Page 9 - 《广西植物》2022年第11期
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ϟϟ 期 陈 言 博 等 ᧥ 水稻 ᧣Ԯዛ௴ϟ 基因响应非生物胁迫和植物激素的研究 ϟ ऐ ԡ ϟ
ऊዶఋ᥈ዶ᥈᥈ऊ᥈ऊऊዶऊऊ᥈ऊ᥈ऊऊዶ᥋ሕࣕ以 Вᤃ 为启动子ᖔ靶 族中的部分成员进行多重序列比对ᖔ结果如图 ϟ 所
点 ጢࣕ᥋ఋ᥈ऊ᥈ዶऊ᥈ዶऊዶఋ᥈ዶ᥈ऊዶఋऊዶ᥈᥋ሕࣕ以 Вሕ 为启动 示ᖔᨃ༁Իዶఋϟ 的结构域与拟南芥和水稻中的同源蛋
子ᖔ具体载体构建参考 ᥘᑕ 等ྉԡϟጢɯ的方法ᤥ 白一致ᖔ均含有 个包含 ͐ዶᓂ᥈᥈̀ 保守序列的锌指
ϓॹ᎒ ᧣Ԯዛ௴ϓԣ 基因遗传转化水稻及转基因植株鉴定 结 构域以及 ϟ 个 ጶዶ ቝᆍᡷᔽ ྉ ᔀᡷၤᢃᔀႿᔀ᥋ʢᔀ༁ᡱᆍႿ༁ᔽᔀ
将 ϟᤃ 中构建好的重组载体ྉ 过表达载体和 ᔀᔀቝᔀႿᡷ ᤦᔽႿʛᔽႿ੫ ᑕዹᡷᆍʢ᥋ᑕ༁༁ᆍዹᔽᑕᡷᔀʛ ᑕቝᡱၤᔽᡱၤᔽᔽዹ ʢᔀᡱʢᔀ༁༁ᔽᆍႿ
ऊ᧧୩۪ ᣰ ऊᑕ༁ँ 载体ɯ 转化至根癌农杆菌 ጶ̀ዶϟԡጢ ቝᆍᡷᔽɯᤥ 蛋白 ऊ 末端的 ጶዶ ቝᆍᡷᔽ 通常被认为具有
感受态细胞中ᤥ 采用农杆菌介导的遗传转化法将 抑制活性ྉᥘᔀᔽ༁༁Ⴟᔀʢ ᪲ ᥘᔽዹၤᑕᔀᖔ ϟँँᎮଫ ጶႿ੫ᤦʢᔀዹၤᡷ ᔀᡷ
重组载体转进水稻愈伤组织中ᖔ具体参考李美茹 ᑕᖔ ԡԡ࿗ଫ ऊᔽᡷዹᔽ᥋ɟᔽቝᑕझ ᪲ ᥘᔽᡷᡷᔀʢᖔ ԡԡऐɯᤥ 以上结
和李洪清ྉԡԡሕɯܦ王亚琴等ྉԡϟϟɯ的方法ᤥ 果说明ᖔᨃ༁Իዶఋϟ 是一个典型的 ऊ̀ 型锌指蛋
转基因植株的鉴定采用 ۪ऊ 方法ᤥ 剪取 ఋ 代 白ᖔ属于 ऊϟ᥋ᔽ 亚家族ᖔ可能具有转录抑制活性ᤥ
ϟ
幼苗约 ዹቝ 长的叶片ᖔ利用 ఋ۪୩ 溶液ྉϟԡԡ ቝቝᆍ ኼ ԣॹԣ 转录因子 ᧣Ԯዛ௴ϓԣ 的转录活性分析
᥋ϟ ᥋ϟ 采用双荧光素酶报告系统检测 ᨃ༁Իዶఋϟ 的转
ᓂ ఋʢᔽ༁᥋̀ऊᖔ ᡱ̀ ऐԡଫ ϟԡ ቝቝᆍ ኼ ᓂ ጶ᧕ఋዶ᥋શᑕ ᖔᡱ̀
᥋ϟ 录活性ᖔ将 ᧣Ԯዛ௴ϟ 与包含 ᥈ዶᓂ࿗ ᧕શዶ 结合结构
ऐԡଫ ϟ ቝᆍ ኼ ᓂ ऊɯ提取 ᧕શዶᤥ 过表达 ᧣Ԯዛ௴ϟ
的 转基因植株利用抗性筛选标记基因 ̵ᡓᡙᧇᧇ 域ྉ ᥈ዶᓂ࿗ ᧕શዶ ᤦᔽႿʛᔽႿ੫ ʛᆍቝᑕᔽႿᖔ᥈ዶᓂା᧕ɯ 的效应载
ྉ ၤᢃ੫ʢᆍቝᢃዹᔽႿ ᡱၤᆍ༁ᡱၤᆍᡷʢᑕႿ༁ᔀʢᑕ༁ᔀ ᧧᧧ ɯ 设计引物 体融合ྉ 图 ᧥ዶɯᖔ同时与携带荧光素酶基因的报
̀ᢃ੫᥋è᧥ ጢࣕ᥋ ᥈ዶఋ᥈ఋఋ᥈᥈ऊ᥈ዶऊऊఋऊ᥈ఋዶఋఋ᥋ሕࣕᖔ ̀ᢃ੫᥋᧥ 告载体共同转化拟南芥原生质体ᖔ检测对照组和
ጢࣕ᥋ఋऊ᥈ఋఋዶఋ᥈ఋఋఋዶఋऊ᥈᥈ऊዶऊఋఋఋ᥋ሕࣕᖔ 以 ᧕શዶ 为模 实验组的萤火虫荧光素酶活性和海肾荧光素酶活
板进 行 ۪ऊ 扩增检测ᤥऊ᧧୩۪ 植株采用引物 性并 计算相对 ᓂВऊ ᣰ ጶશ 比值ᤥ 实验组的相对
