Page 8 - 《广西植物》2022年第11期
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ϟ ऐ ԡ ԡ                                广জ 西জ 植জ 物                                         ࿗԰ 卷
            ྉ ዶᡷ԰੫ሕᎮ࿗ሕԡ ɯܦ ዛᡙԮዛ௴ϟ԰ ྉ ዶᡷጢ੫ጢँऐ԰ԡ ɯܦ ዛᡙԮዛ௴ϟऐ      取样作为对照组ᖔ所有样品于液氮速冻后 ͱ ऐԡ ቩ
            ྉዶᡷሕ੫ጢሕᤃԡԡɯܦ ᧣໧ԮÞۗ԰ጢ԰ ྉ ዶዶᨃ࿗ᤃԡ࿗ϟ঎ ϟɯܦ ᧣໧ԮÞۗ԰࿗ጢ     保存备用ᤥ 除低温处理外ᖔ其他胁迫处理均在植
            ྉዶዶ͐ँጢጢऐሕɯܦ᧣໧ԮÞۗϟऐ԰ྉશ۪ԡԡϟԡጢϟᎮϟऐ঎ϟɯܦ᧣໧ԮÞۗϟᎮँ        物培养室ྉϟᤃ ၤ 光照 ᣰऐ ၤ 黑暗ᖔ白天 ԰ऐ ቩ ᣰ 夜晚 ԰࿗
            ྉዶዶᓂᎮᤃԡँϟ঎ϟɯܦ᧣໧ԮÞۗሕᤃྉዶዶ۪ጢϟϟሕԡ঎ϟɯᤥ                  ቩɯ进行ᤥ
            ϓॹᇺ ᧣໧Ԯዛ௴ϓԣ 转录活性分析                                 ϟ঎ጢ঎ሕ 植物激素处理方法জ 取苗龄 ϟ࿗ ʛ 的水稻幼
                 双荧光素酶报告系统是萤火虫荧光素酶                             苗作为材料ᖔ进行植物激素处理ᤥ 在培养液中分
            ྉ஦ᔽʢᔀ஦᤟ᢃ ᤟ࣼዹᔽ஦ᔀʢᑕ༁ᔀᖔᓂВऊɯ 检测系统和海肾荧光素酶               别添 加 ϟԡԡ ဂቝᆍ᤟ ኼ ᓂ 脱落酸 ྉᑕᤦ༁ዹᔽ༁ᔽዹ ᑕዹᔽʛᖔ
                                                                                     ᥋ϟ
            ྉʢᔀႿᔽ᤟᤟ᑕ ᤟ࣼዹᔽ஦ᔀʢᑕ༁ᔀᖔ኏ጶશɯ 检测系统的组合ᖔ常用来               ዶାዶɯᖔϟ ဂቝᆍ᤟ ኼ ᓂ   ᥋ϟ  ԰ᖔ ࿗᥋表芸苔素内酯 ྉ԰ᖔ࿗᥋
            分析转录因子的转录活性ᤥ 本研究使用拟南芥原                             ᔀᡱᔽᤦʢᑕ༁༁ᔽႿᆍ᤟ᔽʛᔀᖔ ԰ᖔ࿗᥋ᔀାᓂɯᖔϟ ဂቝᆍ᤟ ኼ ᓂ 吲哚᥋ሕ᥋乙
                                                                                                  ᥋ϟ
            生质体瞬时表达系统进行双荧光素酶实验ᖔ其中                              酸ྉ ᔽႿʛᆍ᤟ᔀ᥋ሕ᥋ᑕዹᔀᡷᔽዹ ᑕዹᔽʛᖔ᧧ዶዶɯᖔ处理 ԡܦϟܦ԰࿗ܦ࿗ऐ ၤ
            拟南芥原生质体的提取参考 ۼࣼ 等ྉ԰ԡԡँɯ 的方                         后取材ྉ取整株幼苗ɯᖔ未处理材料同时取样作为
            法ᖔ双荧光素酶活性的检测根据 ۪ʢᆍቝᔀ੫ᑕ 公司                          对照组ᖔ所有样品于液氮速冻后 ͱ ऐԡ ቩ 保存ᤥ 激
            ᧕ࣼᑕ᤟᥋ᓂࣼዹᔽ஦ᔀʢᑕ༁ᔀ ኏ᔀᡱᆍʢᡷᔀʢ ዶ༁༁ᑕᢃ ୩ᢃ༁ᡷᔀቝ 试剂盒          素处理的材料均放在植物培养室ྉϟᤃ ၤ 光照 ᣰऐ ၤ
