Page 132 - 《广西植物》2020年第12期

ϟ԰ 期 原 增 艳 等 ᧥ 地黄 ቴ੖ࣷᦵۗᣞ 基因的克隆与表达分析 ϟ ऐ ϟ Ꭾ
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জজ ऊᑕ 是植物细胞中重要的第二信使ᖔ当一些刺 地黄的道地地位ᤥ 怀地黄具有悠久的药用历史ᖔ
԰շ
激信号使胞内 ऊᑕ 浓度增加至阈值时ᖔ产生信号 用药需求不断增加ᖔ但是在栽培生产上ᖔ地黄具有
԰շ
并传 递ᤥ 钙依赖型蛋白激酶 ྉ ዹᑕ᤟ዹᔽࣼቝ᥋ʛᔀᡱᔀႿʛᔀႿᡷ 严重的连作障碍ᖔ每茬收获后需要 ऐጲϟԡ ᑕ 后才能复
ᡱʢᆍᡷᔀᔽႿ ҴᔽႿᑕ༁ᔀ༁ᖔ ऊ᧕۪᣽༁ɯ是一种普遍存在的蛋白激 种ྉ刘红彦等ᖔ԰ԡԡᤃɯᤥ 张重义等ྉ԰ԡϟሕɯ 研究发现ᖔ
酶ᖔ当 ऊ᧕۪᣽ 与 ऊᑕ 结合后ᖔऊ᧕۪᣽ 被活化发挥作 地黄可能依赖钙离子信号系统传递自毒物质信号ᖔ
԰շ
用ྉ᥈ࣼᆍ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ ԰ԡϟँɯᤥ ऊ᧕۪᣽ 在植物响应高温ܦ干 导致连作危害ᖔ其中 ࣷᦵۗᣞ 家族基因在其中也发挥

旱ܦ紫外线等非生物胁迫和内生菌ܦ虫害等生物胁 了重要作用ᤥ 杨楚韵等ྉ԰ԡϟᎮɯ 在地黄中鉴定出了
迫中起重要作用ᖔ同时ᖔऊ᧕۪᣽ 也在植物的生长与 ԰ϟ 个可能参与连作地黄钙信号感知ܦ传导和响应连
发育ܦ 胞 内 激素调节等方面都发挥重要作用 作胁迫进程的 ࣷᦵۗᣞ 家族基因ᖔ但并未对其进行克
ྉ኏ᆍቝᔀᔽ༁ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡԡԡଫ ᥈ᔀᔽ੫ᔀʢ ᔀᡷ ᑕ᤟঎ᖔ԰ԡϟԡɯᤥ ࣷᦵۗᣞ 隆及表达分析ᤥ 本课题组前期进行了地黄组培苗
基因具有 ࿗ 个典型的结构域ᖔ依次分别为 શ 末端 的转录组测序及分析ᖔ从中查找到 ϟ 条新的编码钙
的可变区ܦ催化区ܦ自抑制区和调控区ᤥ 调控区一 依赖性蛋白激酶的基因ᖔ并通过比对发现该基因序

԰շ 列完整ᤥ 本研究分析了该基因编码蛋白的理化特
般含有多个 ऊᑕ 结合的 ጶè 手型结构ྉ ጶè᥋ၤᑕႿʛɯᤥ
ऊᑕ 与 ጶè᥋ၤᑕႿʛ 结合后ᖔऊ᧕۪᣽ 空间结构发生变 性ܦ结构特征和亚细胞定位ᖔ检测了其在不同组织
԰շ
化ᖔ导致自抑制区的抑制作用解除ᖔ促使 ऊ᧕۪᣽ 恢 中的表达特性ᖔ以期为深入研究其在地黄连作障碍
复其蛋白激酶活性ᖔ进而磷酸化下游调控因子ᖔ将 等生物及非生物胁迫中的分子机制提供基础ᤥ
信号传递至下游调控网络ᖔ从而完成对信号的响
ϟজ 材料与方法
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ऊ᧕۪᣽ 在植物根ܦ茎ܦ叶ܦ花ܦ果实和种子等组织中
广泛分布ᤥ 通过基因组数据分析发现ᖔ拟南芥ܦ水 ϓॹϓ 材料
稻ܦ玉米基因组中分别有 ሕ࿗ܦሕϟ 和 ࿗ԡ 个 ࣷᦵۗᣞ 基 材料取自河南中医药大学植物园ᖔ经朱畇昊
因ྉ武志刚等ᖔ԰ԡϟऐɯᤥ 多种药用植物如铁皮石斛 副教授鉴定为玄参科地黄ྉ ቴᓣ၊ቂᐹႥႥᔠᐹ ੖ᤀࣩᡙᔠႥᅳ໧ᐹɯᤥ
ྉ盛况等ᖔ԰ԡϟᎮɯܦ天山雪莲ྉ 田晓涵等ᖔ԰ԡϟᤃɯ 和龙 所用地黄品种为ᥥ沁怀ɼᖔ在 ᤃ 月份地黄开花时ᖔ挖

血树ྉ张浩等ᖔ԰ԡϟԡɯ中的 ࣷᦵۗᣞ 基因也已被克隆ᖔ 取地黄植株整株ᖔ洗净后分别取根ܦ叶ܦ花组织ᖔ用
但地黄 ࣷᦵۗᣞ 基因克隆的研究还未见报道ᤥ 锡纸包好ᖔ液氮冷冻后置于ͱऐԡ ቩ 冰箱保存ᖔ以备
地 黄 为 玄参科植物地黄 属植物地黄 后续使用ᤥ
ྉቴᓣ၊ቂᐹႥႥᔠᐹ ੖ᤀࣩᡙᔠႥᅳ໧ᐹɯ 的新鲜或干燥块根ᖔ具有清 ϓॹԣ ቴટዛ 的提取及 ዞᦵટዛ 的合成
热生津ܦ 凉血止 血ܦ 滋阴补血等功效 ྉ 李慧芬ᖔ 取新鲜地黄叶片ܦ根ܦ花瓣各 ԡ঎ϟ ੫ᖔ在液氮中
԰ԡϟ࿗ɯᤥ 地黄栽培历史悠久ᖔ历代名医对优质地黄 速冻ᖔ用 ఋ኏᧧झᆍ᤟ 试剂ྉఋၤᔀʢቝᆍ èᔽ༁ၤᔀʢ ୩ዹᔽᔀႿᡷᔽ஦ᔽዹɯ提取
产地的认识几经变迁ᖔ自明朝以来ᖔ即确立了怀庆 ኏શዶᤥ ኏શዶ 使用 ϟᠮ琼脂糖电泳凝胶检测纯度ᖔ检