ऊ᧧୩۪᥋è᧥ ጢࣕ᥋ఋऊዶ᥈ዶऊዶዶऊዶ᥈ዶ᥈ዶ᥈᥈ఋఋ᥈᥈ఋ᥋ሕࣕ 和 ᓂВऊ ᣰ ጶશ 比值显著低于对照组ྉ 图 ᧥ାɯᖔ说明转
ऊ᧧୩۪᥋᧥ ጢࣕ᥋ఋዶ᥈ఋዶ᥈ऊऊ᥈ዶऊ᥈ऊዶ᥈ఋऊዶዶऊ᥋ሕࣕ 扩增 录因子 ᨃ༁Իዶఋϟ 具有转录抑制活性ᤥ
᧣Ԯዛ௴ϟ 包括靶位点在内的片段ᖔ经测序后检测突 ԣॹᇺ ᧣Ԯዛ௴ϓԣ 启动子的序列分析
变位点ᤥ 以水稻 ᧣Ԯዛ௴ϟ 基因的起始密码子ྉዶఋ᥈ɯ 上
ϓॹࣽ 转基因水稻幼苗对外源 ዛଧዛ 的敏感性分析 游 ԡԡԡ ᤦᡱ 为研究对象ᖔ使用启动子在线分析网
取野生型ܦ过表达 ᧣Ԯዛ௴ϟ 和敲除 ᧣Ԯዛ௴ϟ 植 站对 ᧣Ԯዛ௴ϟ 启动子进行调控元件预测ᖔ结果显
株的种子ᖔ经表面消毒后播种于含不同浓度 ዶାዶ 示ᖔ᧣Ԯዛ௴ϟ 启动子上调控元件非常丰富ᖔ除了基
ྉԡܦϟܦጢܦϟԡ ဂቝᆍ ኼᓂ ɯ的 ϟᣰ ᥘ୩ 培养基上ᖔ每个株 本的核心启动子元件ྉఋዶఋዶ ᤦᆍ 和 ऊዶዶఋ ᤦᆍ 元
᥋ϟ
系在不同 ዶାዶ 浓度培养基上播种 ሕԡ 粒种子ᖔ在植 件ɯ以外ᖔ该段序列中还具有非生物胁迫和激素相
物培养室ྉϟᤃ ၤ 光照ᣰऐ ၤ 黑暗ᖔ白天 ऐ ቩ ᣰ 夜晚 ࿗ 关的顺式作用元件ᤥ 其中ᖔ与非生物胁迫相关的
ቩɯ培养 ϟԡ ʛ 后拍照并统计株高和根长ᤥ 有 个 ᥘɟା 转录因子结合元件ଫ与激素相关的元
ϓॹ࣮ 数据分析 件包括 ሕ 个 ᥈ዶ 响应元件ܦሕ 个 ዶାዶ 响应元件ܦ
所有实验均进行 ሕ 次生物学重复ᖔ每次重复中 个 ዶࣼᔽႿ 响应元件和 ϟ 个 Ȯዶ 响应元件等ྉ 图 ሕɯᤥ
每个样品设置 ሕ 个技术重复ᤥ 数据统计为平均值ō 由此推测ᖔ᧣Ԯዛ௴ϟ 基因的表达可能受非生物胁
标准偏差ᤥ 利用软件 ୩۪୩୩ ୩ᡷᑕᡷᔽ༁ᡷᔽዹ༁ 中的单因素方 迫因子和多种激素的调节ᤥ
差分析进行数据的显著性分析ྉ᥍ۗጐԡԡጢଫ᥍᥍ۗጐ ԣॹ 非生物胁迫处理下 ᧣Ԯዛ௴ϓԣ 的表达分析
ԡԡϟɯᤥ 拟南芥 Ԯዛ௴ϟ 在活性氧以及非生物胁迫信号
传导中起着重要作用ྉ ᧕ᑕᔀᡷᆍᑕ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡԡጢɯᤥ 水
জ 结果与分析 稻 ᧣Ԯዛ௴ϟ 启动子中含有非生物胁迫相关的元件
ྉ图 ሕɯᖔ推测其可能响应非生物胁迫ᤥ 因此ᖔ进一
ԣॹϓ 转录因子 ᧣Ԯዛ௴ϓԣ 保守结构域的分析 步检测了水稻幼苗在低温ྉ࿗ ቩ ɯܦ渗透胁迫ྉԡᠮ
᥋ϟ
᧣Ԯዛ௴ϟྉᨃ༁ԡጢ੫ԡϟϟ࿗࿗ԡԡɯ 基因编码区全长 ጢँᎮ ۪ጶ᥈ ᤃ ԡԡԡɯܦ氧化胁迫ྉԡ ဂቝᆍኼᓂ ᥘɯ 和盐胁
ᤦᡱᖔ该基因不含内含子ᖔ编码 ϟँऐ 个氨基酸ྉ陈宗新 迫ྉϟԡԡ ቝቝᆍኼᓂ શᑕऊɯ 处理下 ᧣Ԯዛ௴ϟ 的表达ᤥ
᥋ϟ
等ᖔԡϟँɯᤥ 为进一步研究 ᨃ༁Իዶఋϟ 蛋白结构域的 如图 ࿗᧥ዶ 所示ᖔ低温处理 ࿗ऐ ၤ 内ᖔ᧣Ԯዛ௴ϟ 的表达
保守性及其序列特点ᖔ对拟南芥和水稻 ऊϟ᥋ᔽ 亚家 均呈下调趋势ᖔ其中在处理 ϟ ၤ 时ᖔ᧣Ԯዛ௴ϟ 的表
