩＤＴＳ)、ＰＥＲＦ 域(ＰＥＲＦ) 和 ＣＹＰ 超酶家族的
典型识别结构域血红素结合域( ＦＧＡＧＲＲＩＣＰＧ)ꎮ
选择已鉴定过功能的可可(Ｔｈｅｏｂｒｏｍａ ｃａｃａｏ)、中华
猕猴桃(Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｖａｒ. ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ)、高粱等的
４￣羟苯乙醛肟单加氧酶 ( ＧｅｎＢａｎｋ 登录号分别为
ＥＯＸ９２９０８、 ＰＳＲ８６２３６ 和 ＡＡＣ３９３１８ )ꎻ 大 豆
(Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ)、梅(Ｐｒｕｎｕｓ ｍｕｍｅ)和鳄梨( Ｐｅｒｓｅａ ａ￣
ｍｅｒｉｃａｎａ)等属于苯醛肟加氧酶的蛋白( ＧｅｎＢａｎｋ
登录号分别为 ＡＦ０２２１５７、ＡＢ９２０４９２ 和 Ｐ２４４６５)ꎻ
菊 苣 ( Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍ ｉｎｔｙｂｕｓ )、 黄 花 蒿 ( Ａｒｔｅｍｉｓｉａ
ａｎｎｕａ)、埃 及 莨 菪 ( Ｈｙｏｓｃｙａｍｕｓ ｍｕｔｉｃｕｓ) 和 烟 草
( Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ) 等 的 萜 类 合 成 酶 蛋 白
( ＧｅｎＢａｎｋ 登 录 号 分 别 为 Ｅ１Ｂ２Ｚ９、 ＢＡＭ６８８０８、
ＡＢＳ００３９３ 和 ＡＡＤ４７８３２)ꎻ 长 春 花 ( Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓ
ｒｏｓｅｕｓ)、拟南芥( Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ)、向日葵( Ｈｅ￣
图 １ ＭｏＣＹＰ７１ 基因的克隆片段
ｌｉａｎｔｈｕｓ ａｎｎｕｕｓ)和大阿米芹( Ａｍｍｉ ｍａｊｕｓ) 等的吲
Ｆｉｇ. １ Ｃｌｏｎｉｎｇ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ＭｏＣＹＰ７１ ｇｅｎｅ
哚类物质的生物合成酶蛋白( ＧｅｎＢａｎｋ 登录号分
别为 ＡＤＺ４８６８１、 Ｏ４９３４２、 ＡＥＩ５９７７９ 和 Ｑ６ＱＮＩ４ )
２.２ ＭｏＣＹＰ７１ 基因及其蛋白的生物信息学分析
与蒜头果的 ＭｏＣＹＰ７１ 蛋白一起构建分子系统进
ＭｏＣＹＰ７１ 基因可编码 ５２３ 个氨基酸ꎬ将其氨 化树ꎬ图 ３ 结果显示:蒜头果与可可、中华猕猴桃
基酸序列在 ＮＣＢＩ 上进行 Ｂｌａｓｔ 比对ꎬ发现该蛋白 和高粱等的 ４￣羟苯乙醛肟单加氧酶( ＣＹＰ７１Ｅ１) 蛋
与高粱( Ｓｏｒｇｈｕｍ ｂｉｃｏｌｏｒ) 中编码 ４￣羟苯乙酮肟单 白聚为一支ꎬ该组中蛋白负责催化 ４￣羟苯乙醛肟
加氧酶 ( Ｂａｋ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９８) ( ４￣ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌａｃｅｔａｌ￣
转化为 ４￣羟基苯乙醇腈ꎮ
ｄｅｈｙｄｅ ｏｘｉｍｅ ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅꎬＥＣ:１.１４.１４.３７) 的细 ２.３ ＭｏＣＹＰ７１ 基因在不同果实发育时期和叶片中
胞 色 素 Ｐ４５０ 蛋 白 ( ＧｅｎＢａｎｋ 登 录 号 为 的表达分析
ＡＡＣ３９３１８.１)的一致性为 ５８％ꎬ４￣羟苯乙酮肟单加 以不同发育时期的蒜头果果实、叶片的 ｃＤＮＡ
氧酶属于 ＣＹＰ７１ 家族ꎮ ＭｏＣＹＰ７１ 的生物信息学 为模板ꎬ以特异的检测引物 ＴＭｏＣＹＰ７１Ｆ 和 ＴＭｏＣ￣
分 析 结 果 显 示ꎬ 该 蛋 白 的 相 对 分 子 质 量 为 ＹＰ７１Ｒ 检测 ＭｏＣＹＰ７１ 基因的具体表达量ꎬ图 ４ 结
５８ ９７６.５４ꎬ理 论 等 电 点 ｐＩ 为 ８. １０ꎬ 分 子 式 为 果显示:ＭｏＣＹＰ７１ 基因在不同发育时期的蒜头果
Ｃ Ｈ Ｎ Ｏ Ｓ ꎬ不稳定系数( Ⅱ) 为 ４０.８４ꎬ是 果实及叶片中均有表达ꎬ以叶片(Ｌ) 的表达量为参
２６７５ ４１８４ ７０４ ７４４ ２７
一种不稳定蛋白ꎻ该蛋白不存在信号肽ꎬ存在于分 照ꎬＭｏＣＹＰ７１ 基因在不同发育时期果实中表达量
泌途径ꎬ含有两个跨膜结构ꎬ分别位于 ２０ ~ ３７ 和 均高于参照ꎻ在花谢后ꎬＭｏＣＹＰ７１ 基因表达量逐渐
３１１ ~ ３３３ 位的氨基酸为跨膜疏水螺旋ꎬ锚定于细 降低ꎬ 花谢后 １ 个月( Ｆ１) > ２ 个月( Ｆ２) > ３ 个月
胞器上ꎮ 将蒜头果的 ＭｏＣＹＰ７１ 蛋白与高粱、木薯 (Ｆ３)ꎬ但 在 花 谢 后 ４ 个 月 ( Ｆ４) 的 表 达 量 急 剧
(Ｍａｎｉｈｏｔ ｅｓｃｕｌｅｎｔａ)和拟南芥( Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ) 增加ꎮ
