Page 85 - 《广西植物》2021年第7期

ϟ ϟ ϟ ࿗ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ϟ 卷
表 ԣই 培养基名称及用途 管中ᖔ用于抑菌活性筛选ᤥ
ఋᑕᤦ᤟ᔀ ԰জ શᑕቝᔀ༁ ᑕႿʛ ࣼ༁ᔀ ᆍ஦ ቝᔀʛᔽࣼቝ ϟ঎࿗঎ሕ 内生菌发酵上清液抑菌活性筛选জ 采用双
培养基 培养基用途 层平板法ྉ 李玲玲等ᖔ԰ԡϟጢɯᤥ 将滴碟后的双层平
ᥘᔀʛᔽࣼቝ В༁ᔀ ᆍ஦ ቝᔀʛᔽࣼቝ
板先放入 ࿗ቩ 冰箱预培养 Ꭾၤᖔ然后将接有供试细
牛肉膏蛋白胨培养基 内生细菌的分离和培养ᖔ指示细菌 菌的双层平板置于 ሕᤃ ቩ 恒温培养 ϟऐ ၤଫ接有供试
ାᔀᔀ஦ ᔀ଴ᡷʢᑕዹᡷ ᡱᔀᡱᡷᆍႿᔀ ቝᔀʛᔽࣼቝ 的培养
᧧༁ᆍ᤟ᑕᡷᔽᆍႿ ᑕႿʛ ዹࣼ᤟ᡷࣼʢᔀ ᆍ஦ ᔀႿʛᆍᡱၤᢃᡷᔽዹ 酿酒酵母和黑曲霉的双层平板置于 ԰ऐ ቩ 分别恒
ᤦᑕዹᡷᔀʢᔽᑕᖔ ዹࣼ᤟ᡷࣼʢᔀ ᆍ஦ ᡷၤᔀ ᔽႿʛᔽዹᑕᡷᔽႿ੫
ᤦᑕዹᡷᔀʢᔽᑕ 温培养 ԰ܦጢ ʛᤥ 观察并测量抑菌圈直径ᤥ
高氏 ᧧ 号培养基 内生放线菌的分离和培养 ϓॹጇ 数据分析
᥈ᑕᆍ༁ શᆍ঎ ᧧ ቝᔀʛᔽࣼቝ ᧧༁ᆍ᤟ᑕᡷᔽᆍႿ ᑕႿʛ ዹࣼ᤟ᡷࣼʢᔀ ᆍ஦ ᔀႿʛᆍᡱၤᢃᡷᔽዹ
ᑕዹᡷᔽႿᆍቝᢃዹᔀᡷᔀ༁ 抑菌 圈大小采用三次试 验 重 复 测 量ᖔ 采用
۪᧕ዶ 培养基 内生真菌的分离和培养ᖔ指示真菌 ୩۪୩୩ ୩ᡷᑕᡷᔽ༁ᡷᔽዹ༁ ϟᎮ঎ԡ 软件进行统计分析ᖔ数据由平
۪ᆍᡷᑕᡷᆍ ੫᤟ࣼዹᆍ༁ᔀ ᑕ੫ᑕʢ ቝᔀʛᔽࣼቝ 的培养 均值ō标准差表示ᤥ
᧧༁ᆍ᤟ᑕᡷᔽᆍႿ ᑕႿʛ ዹࣼ᤟ᡷࣼʢᔀ ᆍ஦ ᔀႿʛᆍᡱၤᢃᡷᔽዹ
஦ࣼႿ੫ᔽᖔ ዹࣼ᤟ᡷࣼʢᔀ ᆍ஦ ᡷၤᔀ ᔽႿʛᔽዹᑕᡷᔽႿ੫ ஦ࣼႿ੫ᔽ
԰ 结果与分析

清液分别接种在牛肉膏蛋白胨ܦ高氏 ᧧ 号和 ۪᧕ዶ
ԣॹϓ 青蒿内生菌的分离结果
平板上ᖔ放在合适的温度下培养ᖔ从中分离内生细
各种消毒可靠性检验平板上均未长菌ᖔ内生
菌ܦ放线菌和真菌ᤥ
菌分离平板上长菌ᖔ证明分离成功ᤥ 从分离成功
消毒可靠性检验采用漂洗液检查法和组织印
的平板上挑选不一样的菌落或菌苔进行划线纯
迹检查法ྉ李玲玲等ᖔ԰ԡϟँɯᤥ
化ᖔ直至得到纯化的典型菌落ᤥ 根据划线纯化过
分离成功后采用平板划线的方法进行纯化ᤥ
程中菌落的形态ܦ颜色ܦ边缘状态ܦ透明度ܦ表面干
ϓॹᇺ 内生真菌抑菌活性初筛
湿状态等特征不同ᖔ统计分离出的菌株数ᤥ 由表 ሕ