            ྉऊᑕᡷ঎ શᆍ঎ ጶϟँϟԡɯ 中的说明书操作ᖔ并通过计算                     黑暗ᖔ白天 ԰ऐ ቩ ᣰ 夜晚 ԰࿗ ቩ ɯᤥ
            ᓂВऊ ᣰ ኏ጶશ 的比值分析 ᨃ༁Իዶఋϟ԰ 的转录激活 ᣰ 抑制                 ϟ঎ጢ঎࿗ 水稻 ኏શዶ 的提取及 ዹ᧕શዶ 第一条链的合
            活性ᤥ                                                成জ኏શዶ 提取根据华越洋超快型植物 ኏શዶ 提取
            ϓॹ྽ ᧣໧Ԯዛ௴ϓԣ 启动子分析                                  试剂盒ྉ ऊᑕᡷ঎ શᆍ঎ ԡ࿗ϟᤃ᥋ጢԡɯ 的说明书进 行ᤥ 参照
                 以水稻 ᧣໧Ԯዛ௴ϟ԰ 基因的起始密码子ྉዶఋ᥈ɯ 上                   ఋᆍᢃᆍᤦᆍ 反转录试剂盒ྉऊᑕᡷ঎ શᆍ঎ è୩͐᥋ሕԡϟɯ说明书进
            游԰ ԡԡԡ ᤦᡱ 作为研究对象ᖔ利用在线启动子分析工                        行 ዹ᧕શዶ 第一条链的合成ᤥ
            具 ۪ᓂዶऊጶྉၤᡷᡷᡱ᧥ ᣰ ᣰ औऔऔ঎ʛႿᑕ঎ᑕ஦஦ʢዹ঎੫ᆍ঎ᢼᡱ ᣰ ۪ᓂዶऊጶ ᣰ ɯ和  ϟ঎ጢ঎ጢ ᧣໧Ԯዛ௴ϟ԰ 基因的 ी኏ఋ᥋۪ऊ኏཯ ीࣼᑕႿᡷᔽᡷᑕᡷᔽ׹ᔀ ʢᔀᑕ᤟᥋

            ۪᤟ᑕႿᡷऊዶ኏ጶ ྉ ၤᡷᡷᡱ᧥ ᣰ ᣰ ᤦᔽᆍᔽႿ஦ᆍʢቝᑕᡷᔽዹ༁঎ ᡱ༁ᤦ঎ ࣼ੫ᔀႿᡷ঎ ᤦᔀ ᣰ  ᡷᔽቝᔀ ۪ऊ኏ɤ检测জ 本研究中的 ी኏ఋ᥋۪ऊ኏ 采用 ୩ɟା኏
            औᔀᤦᡷᆍᆍ᤟༁ᣰ ᡱ᤟ᑕႿᡷዹᑕʢᔀ ᣰ ၤᡷቝ᤟ᣰ ɯᖔ对 ᧣໧Ԯዛ௴ϟ԰ 的启动子序      染料 法 ྉ ᥈ᔀႿ୩ᡷᑕʢ ԰ ġ ኏ᔀᑕ᤟୩ᡷᑕʢ ᥈ʢᔀᔀႿ èᑕ༁ᡷ ᥘᔽ଴ᡷࣼʢᔀᖔ

            列进行调控元件的预测和分析ᤥ                                     ऊᑕᡷ঎ શᆍ঎ ዶሕԡϟ᥋ϟԡɯᤥ 以水 稻 ᓣጛÞ᤬ϟᐹ 基因为内参
            ϓॹጇ ᧣໧Ԯዛ௴ϓԣ 基因在非生物胁迫和植物激素处理                        ྉी۪ऊ኏᥋ᔀጶè᥋ϟᑕ᥋è᧥ ጢࣕ᥋᥈ऊዶऊ᥈ऊఋऊఋఋऊఋఋ᥈ऊఋఋఋऊ᥋ሕࣕଫ
            下的表达分析                                             ी۪ऊ኏᥋ᔀጶè᥋ϟᑕ᥋኏᧥ ጢࣕ᥋ዶ᥈᥈᥈ዶዶఋऊఋఋ᥈ఋऊዶ᥈᥈᥈ఋఋ᥈᥋ሕࣕɯᖔ
            ϟ঎ጢ঎ϟ 水稻种子消毒及幼苗水培方法জ 水稻种子去                         采用 ԰  ͱσσऊఋ  法计算 ྉ ᓂᔽ׹ᑕҴ ᪲ ୩ዹၤቝᔽᡷᡷ੫ᔀႿᖔ ԰ԡԡϟɯ
            壳后放入 ጢԡ ቝᓂ 离心管中ᖔ加 Ꭾጢᠮ乙醇表面消毒 ϟ                      ᧣໧Ԯዛ௴ϟ԰ 基因的相对表达量ྉी۪ऊ኏᥋ᨃ༁Իዶఋϟ԰᥋è᧥ ጢࣕ᥋
            ቝᔽႿᖔ用 ԰঎ጢᠮ 次氯酸钠消毒 ጢԡ ቝᔽႿᖔ无菌水漂洗 ጢ                   ᥈ዶऊऊఋ᥈ዶዶऊऊዶఋऊऊዶऊऊऊఋ᥈᥋ሕࣕଫ ी۪ऊ኏᥋ᨃ༁Իዶఋϟ԰᥋኏᧥
