Page 137 - 《广西植物》2020年第9期

１ ３ ５ ２ 广 西 植 物 ４０ 卷
细 胞 存 活 率 ＝ ( 实 验 组 ＯＤ 值 － 空 白 对 照 与公认的抗氧化剂维生素 Ｃ 的抗氧化能力差不多ꎮ
组ＯＤ 值 ) / ( 阴 性 对 照 组 ＯＤ 值 － 空 白 对 照 组
ＯＤ 值) ×１００％ꎮ
１.２.６ 基于超氧阴离子荧光探针( ＤＨＥ) 的细胞检
测 调整细胞密度到每孔含有 １×１０ ~ １×１０ 的细
５
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胞密度ꎬ每孔加入 ２ ｍＬ 培养基ꎬ过夜培养ꎮ 分别
加入含有适于浓度的双氧水培养基溶解沙棘果油

( 浓 度 为 ６. ２５％、 ３. １２５％、 １. ５６３％、 ０. ７８１％、
０.３９０％、０.１９５％ꎬ用 ＤＭＳＯ 助溶)ꎬ每孔 ２ ｍＬꎮ 分
别放置 ２、６、１２、２４ ｈ 后吸去废液ꎬ加入 ２ ｍＬ 含有
￣１
ＤＨＥ 荧光探针(终浓度 １０ ｍｍｏｌＬ )的培养基 ３０
ｍｉｎ 后ꎬ吸去废液ꎬ用 ＰＢＳ 清洗ꎬ使用每孔 ２００ μＬ
胰蛋白酶消化(３７ ℃ ꎬ５％ ＣＯ )ꎮ 用培养基终止消
２ 图 １ ＤＰＰＨ 自由基清除实验结果
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化ꎬ１ ５００ ｒｍｉｎ 离心 １０ ｍｉｎ 弃去上清ꎬ用冷 ＰＢＳ Ｆｉｇ. １ Ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ＤＰＰＨ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
重悬重复两遍ꎮ 使用流式细胞仪 ＦＬ２￣Ａ 通道检测ꎮ
１.２.７ 统计学方法 所有实验数据均采用均值±标 ２.２ Ｈ Ｏ 氧化损伤模型的确定
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准差(ｘ±ｓ)表示ꎬ采用 ＳＰＳＳ ２０.０ 软件进行数据处 通过酶标仪读取并计算出不同浓度 Ｈ Ｏ 的平
２ ２
理ꎬ沙棘果油对 Ｈ Ｏ 氧化损伤细胞的存活率采用
２ ２ 均 ＯＤ 值ꎬ通过改良寇式法 ｌｇＩＣ ＝ Ｘ －Ｉ[ Ｐ －(３ －
ｍ
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比较单因素方差分析ꎬＤＨＥ 检测的数据采用双因
Ｐ －Ｐ ) / ４]计算ꎮ 式中:Ｘ 为 ｌｇ 最大剂量ꎻＩ 为 ｌｇ
ｍ ｎ ｍ
素方差分析( 时间×浓度)ꎬ 如果有差异进一步通 (最大剂量 / 相临剂量)ꎻ Ｐ 为阳性反应率之和ꎻＰ ｍ
过 Ｐｏｓｔ￣ｈｏｃ Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ’ｓ 进行分析ꎮ 为最大阳性反应率ꎻＰ 为最小阳性反应率ꎮ 得到
ｎ
它的 ＩＣ ꎬ计算出 Ｈ Ｏ 的 ＩＣ 为 ０.８５９％ꎬ结果如表
５０ ２ ２ ５０
２ 结果与分析 １ 所示ꎬ根据实验我们选用 ０.６２５％的 Ｈ Ｏ 构建氧
２ ２
化损伤模型ꎮ
２.１ ＤＰＰＨ 自由基清除实验结果
由图 １ 可知ꎬ沙棘果油浓度在 １.６％ ~ ３％时ꎬ其 表 １ 不同浓度过氧化氢氧化损伤
清除自由基的能力比 １.６％之前的清除自由基能力 ＲＡＷ２６４.７ 细胞的 ＯＤ 平均值
Ｔａｂｌｅ １ ＯＤ ａｖｅｒａｇｅ ｏｆ ＲＡＷ２６４.７ ｃｅｌｌｓ ｄａｍａｇｅｄ
稍减弱ꎻ当沙棘果油浓度超过 ３％时ꎬ其清除自由基
ｂｙ Ｈ Ｏ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
２
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的能力不再改变ꎮ 随着维生素 Ｃ 浓度的上升ꎬ其抗
过氧化氢浓度
氧化能力一直上升ꎬ当维生素 Ｃ 浓度为 ０.２％ ~ ３％ Ｈ ２ Ｏ ２ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ＯＤ 平均值
ＯＤ ａｖｅｒａｇｅ
(％)
时ꎬ维生素 Ｃ 浓度与清除率成正比ꎻ当浓度超过 ３％
空白组 Ｂｌａｎｋ ｇｒｏｕｐ ０.０６０ ０
时ꎬ它的抗氧化能力会稍减弱ꎮ
０.１５６ ０.２６２ ２
综合上述结果可以得出ꎬ沙棘果油与维生素 Ｃ
０.３１３ ０.２３２ ４
同样具有抗氧化性ꎬ当两者浓度位于 ４.８％之前时ꎬ
０.６２５ ０.２２７ ４
沙棘果油对自由基的清除能力比维生素 Ｃ 要强ꎮ １.２５ ０.１４３ ４
但是ꎬ在沙棘果油浓度超过 ３％时ꎬ其清除自由基的 ２.５ ０.０７５ ８
能力不再改变ꎬ而维生素 Ｃ 清除自由基的能力随其 ５.００ ０.０８５ ４
浓度的改变依然在增加ꎬ可见在超过 ３％时ꎬ维生素
Ｃ 对自由基依然有一直增加的清除能力ꎬ比沙棘油 ２.３ 沙棘果油对 Ｈ Ｏ 氧化损伤的作用
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的清除能力强ꎮ 这说明低浓度的沙棘果油在体外 图 ２ 结果显示ꎬ与对照组相比ꎬＨ Ｏ 氧化损
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