内生真菌培养᧥挑取经活化的内生真菌菌丝
可知ᖔ从青蒿根ܦ茎ܦ叶中共分离到内生菌 Ꭾᤃ 株ᖔ
或孢子点接至 ۪᧕ዶ 固体平板中央ᖔ԰ऐ ቩ 恒温培养
其中内生细菌 ϟँ 株ܦ内生放线菌 ሕ࿗ 株ܦ内生真菌
Ꭾʛᖔ备用ᤥ
԰ሕ 株ᤥ 从分离部位来看ᖔᎮᤃ 株内生菌中᧥ጢᤃ 株来
指示细菌培养᧥将三种指示细菌分别接种于
自于茎段ଫϟᎮ 株来自于根段ଫ仅 ሕ 株来自于叶内ᤥ
牛肉膏蛋白胨斜面上ᖔሕᎮ ቩ 培养 ϟऐ ၤᤥ
表明茎段的内生资源较丰富ᤥ
抑菌初筛试验᧥ 采用琼脂块法 ྉ 李玲玲等ᖔ
԰ԡϟጢɯᤥ
表 ᇺই 青蒿根ܓ茎ܓ叶中内生菌分布情况
ϓॹ྽ 内生菌发酵上清液抑菌活性测定
ఋᑕᤦ᤟ᔀ ሕজ ᧕ᔽ༁ᡷʢᔽᤦࣼᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ᡷၤᔀ ᔀႿʛᆍᡱၤᢃᡷᔀ༁ ᔽႿ ʢᆍᆍᡷ༁ᖔ
ϟ঎࿗঎ϟ 指示菌培养জ 将三种指示细菌分别接种于 ༁ᡷᔀቝ༁ ᑕႿʛ ᤟ᔀᑕ׹ᔀ༁ ᆍ஦ ዛʗᡙᓣቂᔠ໧ᔠᐹ ᐹႥႥࣩ໧
牛肉膏蛋白胨斜面上ᖔሕᤃ ቩ 培养 ϟऐ ၤଫ将酿酒酵
内生菌菌株的数量
母ܦ黑曲霉接种于 ۪᧕ዶ 斜面上ᖔ԰ऐ ቩ 分别培养 ԰ܦ શࣼቝᤦᔀʢ ᆍ஦ ༁ᡷʢᑕᔽႿ༁ ᆍ஦ ᔀႿʛᆍᡱၤᢃᡷᔀ༁
内生菌 合计
Ꭾʛᤥ ጶႿʛᆍᡱၤᢃᡷᔀ ᡷᢃᡱᔀ 根 茎 叶 ఋᆍᡷᑕ᤟
ϟ঎࿗঎԰ 内生菌上清液的制备জ 内生菌的培养᧥将分 ኏ᆍᆍᡷ ୩ᡷᔀቝ ᓂᔀᑕ஦
离到的内生细菌分别接入 ϟԡԡ ቝᓂ 牛肉膏蛋白胨 内生细菌 ሕ ϟ ጢ ϟ ϟ ँ
ጶႿʛᆍᡱၤᢃᡷᔽዹ ᤦᑕዹᡷᔀʢᔽᑕ
液体培养基中ᖔ放入 ሕᤃ ቩ 摇床ᖔ培养 ԰࿗ ၤଫ将分离 内生放线菌
ϟϟ ԰԰ ϟ ሕ࿗
到的内生放线菌分别接入 ϟԡԡ ቝᓂ 高氏 ᧧ 号液体培 ጶႿʛᆍᡱၤᢃᡷᔽዹ ᑕዹᡷᔽႿᆍቝᢃዹᔀᡷᔀ༁
内生真菌
养基中ᖔ放入 ԰ऐ ቩ 摇床ᖔ培养 ጢʛଫ将分离到的内生 ሕ ϟ ँ ϟ ԰ ሕ
ጶႿʛᆍᡱၤᢃᡷᔽዹ ஦ࣼႿ੫ᔽ
真菌分别接入 ϟԡԡ ቝᓂ ۪᧕ዶ 液体培养基中ᖔ放入 ԰ऐ 菌株数总计
ϟᎮ ጢᤃ ሕ Ꭾᤃ
ఋᆍᡷᑕ᤟Ⴟࣼቝᤦᔀʢᆍ஦༁ᡷʢᑕᔽႿ༁
ቩ 摇床ᖔ培养 ጢʛᤥ
内生菌上清液的制备᧥将培养好的内生菌菌
悬液分别移入灭菌离心管中ᖔϟ԰ ԡԡԡ ʢኼቝᔽႿ ᖔ离 জজ 为了便于区分ᖔ将从青蒿根内分离到的内生
᥋ϟ
心 ϟԡ ቝᔽႿᖔ小心吸出上清液ᖔ转移至新的灭菌离心 细菌ܦ内生放线菌ܦ内生真菌菌株分别标记为蒿根