Page 190 - 《广西植物》2022年第12期

２ １ ８ ０ 广 西 植 物 ４２ 卷
对其完全展开的第 ２ ~ ４ 片新叶( 处于同一发育阶 时先暗处理 １ ｈꎮ 使用 Ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ 软件拟合求
段)中大小相当的 １ 片叶子测定光合参数、叶片结 出 ＬＣＰ、ＬＳＰ、Ｐ 、暗呼吸速率( Ｒ )、表观量子效
ｍａｘ ｄ
构以及叶绿素含量ꎬ每种叶型至少 ４ 个重复ꎮ 率(ＡＱＥ)(宋杰等ꎬ２０１９)ꎮ
１.２ 方法 １.３ 数据统计分析
１.２.１ 叶片显微结构观察 将新鲜叶表皮撕下制 使用 Ｅｘｃｅｌ ２０１６ 和 ＳＰＳＳ ２２.０ 软件进行数据
成活体临时装片ꎬ统计单位视野内的气孔数目ꎬ计 统计和分 析ꎬ采 用 独 立 样 本 ｔ 检 验 差 异 显 著 性ꎬ
算单位面积气孔密度ꎬ显微镜( Ｌｅｉｃａ ＤＭ６ Ｂ) 测微 Ｄｕｎｃａｎ 法进行方差分析和多重比较ꎮ 利用 Ｅｘｃｅｌ
尺测量气孔器大小即纵轴长度和横轴长度ꎮ 选择 ２０１６ 和 Ｏｒｉｇｉｎ ２０１８ 软件作图ꎮ
完全展开的第 ２ 至第 ４ 片新叶片ꎬＦＡＡ 固定液固
２ 结果与分析
定 ４８ ｈꎬ经梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋ꎬ
切片机( Ｌｅｉｃａ ＲＭ ２２５５) 切片ꎬ厚度 ８ μｍꎬ番红固
绿染色ꎬ中性树胶封片(吕晋慧等ꎬ２０１２)ꎮ 显微镜 ２.１ 两种叶型维西堇菜叶片形态结构
下观察拍照ꎬ测微尺测量叶片厚度( ＬＴ)、栅栏组织 ２.１.１ 叶片气孔大小和密度比较 两种叶型维西

厚度(ＰＴ)、海绵组织厚度( ＳＴ)、上表皮厚度( Ｅ)、 堇菜叶片气孔均为不等型气孔ꎬ上表皮气孔排列
下表皮厚度(Ｈ)ꎮ 疏松ꎬ气孔主要分布于下表皮ꎬ下表皮气孔器显著
１.２.２ 叶绿素含量测定 叶绿素含量采用丙酮乙 小于上表皮ꎮ 有斑叶片上下表皮气孔密度分别显
醇混合液法(张聪颖等ꎬ２０１１)ꎬ称取 ０.０５ ｇ 完全展 著低于无斑叶片ꎬ并且上表皮气孔长宽极显著大
开的第 ２ 至第 ４ 片新叶ꎬ置于 ５ ｍＬ 乙醇－丙酮混 于无斑叶片(表 １)ꎮ
合液中浸提至叶色完全变白色ꎬ紫外可见分光光 ２.１.２ 叶片显微结构比较 有斑维西堇菜叶片斑纹
度计( 岛津 ＵＶ￣１８００ 型) ６６３、６４５、４７０ ｎｍ 波长下 主要生长在叶脉部位ꎬ图 ２: ｂꎬ ｄ 为不同叶型维西
测定吸光值ꎬ以 Ｌｉｃｈｔｅｎｔｈａｌｅｒ 法计算叶绿素含量ꎬ 堇菜叶片横切面ꎬ可以看出维西堇菜叶为异面叶类
每种叶型重复 ４ 次(Ｌｉｃｈｔｅｎｔｈａｌｅｒꎬ １９８７)ꎮ 型ꎬ近轴面分化为栅栏组织ꎬ叶绿体集中分布于栅
１.２.３ 叶片可见光吸收能力的测定 取 ０.２ ｇ 完全 栏组织细胞中ꎻ远轴面为海绵组织ꎬ细胞分散分布ꎬ
