Page 185 - 《广西植物》2023年第5期
P. 185
９ ５ ２ 广 西 植 物 ４３ 卷
处理导致保卫细胞发生凋亡ꎮ ＴＵＮＥＬ 法检测结果
发现ꎬ挥发物处理组叶保卫细胞的绿色荧光强度
大于 ｃａｓｐａｓｅ 抑制剂＋挥发物共处理组( 图 ６:Ａ)ꎬ
表明大叶桉挥发物诱导蚕豆叶保卫细胞发生了
ｃａｓｐａｓｅ 依赖性细胞凋亡ꎮ
应用 ＲＯＳ、ＮＯ 和 Ｃａ 荧光定位试验和三者抑
２＋
制剂＋挥发物共处理试验ꎬ验证了大叶桉挥发物作
用下蚕豆叶保卫细胞的 ＲＯＳ、ＮＯ 和 Ｃａ 水平的变
２＋
化ꎮ 由图 ７ 可知ꎬ对照组保卫细胞具有较弱的绿
色荧光ꎬ即胞内 ＲＯＳ、ＮＯ 和 Ｃａ 水平均较低ꎻ处理
２＋
组保卫细胞内 ３ 种荧光信号均明显高于对照组ꎬ
说明大叶桉挥发物诱导保卫细胞内 ＲＯＳ、ＮＯ 和
Ｃａ 水平升高ꎮ ＮａＮ ＋处理液、ＡｓＡ＋处理液 ２ 个共
２＋
３
处理组中ꎬＲＯＳ、Ｃａ 和 ＮＯ 水平低于挥发物处理
２＋
２＋
组ꎬ而 ＬａＣｌ ＋处理液共处理组保卫细胞内的 Ｃａ
３
水平低于挥发物处理组( 图 ８)ꎬ说明在大叶桉挥
发物诱导的细胞死亡过程中ꎬＲＯＳ 和 ＮＯ 能调节胞
２＋
内 Ｃａ 水平ꎮ
２＋
由图 ９ 可知ꎬ与挥发物处理组相比ꎬ用 Ｃａ 通
道阻断剂( ＬａＣｌ )、活性氧清除剂抗坏血酸( ＡｓＡ)
３
和硝酸还原酶抑制剂(ＮａＮ )分别与处理母液共同
３
作用时ꎬ保卫细胞存活率显著升高( Ｐ<０.０５)ꎮ 这
进一步证明大叶桉挥发油、α￣蒎烯和桉油精诱导
２＋
的细胞死亡与细胞内 ＲＯＳ、ＮＯ 和 Ｃａ 有关ꎮ
２.３ 大叶桉挥发物对蚕豆气孔运动的影响
大叶桉挥发物导致蚕豆叶气孔开度呈浓度依
赖性逐渐下降( 图 １０)ꎬ在最大浓度处理下ꎬ挥发
油、α￣蒎烯和桉油精 ３ 个处理组的气孔开度分别较
图 ３ 大叶桉叶挥发油、α￣蒎烯、桉油精作用下 对照 组 下 降 了 ８６. ６５％、 ７８. ３１％ 和 ７５. ３８％ꎻ 当
蚕豆根尖细胞微核率的变化 ＮＡＤＰＨ 氧化酶抑制剂二联苯碘( ＤＰＩ)、活性氧清
Ｆｉｇ. ３ Ｃｈａｎｇｅ ｏｆ ｒｏｏｔ ｔｉｐ ｃｅｌｌ ｍｉｃｒｏｎｕｃｌｅｕｓ ｒａｔｅｓ ｏｆ
除剂抗坏血酸( ＡｓＡ) 和微丝聚合抑制剂细胞松弛
Ｖｉｃｉａ ｆａｂａ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｔｈｅ Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ ｒｏｂｕｓｔａ ｖｏｌａｔｉｌｅ
素 Ｂ(ＣＢ)分别与大叶桉挥发物共处理时ꎬ保卫细
ｏｉｌꎬ α￣ｐｉｎｅｎｅ ａｎｄ ｅｕｃａｌｙｐｔｏｌ
胞气孔关闭现象显著降低(Ｐ<０.０５)( 图 １１)ꎬ表明
大叶桉挥发物诱导的 ＲＯＳ 水平和 ＮＡＤＰＨ 氧化酶
最大处理浓度下ꎬ挥发油、α￣蒎烯、桉油精 ３ 个处理 活性的升高以及微丝聚合是导致气孔关闭的原
组的保卫细胞活性为对照组的 ７. ０１％、２９. ４８％、 因ꎮ ｑＲＴ￣ＰＣＲ 结果(图 １２) 显示ꎬ在大叶桉挥发物
５９.５６％ꎬ细 胞 核 形 态 异 常 率 分 别 为 ９６. ９６％、 作用下ꎬ蚕豆叶片内 ＮＡＤＰＨ 氧化酶基因 Ｒｂｏｈ 表
６８.７８％、２４.７４％ꎮ 达显著上调ꎮ
半胱氨酸蛋白酶( ｃａｓｐａｓｅ) 是一组与细胞凋亡 ２.４ 大叶桉挥发物对根边缘细胞活性的影响
密切相关的蛋白水解酶ꎬ当用泛 ｃａｓｐａｓｅ 抑制剂 Ｚ￣ 由图 １３ 可知ꎬ蚕豆根边缘细胞活性随大叶桉
ＶＡＤ￣ＦＭＫ 与大叶桉挥发物共处理后ꎬ各处理组保 挥发物处理浓度升高而降低ꎬ死亡率显著增加( Ｐ<
卫细胞活性均较挥发物处理组升高且与 Ｚ￣ＶＡＤ￣ ０.０５)ꎮ 与阴性对照组(０ μＬ) 相比ꎬ溶剂对照组
ＦＭＫ 浓度呈正相关( 图 ６:Ｂ)ꎬ表明大叶桉挥发物 (ＤＭＳＯ)的根边缘细胞活性差异不显著(Ｐ>０.０５)ꎬ
