Page 173 - 《广西植物》2023年第11期
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１１ 期 谭小青等: 牛尾菜 ＨＰＬＣ 指纹图谱及抗氧化活性谱效关系研究 ２ １ ３ ３
表 １ 牛尾菜样品来源信息 相对保留时间、相对峰面积的 ＲＳＤ 均小于 １.３１％ꎬ
Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｍｉｌａｘ ｒｉｐａｒｉａ 表明样品溶液在 ２４ ｈ 内稳定性良好ꎮ
样品 产地 样品 产地 １.２.４ 指纹图谱测定 将制备好的样品溶液和对
Ｓａｍｐｌｅ Ｐｌａｃｅ ｏｆ ｏｒｉｇｉｎ Ｓａｍｐｌｅ Ｐｌａｃｅ ｏｆ ｏｒｉｇｉｎ 照品混合溶液ꎬ按“１.２.２” ＨＰＬＣ 色谱条件测定ꎬ记
辽宁锦州 江西赣州 录结果ꎬ将色谱数据导入“ 中药色谱指纹图谱相似
Ｓ１ Ｓ８
Ｊｉｎｚｈｏｕꎬ Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｇａｎｚｈｏｕꎬ Ｊｉａｎｇｘｉ
度评价系统(２０１２ 版)”ꎬ采用平均数法ꎬ设置时间
广西百色 广东韶关 窗宽为 ０.１ꎬ经过多点矫正后ꎬ进行全峰匹配ꎬ生成
Ｓ２ Ｓ９
Ｂａｉｓｅꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ Ｓｈａｏｇｕａｎꎬ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
对照图谱ꎬ确定 １３ 批牛尾菜样品指纹图谱的主要
福建三明 广西南宁
Ｓ３ Ｓ１０
Ｓａｎｍｉｎｇꎬ Ｆｕｊｉａｎ Ｎａｎｎｉｎｇꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ 共有峰ꎬ并进行相似度评价ꎮ
１.２.５ 牛尾菜指纹图谱聚类分析 将 １３ 批牛尾菜
广东清远 广西金秀
Ｓ４ Ｓ１１
Ｑｉｎｇｙｕａｎꎬ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｊｉｎｘｉｕꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ 样品共有峰的峰面积导入 ＳＰＳＳ ２２.０ 软件ꎬ使用
贵州贵阳 广西宜州 Ｗａｒｄ 方法和平均欧方距离进行聚类ꎮ
Ｓ５ Ｓ１２
Ｇｕｉｙａｎｇꎬ Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｙｉｚｈｏｕꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ
１.２.６ 抗氧化作用考察 精密称取牛尾菜粉末 ０.２
广西桂林 广西玉林 ｇ 于锥形瓶内ꎬ加入 ８０％甲醇溶液 １００ ｍＬꎬ超声 ３０
Ｓ６ Ｓ１３
Ｇｕｉｌｉｎꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ Ｙｕｌｉｎꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ
ｍｉｎꎬ放冷ꎬ补足减少重量ꎬ经 ０.２２ ｕｍ 有机滤膜滤
广西贺州
Ｓ７ 过ꎬ蒸干ꎬ用 ５０％乙醇溶解ꎬ将其配成质量浓度为
Ｈｅｚｈｏｕꎬ Ｇｕａｎｇｘｉ
￣１