展开的第 ２ 至第 ４ 片新叶剪碎ꎬ置于 １０ ｍＬ 的 １％ 其中叶绿体很少或者没有分布ꎻ上下表皮均为单层
盐酸－甲醇溶液中浸提 ５ ｈꎬ紫外分光光度计波长 细胞且细胞大小不均匀ꎮ 两种叶片的叶肉细胞分
３００ ~ １ １００ ｎｍ 范围内扫描得出吸收光谱( 齐建 化具有明显差异ꎬ有斑叶片的 ＬＴ、Ｈ 均显著低于无
勋ꎬ２００２)ꎮ 斑叶片(Ｐ<０.０５)ꎬＰＴ、ＰＴ/ ＳＴ 极显著低于无斑叶片
１.２.４ 光响应曲线以及叶绿素荧光测量 选择一 (Ｐ<０.０１)ꎬ而两种叶型维西堇菜叶片的 ＳＴ、Ｅ 无显
个晴天在 ８:３０—１１:３０ 之间ꎬ使用 ＧＦＳ ３０００ 便携 著差异(表 ２)ꎮ
式光合测量仪的标准光合测定系统和 ３０５６ＦＬ 荧 ２.２ 两种叶型维西堇菜叶片的叶绿素含量及可见
￣１ 光吸收能力比较
光测定系统进行测量ꎬ设定流速为 ７５０ μｍｏｌｓ 、
￣１
ＣＯ 浓 度 为 ４００ μｍｏｌ ＣＯ ｍｏｌ ( Ｍａｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ 两种叶型维西堇菜叶绿素含量如表 ３ 所示ꎬ无
２ ２
２００７ꎻ沈宗根等ꎬ２０１０)ꎬ通过光合测定系统设定光 斑叶片 叶 绿 素 ａ ( ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ ａꎬ Ｃｈｌ ａ)、 叶 绿 素 ｂ
合有效辐射( ＰＡＲ) 为 ０、２０、５０、８０、１００、２００、４００、 (ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ ｂꎬＣｈｌ ｂ) 、胡萝卜素( ｃａｒｏｔｅｎｅꎬＣａｒ)、
６００、８００、１ ０００、１ ２００、１ ４００、１ ６００、１ ８００、２ ０００ 叶绿素(ａ＋ｂ)[Ｃｈｌ(ａ＋ｂ)] 含量显著高于有斑叶片
μｍｏｌｍ ｓ 条件下测定净光合速率( Ｐ )、气孔 (Ｐ< ０.０５)ꎬ分别高出 １５.３２％、１８.９８％、２２. ４３％、
￣１
￣ ２
ｎ
导度(Ｇ )、蒸腾速率( Ｔ ) 等光合指标以及初始荧 １３.８５％ꎬ而 Ｃｈｌ ａ / Ｃｈｌ ｂ 无明显差异ꎮ 两种叶型维
ｓ
ｒ
光(Ｆ )、最 大 荧 光 产 量 ( Ｆ )、 光 化 学 猝 灭 系 数 西堇菜光谱吸收峰均在 ３００ ~ ４８０、６３０ ~ ６７０ ｎｍ 之
ｍ
ｏ
(ｑ )、非光化学猝灭系数(ｑ )、ＰＳⅡ最大光化学量 间ꎬ具有基本相同的光谱吸收曲线(图 ３)ꎮ
Ｐ Ｎ
子产 量 ( Ｆ / Ｆ )、 实 际 光 化 学 反 应 量 子 效 率 ２.３ 两种叶型维西堇菜的光合特征比较
ｖ ｍ
(Ｙｉｅｌｄ)、表观光合电子传递速率( ＥＴＲ) 等叶绿素 ２.３.１ 光响应曲线 两种叶型维西堇菜 Ｐ 、Ｔ 、Ｇ 光
ｎ
ｒ
ｓ
荧光指标ꎮ 每个光强下平衡 ３ ｍｉｎꎬ测量 ＰＡＲ 为 ０ 响应曲线如图 ４ 所示ꎬ Ｐ 、Ｔ 、Ｇ 起初随 ＰＡＲ 增强
ｎ ｒ ｓ