            次ᖔ将种子置于 ϟᣰ ԰ ᥘ୩ 固体培养基中培养ᤥ 将以上                      ጢࣕ᥋ऊ᥈᥈ఋዶఋऊऊዶዶ᥈ዶዶऊఋ᥈᥈ఋ᥈᥈ዶዶ᥋ሕࣕɯᤥ
            培养 ጢʛ 的无菌苗移至 ँᤃ 孔 ۪ऊ኏ 塑料板ྉ剪去管                      ϓॹᣤ ᧣໧Ԯዛ௴ϓԣ 基因过表达载体和 ࣷቴᧇ୒ۗቴ ᣑ ࣷᐹ໧࣮
            底ɯ进行水培ྉϟᤃ ၤ 光照ᣰऐ ၤ 黑暗ᖔ白天 ԰ऐ ቩ ᣰ 夜晚                 载体构建
            ԰࿗ ቩɯᖔ水稻营养液配方参照ᥥ国际水稻研究所水稻                              由于 ᧣໧Ԯዛ௴ϟ԰ 在水稻根中特异表达ྉ 陈宗新
            营养液ɼ配制ᖔጢጲᤃ ʛ 换一次水培液ᤥ                               等ᖔ԰ԡϟँɯᖔ因此以野生型水稻根的 ዹ᧕શዶ 为模板ᖔ利
            ϟ঎ጢ঎԰ 非生物胁迫处理方法জ 取苗龄 ϟ࿗ ʛ 的水稻                      用引物 ᨃ༁Իዶఋϟ԰᥋è᧥ ጢࣕ᥋ऊ᥈᥈᥈ዶఋऊऊዶఋ᥈ዶዶ᥈ዶ᥈᥈ఋఋ
            幼苗为材料进行非生物胁迫处理ᤥ 具体如下᧥低                             ఋ᥈ऊዶ᥋ሕࣕ ྉ 酶切 位 点 ଧᐹቂ̀᧧ ɯᖔ ᨃ༁Իዶఋϟ԰᥋኏᧥ ጢࣕ᥋
            温胁迫ᖔ将水稻幼苗放置于 ࿗ቩ 光照培养箱ྉϟᤃ ၤ                         ዶዶऊఋ᥈ऊዶ᥈ऊఋዶ᥈ఋዶ᥈ऊऊ᥈ዶऊ᥈ऊዶ᥋ሕࣕ ྉ 酶切位 点
            光照 ᣰऐ ၤ 黑暗ɯ 中ଫ渗透胁迫ᖔ将水稻幼苗置于含                        ۗ໧ᡙ᧧ɯ 扩增 ᧣໧Ԯዛ௴ϟ԰ 基因ᖔ 利用双酶切法构建到
            有 ԰ԡᠮ ۪ጶ᥈ྉᡱᆍ᤟ᢃᔀᡷၤᢃ᤟ᔀႿᔀ ੫᤟ᢃዹᆍ᤟ɯᤃ ԡԡԡ的水稻营养           ᡱऊዶᥘା᧧ዶϟሕԡϟ 载体上ᖔ 得到过表达载体

            液中ଫ氧化胁迫ᖔ将水稻幼苗置于含有 ԰ԡ ဂቝᆍ᤟ኼ                         ᡱऊዶᥘା᧧ዶϟሕԡϟ᧥᧥ሕጢ୩᧥᧥᧣໧Ԯዛ௴ϟ԰ᤥ
            ᓂ 甲基紫精ྉ ቝᔀᡷၤᢃ᤟ ׹ᔽᆍ᤟ᆍ੫ᔀႿᖔᥘ჆ɯ 的水稻营养液                     利用华南农业大学刘耀光实验室设计的网站
              ᥋ϟ
            中ଫ盐胁迫处理ᖔ将水稻幼苗置于含有 ϟԡԡ ቝቝᆍ᤟ ኼ                       ऊ኏᧧୩۪኏᥋᥈ጶྉၤᡷᡷᡱ᧥ᣰ ᣰ ༁Ҵ᤟঎༁ዹᑕࣼ঎ᔀʛࣼ঎ዹႿ ᣰ ɯ设计 ᧣໧Ԯዛ௴ϟ԰
              ᥋ϟ                                               敲除靶点ᤥ 为提高敲除效率ᖔ采用双靶点载体的策
            ᓂ શᑕऊ᤟ 的水稻营养液中ᤥ 分别收取处理 ԡܦԡ঎ጢܦ
            ϟܦሕܦᤃܦϟ԰ܦ԰࿗ܦ࿗ऐ ၤ 的整株幼苗ᖔ未处理材料同时                     略ᖔ以 ᧣໧Ԯዛ௴ϟ԰ 基因设计 ԰ 个靶点ᖔ其中靶点 ጢࣕ᥋
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