Page 130 - 《广西植物》2021年第7期

Ꭾ 期 卢昌华等᧥ 广藿香 Þۗۗ୒ 基因原核表达及茉莉酸甲酯对 Þۗۗ୒ 表达量的影响 ϟ ϟ ጢ ँ
件 ୩۪୩୩ 对数据进行显著性分析ᤥ 上传到 ᥈ᔀႿାᑕႿҴᖔ登录号为 ᥘશሕ԰ᤃሕϟऐᤥ
ᇺॹᇺ 无缝克隆构建原核表达载体
ሕজ 结果与分析 Þۗۗ୒ 基因和 ᡱጶఋ᥋ሕ԰ᤦ 载体引入同源臂后ᖔ使
用 ϟᠮ 琼脂糖电泳检测ᖔ结果显示 Þۗۗ୒ 基因在
ᇺॹϓ 广藿香总 ቴટዛ 的提取与 Þۗۗ୒ 的 ዞᦵટዛ 的合成 ϟ ԡԡԡ ጲ ϟ ጢԡԡ ᤦᡱ 有明显条带ᖔᡱጶఋ᥋ሕ԰ᤦ 载体片段在
提取到 ሕ 个平行组的总 ኏શዶ 完整性都较好ᖔ ጢ ጢԡԡ处有一清晰明亮条带ᖔ具体如图 ሕ 所示ᤥ 无
ᨃ᧕԰ᤃԡ ᣰ ԰ऐԡ 为 ϟ঎ऐᖔϟᠮ琼脂糖凝胶电泳显示 ϟऐ ୩ܦ 缝克隆后再转入 ᧕̀ጢምᖔ挑取 ऐ 个菌落进行菌液
԰ऐ ୩ 条带清晰ᖔ能满足后续实验需要ᖔ具体如图 ϟ ۪ऊ኏ 验证ᖔऐ 个菌落全部转 化 成 功ᖔ 具体如图 ࿗
所示ᤥ 使用一步法逆转录试剂盒得到的 ዹ᧕શዶ 进 所示ᤥ
行电泳显示在 ϟ ԡԡԡ ጲ ϟ ጢԡԡ ᤦᡱ 之间有清晰明亮的
条带ᖔ如图 ԰ 所示ᤥ

图 ϟজ ኏શዶ 琼脂糖凝胶电泳
èᔽ੫঎ ϟজ ኏શዶ ᑕ੫ᑕʢᆍ༁ᔀ ੫ᔀ᤟ ᔀ᤟ᔀዹᡷʢᆍᡱၤᆍʢᔀ༁ᔽ༁

ϓ঎᧕ᓂ԰ԡԡԡ ᥘᑕʢҴᔀʢଫ ԣ঎ Þۗۗ୒ 基因ଫ ᇺ঎ᡱጶఋ᥋ሕ԰ᤦ
线性化载体片段ଫ ྽঎ ᧕ᓂϟጢԡԡԡ ᥘᑕʢҴᔀʢᤥ
ϓ঎ ᧕ᓂ԰ԡԡԡ ᥘᑕʢҴᔀʢଫ ԣ঎ Þۗۗ୒ ੫ᔀႿᔀଫ ᇺ঎ᡱጶఋ᥋ሕ԰ᤦ
᤟ᔽႿᔀᑕʢᔽझᔀʛ ׹ᔀዹᡷᆍʢ ஦ʢᑕ੫ቝᔀႿᡷଫ ྽঎ ᧕ᓂϟጢԡԡԡ ᥘᑕʢҴᔀʢ঎
图 ሕজ 引入同源臂后的 Þۗۗ୒ 基因和
ᡱጶఋ᥋ሕ԰ᤦ 琼脂糖电泳图
图 ԰জ ዹ᧕શዶ 琼脂糖凝胶电泳
èᔽ੫঎ ሕজ Þۗۗ୒ ੫ᔀႿᔀ ᑕႿʛ ᡱጶఋ᥋ሕ԰ᤦ ᑕ੫ᑕʢᆍ༁ᔀ ᔀ᤟ᔀዹᡷʢᆍᡱၤᆍʢᔀ༁ᔽ༁
èᔽ੫঎ ԰জ ዹ᧕શዶ ᑕ੫ᑕʢᆍ༁ᔀ ੫ᔀ᤟ ᔀ᤟ᔀዹᡷʢᆍᡱၤᆍʢᔀ༁ᔽ༁ ᑕ஦ᡷᔀʢ ᔽႿᡷʢᆍʛࣼዹᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ၤᆍቝᆍ᤟ᆍ੫ᢃ ᑕʢቝ༁

ᇺॹԣ 广藿香 Þۗۗ୒ 基因的 ௴᤬ዛ 克隆 ᇺॹ྽ Þۗۗ୒ 蛋白的表达
构建完 ఋ 载体后ᖔ进行菌液 ۪ऊ኏ 验证阳性克 控制 ԰ԡ ቩ ܦϟሕԡ ʢኼቝᔽႿ ᖔ分别对含有 ԡܦԡ঎԰ጢܦ
᥋ϟ
隆ᖔ将阳性克隆菌株培养后提取质粒后送擎科生 ԡ঎ጢܦԡ঎Ꭾጢܦϟ঎ԡ ቝቝᆍ᤟ኼᓂ ᧧۪ఋ᥈ 的菌液诱导 ᤃၤ 进行
᥋ϟ
物有限公司测序ᖔ测序结果进行 ାᓂዶ୩ఋᖔ结果显示 考察ᖔ结果发现ᖔᡱጶఋ᥋ሕ԰ᤦ᥋Þۗۗ୒ 菌株表达的蛋白

与 શऊା᧧ 上其他植物的 Þۗۗ୒ 基因有很高匹配度ᖔ 为硫氧还蛋白᥋Þۗۗ୒ 融合蛋白ᖔ分子量为 ጢԡ ᣽᧕