Page 128 - 《广西植物》2021年第7期

Ꭾ 期 卢昌华等᧥ 广藿香 Þۗۗ୒ 基因原核表达及茉莉酸甲酯对 Þۗۗ୒ 表达量的影响 ϟ ϟ ጢ Ꭾ
靶标ᤥ 随着对 è۪۪୩ 酶功能的深入研究ᖔ越来越多 广东药科大学中药学院种植ᖔ经刘基柱副教授鉴
功能被挖掘ᖔ将有望提高其在药品研发和生产中的 定为 唇形科刺蕊草 属 植 物 广 藿 香 ྉ ۗᅳ੖ᅳ໧ᡙᓣቂᅳႥ
作用ᖔ为前沿医学研究做贡献ᤥ ዞᐹᤇᤀᔠႥɯᤥ
茉莉酸甲酯的母体结构为环戊酮ᖔ是茉莉酸经 ϓॹԣ 菌株
过甲酯化产生的化合物ᖔ作为植物体内的内源信号 大肠杆菌感受态 ᧕̀ጢምܦ蛋白表达菌株 ାᓂ԰ϟ
分子ᖔ在植物的新陈代谢ܦ次生产物合成ܦ抗病虫害 ྉ᧕ጶሕɯ 均购自北京庄盟国际生物基因科技有限
和抗逆性方面发挥重要作用ྉ èࣼႿ੫ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡԡ࿗ɯᤥ 公司ᤥ
一般情况下ᖔ茉莉酸甲酯因为其挥发性和分子特 ϓॹᇺ 仪器和试剂
性ᖔ可以从植物的气孔进入植物体内ᖔ从而实现长 仪器᧥电子天平 ऊ۪԰ϟ࿗ ྉ 奥豪斯仪器有限公
距离的信号传导和植物间的信息交流ྉ徐伟和严善 司ɯଫ紫外微分光光度计ྉ ᣽ጢጢԡԡ۪᤟ࣼ༁ᖔ北京凯奥科
春ᖔ԰ԡԡ࿗ɯᤥ 茉莉酸甲酯进入植物体后进一步被水 技 发 展有限公司 ɯଫ ۪ऊ኏ 仪 ఋϟԡԡ ྉ ାᔽᆍ᥋኏ᑕʛ
解成茉莉酸ᖔ茉莉酸的产生会刺激不同种类的次生 ᓂᑕᤦᆍʢᑕᡷᆍʢᔽᔀ༁ᖔ ᧧Ⴟዹɯଫ电泳仪 ᧕ɟऊ۪᥋ሕϟऊશྉ 北京六一
代谢产物的生物合成ᖔ比如生物碱尼古丁ܦ异喹啉ܦ 生物科技有限公司ɯଫ凝胶成像仪 ఋᆍዹᑕႿሕ԰ԡྉ 上海
硫代葡萄糖苷ܦ花青素ܦ倍半萜化合物青蒿素和萜 领成生物科技有限公司ɯଫ蓝光切胶仪 ା᧕᥋ା᥈ऊϟ
类吲哚生物碱等ᤥ 当昆虫啃食植物时ᖔ植物通过释 ྉ无锡博弗瑞德生物科技有限公司ɯଫ冷冻离心机
放特异性的应激子ᖔ从而产生挥发性物质参与到防 ሕ᣽ϟጢྉ୩᧧᥈ᥘዶɯଫ恒温摇床 ͐ɟऊ᥋԰ԡԡྉ上海福玛实验
御中ᖔ在这一系列的信号传导中ᖔ茉莉酸被认为是 设 备 有限公 司 ɯଫ 荧光定量 ۪ऊ኏ 仪 ྉାᔽᆍʢᑕʛ
这一过程的核心物质ྉ᣽ᔀ༁༁᤟ᔀʢ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡԡ࿗ɯᤥ ఋၤᑕ᤟ᔀʢ ऊèᣮँᤃɯଫ细胞破碎仪ྉ୩ᨃશ᧧ऊ୩ ჆ऊᣮᎮጢԡɯᤥ
ྉϟँँँɯ发现用茉莉酸处理过的烟草植株挥发性物 试剂᧥ఋ኏᧧ᡱࣼʢᔀ ኏ᔀᑕ੫ᔀႿᡷྉ北京艾德莱生物科技有
质的量会增加ᖔ在一定程度上提高了烟草害虫被寄 限公司ɯଫèᑕ༁ᡷ᣽ᔽႿ੫ 一步法 ኏ఋ᥋۪ऊ኏ 试剂盒ଫ琼脂糖