２.０、１.０、０. ５、０. ２５、０. １２５ ｍｇｍＬ 的样品溶液ꎮ
称取 ＡＢＴＳ ３８.４１ ｍｇꎬ加水溶解后ꎬ转移并定容至
滤膜滤过ꎬ即得ꎮ 称取适量齐墩果酸、熊果酸ꎬ加 １０ ｍＬ 量瓶中ꎬ将其配制成浓度为 ７ ｍｍｏｌＬ 的
￣１
８０％甲醇制成单一对照品储备液ꎬ分别精密吸取齐 溶液ꎬ加入浓度为 ２.４５ ｍｍｏｌＬ 的过硫酸钾溶
￣１
墩果酸储备液 ０~５ ｍＬ 与熊果酸储备液 ０~５ ｍＬꎬ加 液ꎬ混合均匀后ꎬ放置暗处 １２ ~ ２４ ｈꎬ即得 ＡＢＴＳ＋
入 ８０％甲醇稀释ꎬ将其定容至 ５ ｍＬ 容量瓶ꎬ使用 自由基溶 液ꎮ 在 ９６ 孔 板 中ꎬ分 别 加 入 ２. ０、１. ０、
０.２２ μｍ 有机滤膜滤过ꎬ即为混合对照品溶液( 齐 ０.５、０.２５、０.１２５ ｍｇｍＬ 的样品溶液 ２０ μＬꎬ分别
￣１
￣１ ￣１
墩果酸 ０.０３８ ｇＬ ꎬ熊果酸 ０. ０４７ ｇＬ )ꎮ 加入 ＡＢＴＳ＋工作液 １８０ μＬꎬ以无水乙醇为空白对
® Ｃ 色谱
１.２.２ ＨＰＬＣ 色谱条件 ＷａｔｅｒｓＣＯＲＴＥＣＳ 照ꎬ在室温下放置约 ６ ｍｉｎꎬ在 ７３４ ｎｍ 波长下测定
１８
柱(２.１ ｍｍ×１００ ｍｍꎬ２.７ μｍ) ꎬ流速为 ０.５ ｍＬ 吸光度ꎬ重复 ３ 次(谭小青等ꎬ２０２１ｂ)ꎮ ＡＢＴＳ 清除
￣１
ｍｉｎ ꎬ柱温 ２０ ℃ ꎬ流动相选择 ０.５％磷酸水( Ａ) － 率按公式计算 ＝ [１－( Ａ －Ａ ) / Ａ ] ×１００％ꎬＡ 空白
ｊ
ｉ
０
０
乙腈(Ｂ)水溶液ꎬ梯度洗脱 ( ０ ~ ５ ｍｉｎꎬ９５％ Ａꎻ５ ~ 溶液ꎬ即无水乙醇加 ＡＢＴＳ 的 Ａ 值ꎻＡ 为样品溶液
ｉ
４０ ｍｉｎꎬ９５％ ~ ５％ Ａꎻ４０ ~ ４５ ｍｉｎꎬ５％ ~ ５％Ａ) ꎬ检 和 ＡＢＴＳ 反应后的 Ａ 值ꎻＡ 为空白对照的 Ａ 值ꎮ 应
ｊ
测波长 ２０５ ｎｍꎬ进样量 ２ μＬꎮ 用清除 ＡＢＴＳ 自由基的抗氧化测定方法对 １３ 个不
１.２.３ 方法学考察 精密度试验:取“１.２.１”项下的 同批次来源的牛尾菜样品进行了测定ꎬ并计算了
供试品适量ꎬ按“ １.２.２” 的色谱条件ꎬ进样测定 ６ 各样品的 ＩＣ 值ꎮ
５０
次ꎬ计算相对保留时间、相对峰面积的 ＲＳＤ 值ꎬ实
验表明ꎬ各色谱峰的相对保留时间、相对峰面积的 ２ 结果与分析
ＲＳＤ 均小于 ２.３％ꎬ表明仪器精密度良好ꎮ 重复性
试验:取牛尾菜 Ｓ４ 的样品适量ꎬ共 ６ 份ꎬ按“１.２.１” ２.１ 指纹图谱的建立
制备样品溶液进样测定ꎬ计算相对保留时间、相对 利用 ＨＰＬＣ 构建了 １３ 个不同产地来源的牛尾
峰面积的 ＲＳＤ 值ꎬ实验表明ꎬ各色谱峰的相对保留 菜药材的 １４ 个主要共有峰的指纹图谱ꎬ牛尾菜样
时间、相对峰面积的 ＲＳＤ 均小于 ２.７３％ꎬ表明方法 品 ＨＰＬＣ 叠加图谱见图 １ꎬ样品对照图谱见图 ２ꎬ另
重复性良好ꎮ 稳定性试验:取牛尾菜药材的供试 外ꎬ通过与对照品比对ꎬ指认了其中 ２ 个色谱峰ꎬ
品溶液( Ｓ４)ꎬ分别放置 ０、２、４、８、１２、２４ ｈ 后ꎬ按 其中 ９ 号为齐墩果酸ꎬ１０ 号为熊果酸ꎬ混合对照品
“１.２.２” 的色谱条件进样分析ꎬ计算相对保留时 的 ＨＰＬＣ 图见图 ３ꎮ 牛尾菜 ＨＰＬＣ 指纹图谱 １４ 个
间、相对峰面积的 ＲＳＤ 值ꎬ实验表明ꎬ各色谱峰的 共有峰的峰面积结果见表 ２ꎮ 由表 ２ 可知ꎬ １ 号峰
