Page 17 - 《广西植物》2023年第7期
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７ 期 姚裕群等: 野生越南槐组织特异性内生真菌组及体外抗病原菌功能 １ １ ８ ５
定 真 菌 ( Ｏ′ Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００５ꎻ Ｇｏｎｚáｌｅｚ ＆ Ｔｅｌｌｏꎬ 的分类单元及其分离株系计算相对频率( ｒｅｌａｔｉｖｅ
２０１１)ꎬ即相似性<９５％为未鉴定ꎬ９５％≤相似性< ｆｒｅｑｕｅｎｃｙꎬＲＦ)ꎬα￣多样性指数( 香农－维纳指数和
９７％为鉴定到属水平ꎬ相似性≥９７％为鉴定到种水 辛普森多样性指数)及 β￣多样性指数(索伦森指数
平ꎬ在属内比较中ꎬ明显高于其他种时则被鉴定为 和雅卡尔指数) ( Ｙａｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７)ꎮ 使用生物统
同种ꎮ 计软件 ＳＰＳＳ ２８.０ꎬ以及运用方差和多重比较以分
１.２.３ 根、茎和种子各内生真菌组的系统进化 基 析野生与培越南槐内生真菌组多样性差异ꎮ
于真菌分类单元的 ＩＴＳ 序列ꎬ通过 ＭＥＧＡ ６. ０ 软
件ꎬ采用最大似然法(ｍａｘｉｍｕｎ ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄ)构建系统 ２ 结果与分析
发育树来分析野生越南槐根、茎和种子各内生真
菌组的属种系统进化(Ｇｏｎｚáｌｅｚ ＆ Ｔｅｌｌｏꎬ ２０１１)ꎮ ２.１ 根、茎和种子内生真菌的分离和鉴定
１.２.４ 根、茎和种子各内生真菌组的多样性和相似 从野生越南槐根段共计 ６０ 个组织块中分离获
性 基于野生越南槐根、茎和种子各内生真菌组 得 １３１ 株内生真菌(图 １)ꎻ从茎段 ６０ 个组织块共分
的分类单元及其分离株系分别计算各真菌组的 α￣ 离获得 １０８ 株内生真菌(图 ２)ꎻ从 ４０ 粒种子共分离
多样 性 指 数 [ 香 农 － 维 纳 指 数 ( Ｓｈａｎｎｏｎ￣Ｗｉｅｎｅｒ 获得 ６４ 株内生真菌(图 ３)ꎮ 首先将分离自根、茎和
ｉｎｄｅｘ)和 辛 普 森 多 样 性 指 数 ( Ｓｉｍｐｓｏｎ’ ｓ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ 种子的菌株分开ꎬ然后将相同组织来源的菌株分别
ｉｎｄｅｘ)]及 β￣多样性指数[索伦森指数( Ｓｏｒｅｎｓｅｎ’ ｓ 培养ꎬ将相同培养时间内菌落孢子形态一致的菌株
ｉｎｄｅｘ)和雅卡尔指数( Ｊａｃｃａｒｄ’ ｓ ｉｎｄｅｘ)]ꎮ 通过 α￣ 划分为同一形态型ꎬ最后采用 ＩＴＳ 序列分析鉴定每
多样性指数来分析野生越南槐根、茎和种子各内 个形态型的代表菌株ꎮ 结合形态学和 ＩＴＳ 序列分
生真菌组的多样性ꎬ通过 β￣多样性指数来分析野 析ꎬ从根内生真菌组的 ４２ 个形态型代表菌株中共鉴
生越南槐根、茎和种子各内生真菌组间的物种相 定 ２３ 个分类单元ꎬ从茎内生真菌组的 ３８ 个形态型
似性(Ｙａｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７)ꎮ 使用生物统计软件 ＳＰＳＳ 代表菌株中共鉴定 ２３ 个分类单元ꎬ从种子内生真菌
２８.０ꎬ以及运用方差和多重比较以分析野生越南槐 组的 ２０ 个形态型代表菌株中共鉴定 １１ 个分类单元
根、茎和种子各内生真菌组的多样性差异ꎮ 且均来自于种皮ꎮ 每个分类单元为一个特定的真
１.２.５ 根、茎和种子各内生真菌组的体外抗病原菌 菌物种ꎬ依据真菌物种鉴定的常用相关阈值(见方
功能 挑选内生真菌组各分类单元的代表菌株用 法部分)ꎮ 根内生真菌组的 ２３ 个分类单元(物种)
于体外抗病原菌功能筛选ꎮ 采用琼脂块法( 姚裕 中ꎬ１１ 个分类单元鉴定到属水平ꎬ１０ 个分类单元鉴
群等ꎬ２０１７)筛选供试内生真菌对病原细菌的拮抗 定到种水平ꎬ２ 个分类单元未鉴定ꎻ茎内生真菌组的
活性ꎬ即将新鲜病原细菌调成 ０.５ 麦氏浊度的菌悬 ２３ 个分类单元(物种)中ꎬ９ 个分类单元鉴定到属水
液并将其在 １５ ｍｉｎ 内用无菌棉签均匀涂布于 ＬＡ 平ꎬ１１ 个分类单元鉴定到种水平ꎬ ３ 个分类单元未
培养基平板上ꎬ将 ６ ｍｍ 直径的内生真菌菌块接入 鉴定ꎻ种子内生真菌组的 １１ 个分类单元(物种)中ꎬ
风干后的 ＬＡ 培养基筛选平板ꎬ每皿接 ５ 个菌块ꎬ １ 个分类单元鉴定到属水平ꎬ９ 个分类单元鉴定到种
(３５±２) ℃ 培养 １６ ~ １８ ｈ 后观察并测量抑菌圈直 水平ꎬ １ 个 分 类 单 元 未 鉴 定ꎮ 相 关 数 据 已 上 传
径ꎻ采用平板对峙法筛选(Ｙａｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７)供试内 ＧｅｎＢａｎｋ 数 据 库ꎬ 登 录 号 为 ＫＰ２０４２６４￣ＫＰ２０４４４２、
生真菌对病原真菌的拮抗活性ꎬ即将内生真菌和 ＫＴ９３５１７４ 及 ＫＲ６１１９２６ꎮ
病原真菌均制成 ６ ｍｍ 直径菌块ꎬ１ 块内生真菌接 ２.２ 根、茎和种子各内生真菌组的系统进化
种于 ＰＤＡ 培养基中央且周围等距接种 ３ 块病原真 基于野生越南槐根内生真菌组 ２３ 个分类单
菌为处理ꎬ以不接种内生真菌为对照ꎬ２８ ℃ 下培 元ꎬ茎内生真菌组 ２３ 个分类单元以及种子内生真
养ꎬ待对照长至平板中央测量各病原菌块中心至 菌组 １１ 个分类单元的 ＩＴＳ 序列ꎬ采用最大似然法
分别构建了野生越南槐根、茎、种子内生真菌组的
平板中央之间病原菌的生长量ꎬ并计算抑菌率ꎮ
对照生长量－处理生长量 系统发育树(图 １ꎬ图 ２ꎬ图 ３)ꎮ 在根内生真菌组的
抑菌率(％)＝ ×１００ꎮ
对照生长量 已鉴定分类单元中ꎬ 有 １２ 个属 １０ 个种ꎬ其中有 ４
１.３ 统计分析 个优势属ꎬ镰刀菌属( Ｆｕｓａｒｉｕｍ) 为最优势属ꎬ其次
基于野生越南槐根、茎和种子各内生真菌组 为 茎 点 霉 属 ( Ｐｈｏｍａ) 、 青 霉 属 ( Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ) 、
