Page 171 - 《广西植物》2022年第8期
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ϟ ࿗ ԡ 广জ 西জ 植জ 物 ࿗ 卷
析序列的编码区ଫ利用 ऊ᧕᧕ 蛋白保守结构域数据 果表明ᖔᥘሕ᥈ఋϟ 具备尿嘧啶二磷酸᥋糖基转移酶结
库 ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ औऔऔ Ⴟዹᤦᔽ Ⴟቝ Ⴟᔽၤ ੫ᆍ ᣰ ୩ᡷʢࣼዹᡷࣼʢᔀ ᣰ ዹʛʛ ᣰ 构域ྉ۪ᓂશԡᤃᎮԡɯᖔВ᧕۪᥋葡萄糖醛酸基ᣰ 葡萄糖基转
औʢᡱ༁ᤦዹ੫ᔽɯ 分析蛋白的保守域ଫ 利用 ۪ʢᆍᡷ۪ᑕʢᑕቝ 移酶保守域ྉВ᧕۪᥈ఋɯᖔ表明 ᥘሕ᥈ఋϟ 属于糖基转移
ྉၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ औᔀᤦ ᔀᡱᑕ༁ᢃ ᆍʢ੫ ᣰ ᡱʢᆍᡷᡱᑕʢᑕቝ ᣰ ɯ 在线软件对 酶超家族ᖔ具有 ᥈ఋϟᡸ᥈ᡷ᥋ᔽҴᔀ 结构域ᖔ表明其属于植
紫玉兰ጸ红元宝ᆥᥘሕ᥈ఋϟ 蛋白序列的分子量ܦ等电 物界中最大的家族 ϟ 糖基转移酶ྉ᥈ఋϟ༁ɯᤥ 按照蛋
点ܦ不稳定系数ܦ脂肪指数和亲疏水性等理化性质 白质的三维折叠模式ᖔ糖基转移酶可以大致划分为
进行预测ଫ利用 ᡱʢᆍᡷ༁ዹᑕᔀ 在线网站分析该蛋白质 ᥈ఋ᥋ዶܦ᥈ఋ᥋ା 和 ᥈ఋ᥋ऊ 三大类ྉऊᆍࣼᡷᔽႿၤᆍ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡԡሕɯᖔ
的亲 ᣰ 疏水性ྉ ၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ औᔀᤦ ᔀᡱᑕ༁ᢃ ᆍʢ੫ ᣰ ᡱʢᆍᡷ༁ዹᑕᔀ ᣰ ɯଫ 预测结果显示ᖔᥘሕ᥈ఋϟ 为 ᥈ఋ᥋ା 类的糖基转移酶ᤥ
利用 ୩ᨃ۪ᥘዶ 在线软件ྉၤᡷᡷᡱ༁᧥ ᣰ ᣰ Ⴟᡱ༁ᑕ᥋ᡱʢᑕᤦᔽᔽᤦዹᡱʢ ᣰ 利用 શऊା᧧ 的在线 ାᑕ༁ᡷᡱ 功能ᖔ将 ᥘሕ᥈ఋϟ 的
ዹ੫ᔽ᥋ᤦᔽႿ ᣰ ༁ᔀዹᡱʢᔀʛᡸ༁ᆍᡱቝᑕ ᡱɯ 预测 ᥘሕ᥈ఋϟ 蛋白序列 氨基酸序列与其他植物的氨基酸序列进行在线比
