Page 46 - 《广西植物》2020年第9期
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９ 期           朱晓珍等: 罗汉果叶片挥发性成分与访花昆虫: 雌雄株差异及其生态影响                                          １ ２ ６ １

   是开展罗汉果自然授粉不良研究的重要一环ꎮ                              Ａｇｉｌｅｎｔ 公 司ꎻ Ａｇｉｌｅｎｔ ５９７５Ｃ 质 谱 仪 购 于 美 国
       访花昆虫是指在显花植 物 上 频 繁 活 动 的 昆                    Ａｇｉｌｅｎｔ 公司ꎻＤＨＰ￣９６０２ 数显恒温烘箱购于上海一
   虫ꎬ常见种类包括传粉昆虫、植食性昆虫和天敌昆                            恒科学仪器有限公司ꎮ
   虫等(官昭瑛等ꎬ２００５)ꎮ 访花昆虫对植物的选择                         １.３ 方法
   受多种因素的影响ꎬ如植物化学成分、植物形态特                            １.３.１ 试验地选择和管理  ２０１８ 年 ４ 月ꎬ在广西壮
   征以及环境因子等ꎬ但化学识别在访花昆虫对植                             族自治区中国科学院广西植物研究所(位于桂林市

   物的 选 择 中 占 据 主 导 地 位 ( 钦 俊 德 和 王 琛 柱ꎬ             雁山区)的试验地整地种植罗汉果种苗ꎬ共设试验
   ２００１ꎻＲｉｄ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１９)ꎮ 访花昆虫借助触角上的                样地 ３ 块ꎬ分别记为 Ｌ 、Ｌ 、Ｌ ꎬ每块试验样地面积约
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   化学感受器来识别植物的化学信号ꎬ这些化学信                             ３０ ｍ ꎬ样地间距 １０ ｍ 左右ꎮ 每样地种植罗汉果种
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   号主 要 由 植 物 挥 发 性 成 分 构 成 ( Ｆｒａｓｅｒ ｅｔ ａｌ.ꎬ         苗 ２０ 株ꎬ雌雄株比例 １ ∶ １ꎬ正常水肥管理ꎮ
   ２００３ꎻＷｅｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１８)ꎮ 植物挥发性成分是植物                １.３.２ 访花昆虫观测  ８ 月ꎬ罗汉果进入盛花期ꎬ在
   在代谢过程中产生的多种短链碳氢化合物及其衍                             每块试验样地随机选中 ３ 个雌株和 ３ 个雄株ꎬ编号
   生物ꎬ已知种类包括烯、烃、醇、醛、酮、酯以及有机                          并挂牌标志ꎬ对这些植株定点定时进行访花昆虫观
   酸等(丁红建和郭予元ꎬ１９９５)ꎮ 对于访花昆虫ꎬ植                        测ꎮ 每天 ６:００—１８:００ꎬ每隔 １ ｈ 观察记录各植株上
   物不同的挥发性成分可能产生不同的影响ꎬ一些                             活动的昆虫种类及其头数ꎬ拍照采集访花昆虫种类

   挥发 性 成 分 对 访 花 昆 虫 可 能 具 有 引 诱 功 能                信息ꎬ连续观测 ３ ｄꎮ 第 ４ 天捕捉罗汉果访花昆虫个
   (Ｋａｒｐａｔｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３)ꎬ而另一些可能产生防御和                体ꎬ以乙酸乙酯毒杀后制作标本ꎬ依据访花昆虫照
   趋避作用(Ｈｕ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１９)ꎮ 因此ꎬ在传粉生物学                  片结合昆虫标本进行分类鉴定ꎬ部分难以确定的样
   研究中ꎬ把昆虫访花选择与植物挥发性成分进行                             品由广西植物研究所昆虫专家鉴定ꎮ
   交叉比较ꎬ可以更准确地揭示自然授粉不良的形                             １.３.３ 雌雄株叶片挥发性成分采集  在观测访花
   成原因(王思源ꎬ２０１７ꎻＦｒｉｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１９)ꎮ                昆虫的同期ꎬ在每个挂牌标志的植株上分别取 ３
       本研究观察统计罗汉果雌雄株的访花昆虫ꎬ                           张生长状况一致、表面积基本相等、无虫孔和病斑
   同时收集鉴定其叶片挥发性成分ꎬ通过交叉比较                             的叶片ꎬ用医用剪刀剪断叶柄基部后ꎬ将叶片迅速
   查明罗汉果雌雄株上访花昆虫的种类差异ꎬ并分                             装入顶空进样瓶中ꎬ注意避免叶片出现机械损伤ꎬ
   析这种差异与罗汉果叶片挥发性成分的关系ꎬ以                             样品及时送至检测试验室ꎮ

   期为查明罗汉果自然授粉不良的原因奠定基础ꎮ                                 将 已 活 化 好 的 ５０ / ３０ μｍ ＤＶＢ / ＣＡＲ / ＰＤＭＳ
                                                     ＳＰＭＥ 萃取头插入进样瓶中ꎬ置入 ３７ ℃ 的恒温烘
   １  材料与方法                                          箱中 保 持 ３０ ｍｉｎ 进 行 萃 取ꎬ 取 出 萃 取 头 插 入

                                                     ＧＣ￣ＭＳ进样口ꎬ解析 ５ ｍｉｎ 后ꎬ进样分析ꎮ 以相同
   １.１ 材料和试剂                                         方法采集空白进样瓶中的空气进行 ＧＣ￣ＭＳ 分析ꎬ
       罗汉果品种“大地二号” 的种苗购于桂林吉福                         作为空白对照组ꎮ
   思罗汉果有限公司ꎮ 乙酸乙酯购于广东光华科技                            １.３.４ 挥发性成分的 ＧＣ￣ＭＳ 分析  参考黄代红等
   股份有限公司ꎻ脱脂棉、昆虫针和标本盒等其他试                            (２０１５)的方法ꎬ作适当优化ꎮ

   验材料购于桂林贝尔化学试剂有限公司ꎮ                                    气相色谱条件: ＨＰ￣５ＭＳ 石英毛细管色谱柱
   １.２ 仪器和设备                                         (３０ ｍ × ０.２５ ｍｍ × ０.２５ μｍ)ꎻ程序升温ꎬ起始 ５０
       ５０ / ３０ μｍ ＤＶＢ / ＣＡＲ / ＰＤＭＳ ＳＰＭＥ 萃取头购         ℃ꎬ随后以 ５ ℃ｍｉｎ 升温至 ２００ ℃ꎻ进样量 ２ μＬꎬ
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   于美国 Ｓｕｐｅｌｃｏ 公司ꎻ４０ ｍＬ 顶空进样瓶购于美国                    不分流ꎻ 进样口温度 ２３０ ℃ꎻ 载气为高纯度氦气
   Ａｇｉｌｅｎｔ 公 司ꎻ 顶 空 固 相 微 萃 取 装 置 购 于 美 国            (９９.９９９％)ꎬ流速 １.０ ｍＬ ｍｉｎ ꎮ
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   Ｓｕｐｅｌｃｏ 公 司ꎻ ＨＰ￣５ＭＳ 石 英 毛 细 管 柱 购 于 美 国               质谱条件: ＭＳ 电离方式为 ＥＩꎬ电子能量 ７０ ｅＶꎬ
   Ａｇｉｌｅｎｔ公司ꎻＡｇｉｌｅｎｔ ７８９０Ａ 气相色谱仪购于美国                 离子源温度 ２３０ ℃ ꎬ接口温度 ２８０ ℃ ꎬ四极杆温度
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