生蜂寄生的概率ᤥ ᨃझᑕऔᑕ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ ྉ ԰ԡԡँɯ 和 Իၤᆍࣼ ᔀᡷ ྉାᔽᆍऔᔀ༁ᡷ 公司ɯଫ᧕શዶ 纯化回收试剂盒ܦ质粒小提试
ᑕ᤟঎ྉ԰ԡԡँɯ研究发现利马豆植株在经过茉莉酸处理 剂盒ଫᡱ᥈ᥘ᥋ఋ èᑕ༁ᡷ ᤟ᔽ੫ᑕᡷᔽᆍႿ Ҵᔽᡷྉ天根生化科技有限公
后能够释放萜类挥发物ᖔ从而引诱捕食性螨虫来捕 司ɯଫ୩ɟା኏ ᗀ ᥈ʢᔀᔀႿ ۪ʢᆍ ఋᑕी ̀୩ 预混型 ी۪ऊ኏ 试剂

食叶螨ܦ细须螨ܦ跗线螨和瘿螨等有害螨ᤥ 盒ܦጶ׹ᆍ ᥘ᥋ᥘᓂ ჆ ኏ఋ 试剂盒ྉ艾科瑞生物ɯଫᤃġᡱʢᆍᡷᔀᔽႿ
茉莉酸甲酯的信号传导会使植物挥发性物质 ᤟ᆍᑕʛᔽႿ੫ ᤦࣼ஦஦ᔀʢܦା᤟ࣼᔀ ۪᤟ࣼ༁ ۪ʢᆍᡷᔀᔽႿ ᥘᑕʢҴᔀʢྉ北京全式金
的增加ᖔ倍半萜类化合物是挥发性物质的重要组 生物技术有限公司ɯଫᡱጶఋ᥋ሕ԰ᤦ 质粒ܦ୩ጶ 无缝克隆和
成成分ᖔ而法尼基焦磷酸又是合成倍半萜化合物 组装试剂盒ܦ᧕ᓂ԰ԡԡԡ ᥘᑕʢҴᔀʢܦጶ଴኏ᔀʛ 核酸电泳染料
的重要前体物质ᖔ因此ᖔ研究茉莉酸甲酯对法尼基 ྉ北京庄盟国际生物基因科技有限公司ɯᤥ
焦磷酸基因的表达调控ᖔ对于揭示茉莉酸甲酯在
植物之间的信号传导及植物发挥抗病虫害的机制 ԰জ 方法
具有重要作用ᤥ
本研究对广藿香的 Þۗۗ୒ 基因进行克隆ᖔ采用 ԣॹϓ 广藿香总 ቴટዛ 的提取
无缝克隆构建 ᡱጶఋ᥋ሕ԰ᤦ᥋Þۗۗ୒ 原核表达载体ᖔ进行 按照 ఋ኏᧧ᡱࣼʢᔀ ኏ᔀᑕ੫ᔀႿᡷ 试剂盒说明书提取 ኏શዶᖔ
原核蛋白小量表达ᖔ并对 Þۗۗ୒ 进行生物信息学分 根据 èᑕ༁ᡷ᣽ᔽႿ੫ 一步法 ኏ఋ᥋۪ऊ኏ 试剂盒得到 ዹ᧕શዶᖔ将
析ଫ与此同时利用荧光定量 ۪ऊ኏ 技术研究茉莉酸 产物进行 ϟᠮ琼脂糖凝胶电泳鉴定ᖔ切胶回收目的
甲酯对 Þۗۗ୒ 基因表达量的影响ᖔ以期对进一步研 片段ᖔ并测定 ዹ᧕શዶ 的浓度和纯度ᖔͱ԰ԡ ቩ保存ᤥ
究广藿香的倍半萜生物合成途径及茉莉酸甲酯对 ԣॹԣ Þۗۗ୒ 基因的 ௴᤬ዛ 克隆
Þۗۗ୒ 的调控表达机制奠定基础ᤥ 按 ᡱ᥈ᥘ᥋ఋ èᑕ༁ᡷ ᤟ᔽ੫ᑕᡷᔽᆍႿ 试剂盒说明书进行 ఋ᥋ዶ
克隆ᤥ 导入 ᧕̀ጢም 感受态细胞后ᖔ用引物 Þۗۗ୒᥋è᧥
ϟজ 材料ܓ仪器与试剂 ዶఋ᥈᥈ऊ᥈ዶዶఋऊऊ᥈ዶዶऊ᥈᥈ዶ᥈ऊᖔÞۗۗ୒᥋኏᧥ఋఋዶఋఋఋऊఋ

᥈ఋऊఋऊఋఋ᥈ఋዶዶዶఋऊఋఋ᥈ऊऊ 进行菌液 ۪ऊ኏ 鉴定ᤥ
ϓॹϓ 广藿香叶片 取阳性克隆菌液过夜培养ᖔ使用质粒提取试剂盒
广藿香植株种源来自海南省儋州市ᖔ移栽至 提取质粒ᖔ检测浓度及纯度ᖔ取适量质粒送擎科生