Page 80 - 《广西植物》2022年第3期
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４ ２ ４ 广 西 植 物 ４２ 卷
１.２ 方法 包入锡杯中ꎮ 首先ꎬ将包好的样品放入自动进样
１.２.１ 实验设计 将甘蓝型油菜组培苗接种于增 器中进行测定ꎻ然后ꎬ测定稳定碳同位素值ꎮ 稳定
殖培养基中ꎬ培养基的类型为 ＭＳ 培养基ꎬ硝态氮 碳同位素值用 δ 表示ꎬ计算公式如下:
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是 ＭＳ 培养基中的唯一氮源ꎬ使用硝酸钠来提供硝 δ Ｃ (‰)＝ (Ｒ / Ｒ －１) ×１ ０００ (１)
ｓａｍｐｌｅ ｓｔａｎｄａｒｄ
态氮ꎮ 设置 ５ 个硝酸钠浓度ꎬ分别是 １０、２０、４０、８０ 式中: Ｒ 为甘蓝型油菜组培苗叶片的同位
ｓａｍｐｌｅ
和 １２０ ｍｍｏｌＬ ꎮ １０、２０ ｍｍｏｌＬ 硝酸钠浓度下 素比值( Ｃ / Ｃ)ꎻＲ 为标准物质的同位素比
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ｓｔａｎｄａｒｄ
的盐胁迫程度视为无ꎬ４０ ｍｍｏｌＬ 硝酸钠浓度对 值ꎮ 测定稳定碳同位素时用 ＩＡＥＡ￣ＣＨ￣３ 和 ＩＡＥＡ￣
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应轻度盐胁迫ꎬ８０ ｍｍｏｌＬ 硝酸钠浓度对应中度 ＣＨ￣６ 进行校正( Ｙｏｕｓｆｉ ｅｔ ａｌ.ꎬ２０１３)ꎮ ＭＡＴ２５３ 测
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盐胁迫ꎬ１２０ ｍｍｏｌＬ 硝酸钠浓度对应重度盐胁 定稳定碳同位素值的精度为 ０.２‰ꎮ
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迫ꎮ 培养 基 中 细 胞 分 裂 素 ６￣ＢＡ 的 浓 度 为 ２. ０ １.２.５ 数据统计与分析 所有测量的数据均用平
ｍｇＬ ꎬ生长素 ＮＡＡ 的浓度为 ０.２ ｍｇＬ ꎮ 在此 均值 ± 标准差表示ꎬ对各处理间数据进行单因子
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细胞分裂素和生长素浓度比例下ꎬ甘蓝型油菜组 显著性差异分析(Ｐ<０.０５)ꎮ 文中的图用 Ｏｒｉｇｉｎ 软
培苗在整个增殖阶段没有根的生成ꎮ 培养基蔗糖 件(９.０ 版本)绘制ꎮ
含量为 ３０ ｇＬ ꎬ琼脂粉含量为 ７.５ ｇＬ ꎮ 首先
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２ 结果与分析
调节培养基 ｐＨ 值到 ５.８ꎬ每个三角瓶分装 ５０ ｍＬ
培养基ꎬ用封口膜密封ꎻ然后将培养基放置于高压
灭菌锅中ꎬ在 １２１ ℃ 下灭菌 ２０ ｍｉｎꎮ 组培室的光 ２.１ 不同硝酸钠浓度对甘蓝型油菜组培苗生长的
￣２ ￣１ 影响
周期为 １２ ｈꎬ光照强度为 ５０ μｍｏｌｍ ｓ ＰＰＦＤꎬ
培养室温度为(２５ ± ２)℃ ꎮ 甘蓝型油菜组培苗培养 ５ 周后的生长情况见