的 二级结构ଫ 利用 ୩ۼ᧧୩୩᥋ᥘᨃ᧕ጶᓂ 在 线网站 对ᖔ 结果表明ᖔᥘሕ᥈ఋϟ 与沉水樟 ྉ ࣷᔠႥႥᐹቂᅳቂࣩቂ
ྉ༁औᔽ༁༁ቝᆍʛᔀᔀᡱᑕ༁ᢃ ᆍʢ੫ɯ 预测 ᥘሕ᥈ఋϟ 蛋白的三级 ቂᔠዞʗᐹႥᡙ၊ࣩቂɯሕ᥈ఋ 的相似性最高ᖔ达 ᤃԡሕጢᠮᖔ与荷
结构ଫ使用 ᧕શዶᥘዶશ Ꭾԡ 软件进行多序列比对ᖔ并 花ྉ ટᓣᤀࣩቂᤇᅳ Ⴅࣩዞᔠஏᓣʗᐹɯܦ杨梅ྉ ᤹ᅳʗᓣᤀᤀᐹ ʗࣩᤇʗᐹɯܦ海枣
使用 ᥘጶ᥈ዶ ᤃԡ 软件构建系统发育进化树ᖔ系统发 ྉۗ၊ᅳᓣႥᔠଝ ʐᐹዞᡙᡥᤀᔠஏᓣʗᐹɯܦ美洲葡萄ྉ Ⴌᔠᡙᔠ ᤀᐹᤇʗࣩዞᐹɯܦ蓖
育进化树的构建在序列比对后ᖔ采用邻接法建树 麻ྉቴᔠዞᔠႥࣩ ዞᅳቂቂࣩႥᔠɯ 等物种 ሕ᥈ఋ 的相似性较高ᖔ
ྉႿᔀᔽ੫ၤᤦᆍʢ᥋ᢼᆍᔽႿᔽႿ੫ᖔશȮɯᖔᤦᆍᆍᡷ༁ᡷʢᑕᡱ 重复 ϟ ԡԡԡ 次获得 为 ࿗ँԡԡᠮ ጲ ጢ࿗Ꭾᠮᤥ
分支可信度ᤥ 使用 ᧕શዶᥘዶશ Ꭾԡ 软件将 ᥘሕ᥈ఋϟ 推导的氨
ϓॹጇ ᤹ᤀᇺᤩ௴ϓ 在花开放的不同时期与组织的表达分析 基酸序列与其他物种已发表的 ሕ᥈ఋ 氨基酸序列进
使用 ᓂᔽ੫ၤᡷ ऊᢃዹᔀʢ ࿗ऐԡ ֒ ྉ ᆍዹၤᔀɯ 实时定量 行多序列比对ᤥ 图 ࿗ 结果显示ᖔᥘሕ᥈ఋϟ 与拟南
۪ऊ 仪进行基因表达相对定量分析ᤥ 反应体系᧥模 芥ܦ苹果ܦ玉米ܦ矮牵牛ܦ葡萄ܦ三花龙胆 ሕ᥈ఋ 蛋白
板 ဂᓂᖔ上下游引物各 ԡऐ ဂᓂᖔ荧光染料 ାऊ᥈ ͐ᡱዹʢ 的 相似性分别为 ࿗ᤃ ԡᠮܦ ࿗࿗ ԡᠮܦ ࿗ϟ ᤃԡᠮܦ
ᥘᑕ༁ᡷᔀʢ ᥘᔽྉġɯϟԡ ဂᓂ 和 ᤃ࿗ ဂᓂ ʛʛ̀ ᨃᤥ 通过两步 ሕऐ࿗ԡᠮܦ࿗Ꭾԡᠮܦ࿗ϟऐԡᠮᖔ且 ᥘሕ᥈ఋϟ 与其他 ሕ᥈ఋ
法进行 ीఋ᥋۪ऊᖔ扩增程序为 ँጢ ቩ 预变性 ሕԡ ༁ 后 蛋白类似ᖔ其 ऊ 端具备典型的由 ࿗࿗ 个氨基酸组成
运行 ࿗ԡ 个循环ྉँጢቩ ጢ༁ᖔᤃԡቩ ሕԡ ༁ɯᖔ然后再运行 的保守序列ᖔ即植物次生产物糖基转移酶信号序
ྉँጢቩ ጢ༁ᖔᤃԡቩ ϟቝᔽႿᖔँጢቩ ϟጢ ༁ɯᤥ 对反转录得到 列ྉ۪୩۪᥈ ᤦᆍɯᖔ表明 ᥘሕ᥈ఋϟ 具备植物糖基转移