１.２.２ 组培苗生长参数测定 组培苗的初始鲜重 表 １ꎮ 由表 １ 可知ꎬ硝酸钠浓度对甘蓝型油菜组培
通过称重的方式测定ꎮ 先称量未转接组培苗的培 苗的生长具有显著的影响ꎻ随着硝酸钠浓度的增
养基重量ꎬ再称量转接组培苗后的培养基重量ꎬ 加ꎬ甘蓝型油菜组培苗的增重呈现先增加后减少
２ 次称量的差值即为接种组培苗的初始鲜重ꎮ 的趋势ꎻ甘蓝型油菜组培苗遭受轻度盐胁迫时ꎬ供
经过 ５ 周培养后ꎬ从三角瓶中取出组培苗ꎬ测 应 ４０ ｍｍｏｌＬ 硝态氮能消除轻度盐胁迫的不利
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定组培苗的鲜重ꎬ组培苗的鲜重减去初始鲜重即 影响ꎻ供应 ８０ ｍｍｏｌＬ 的硝态氮能够有效缓减中
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为甘蓝型油菜组培苗的增重ꎮ 将组培苗的叶片剪 度盐胁迫的不利影响ꎮ 但是ꎬ当盐胁迫的程度达
下并于 １０８ ℃ 杀青半小时ꎬ接着在 ６０ ℃ 恒温下烘 到最大时ꎬ过量的硝态氮供应也不能明显改善重
干ꎬ随后将烘干后叶片捣碎为粉末ꎮ 度盐胁迫对甘蓝型油菜组培苗生长的抑制ꎮ
１.２.３ 组培苗叶绿素含量测定 首先ꎬ将 ０.１ ｇ 组 此外ꎬ盐胁迫的程度还会影响甘蓝型油菜组
培苗叶片放入研钵中ꎬ倒入一定量的液氮ꎬ充分研 培苗芽的增殖效果ꎬ在中度和重度盐胁迫条件下ꎬ
磨后在研钵中加入 ５ ｍＬ ９５％分析纯乙醇ꎬ将叶绿 甘蓝型油菜组培苗的增殖效果最差ꎬ而轻度盐胁
素提取液转入 １５ ｍＬ 离心管中ꎻ然后ꎬ用 ５ ｍＬ ９５％ 迫则 对 甘 蓝 型 油 菜 组 培 苗 的 增 殖 不 产 生 显 著
分析纯乙醇涮洗研钵ꎬ将涮洗研钵后的 ９５％分析 影响ꎮ
纯乙醇转入 １５ ｍＬ 离心管中ꎮ 将装有叶绿素提取 ２.２ 不同硝酸钠浓度对甘蓝型油菜组培苗叶绿素
液的离心管于 ４ ℃ 冰箱中静置 ２４ ｈ 以上ꎬ待叶片 含量的影响
组织变为白色后ꎬ先在离心机中进行离心ꎬ再进行 甘蓝型油菜组培苗叶片的叶绿素含量受到硝
叶绿素含量的测定ꎮ 用分光光度计在 ６６５ ｎｍ 和 态氮供应量和盐胁迫程度的共同影响ꎮ 从表 ２ 可
６４９ ｎｍ 处测定叶绿素的吸光度ꎬ根据 Ａｌｓａａｄａｗｉ 等 以看出ꎬ随着硝酸钠浓度的增加ꎬ总叶绿素含量呈
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(１９８６)的公式计算叶绿素的含量ꎮ 现先增加后减少的趋势ꎮ 在 １０ ~ ４０ ｍｍｏｌＬ 硝
１.２.４ 组培苗叶片稳定碳同位素测定 组培苗叶 酸钠浓度范围内ꎬ继续增加无机氮的供应能明显
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片稳定碳同位素比值(δ Ｃ) 通过气体同位素质谱 提高叶片总叶绿素的含量ꎮ 然而ꎬ随着盐胁迫程
仪(ＭＡＴ２５３ꎬＧｅｒｍａｎｙ) 进 行 测 定ꎬ 采 用 连 续 流 模 度的加强( 轻度至重度盐胁迫)ꎬ继续增加无机氮
式ꎮ 将 ２０ μｇ 叶片碳和相对应的碳标准物质分别 的供应对提高叶片总叶绿素含量无效ꎬ 且重度盐胁