的 ዹ᧕શዶ 分别进行 ጢ 倍数梯度稀释ᖔ以 ᤹ᤇ௴ጛÞ 为内 酶特征ᖔ可能参与次生代谢产物的糖基化修饰ᤥ
参基因ྉ王宁杭等ᖔԡϟँɯᖔ每个样品设置 ሕ 个生物 ᥘሕ᥈ఋϟ 的 ۪୩۪᥈ 基序为 ۼዶ۪͐ఋᥘᓂ᥈̀ዶᓂ᥈ዶè
ͱ σσऊᡷ ఋ̀ऊ᥈ۼશ୩ᥘጶ୩᧧ఋዶ᥈۪ᥘ᧧ऊ۪èè᥈᧕͐ᖔ已有的 研
学重复ᤥ 采用 计算目的基因的相对表达量ᤥ
使用 ୩ᔽ੫ቝᑕ۪ᆍᡷ ϟ࿗ԡ 软件进行数据分析和绘图ᤥ 究表明ᖔ糖供体特异性部分由 ۪୩۪᥈ 盒中的最后氨
基酸残基确定ᖔ当为 ͐ 时使用葡萄糖作为糖供体ᖔ
জ 结果与分析 当为 ̀ 时则使用 半 乳 糖 ྉ ࣼᤦᆍ ᔀᡷ ᑕᖔ ԡԡ࿗ɯᖔ
ᥘሕ᥈ఋϟ 的 ۪୩۪᥈ 基序最后一个残基为 ͐ᖔ 表明
ԣॹϓ ᤹ᤀᇺᤩ௴ϓ 基因克隆及序列分析 ᥘሕ᥈ఋ 可能属于 В᧕۪᥋类黄酮糖基转移酶ᖔ 使用
紫玉兰ጸ 红元宝ᆥ 的 ఋ᥋۪ऊ 结果显示ᖔ扩增 В᧕۪᥋葡萄糖作为糖供体ᤥ
产物长 ϟ ऐᤃሕ ᤦᡱྉ图 ሕɯᖔ将测序得到的序列通与转 ԣॹԣ ᤹ᤀᇺᤩ௴ϓ 基因的生物信息学分析
录组序列 ऊᓂሕሕऐऐ ऊᆍႿᡷᔽ੫ϟ 进行比对ᖔ核苷酸序列 通过 ۪ʢᆍᡷ۪ᑕʢᑕቝ 在线软件分析 ᥘሕ᥈ఋϟ 氨基酸
相似性为 ँँऐ࿗ᠮᤥ 利用 શऊା᧧ 的 ᨃè ᔽႿʛᔀʢ 分析 的理化性质ᖔ结果表明᧥ᥘሕ᥈ఋϟ 编码 ࿗ጢᎮ 个氨基
发现其最长开放阅读框 ϟ ሕᎮ࿗ ᤦᡱᖔ编码 ࿗ጢᎮ 个氨基 酸ᖔ分子式为 ऊ ̀ શ ᨃ ୩ ᖔ相对分子质量
ϟᤃ ሕ࿗ጢᎮ ᤃԡϟ ᤃሕऐ ԡ
酸ᖔ推导 的 氨 基 酸 序列与转录组序列相似性为 为 ࿗ँሕᎮ Ҵ᧕ᑕᖔ理论等电点ྉᡱ᧧ɯ 为 ᤃԡ࿗ᖔ小于 Ꭾᖔ说
ϟԡԡᠮᤥ 将该基因命名为 ᤹ᤀሕᤩ௴ϟᖔ在 ᥈ᔀႿାᑕႿҴ 登录 明其 为 酸 性 蛋 白ଫ 其中带负电荷氨基酸残基
号为 ᥘۼ࿗ጢ࿗ऐᤃᤥ ྉዶ༁ᡱ շ ᥈ࣼɯ数为 ጢԡᖔ带正电荷氨基酸残基ྉዶʢ੫ շ
通过 શऊା᧧ 的 ऊ᧕᧕ 蛋白保守结构域数据库ᖔ对 ᓂᢃ༁ɯ数为 ࿗ጢᖔ丙氨酸含量最多ᖔ占 ϟԡँᠮᖔ 酪氨酸
紫玉兰ጸ红元宝ᆥ ᥘሕ᥈ఋϟ 蛋白保守区进行预测ᖔ结 含量最少ᖔ 占 ԡँᠮଫ 该蛋白不稳定系数为 ࿗ԡᎮϟᖔ
