Page 36 - 《广西植物》2023年第7期
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１ ２ ０ ４ 广 西 植 物 ４３ 卷
物 ＩＴＳ１ ( ５′￣ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧ￣３′) 和 ＩＴＳ４ 南省德宏芒市、大理喜洲、临沧双江 ３ 个地区马铃
(５′￣ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ￣３′) 对 真 菌 的 ＩＴＳ 薯组织样品中共分离出 ９８ 株内生真菌(表 １)ꎮ 其
序列进行扩增ꎮ ＰＣＲ 反应体系为 ３０ μＬꎬ包括模板 中ꎬ从来 自 德 宏 芒 市 的 马 铃 薯 样 品 中 分 离 出 ４０
ＤＮＡ ２ μＬ、引物 １×２ μＬ、２×Ｔａｑ ＰＣＲ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ １５ 株、从来 自 大 理 喜 洲 的 马 铃 薯 样 品 中 分 离 出 ２７
μＬ、ｄｄＨ Ｏ １１ μＬꎮ ＰＣＲ 反应扩增程序:９９ ℃ 预变 株、从来 自 临 沧 双 江 的 马 铃 薯 样 品 中 分 离 出 ３１
２
性 ５ ｍｉｎꎬ９４ ℃变性 ３０ ｓꎬ５２ ℃退火３０ ｓꎬ７２ ℃延伸 １ 株ꎬ 分 别 占 总 分 离 株 数 的 ４０. ８２％、 ２７. ５５％、
ｍｉｎꎬ共 ３５ 个循环ꎬ７２ ℃延伸 ７ ｍｉｎꎮ ３１.６３％ꎮ
将琼脂糖电泳检测合格后的目的产物送至上
海生工 生 物 工 程 有 限 公 司 进 行 测 序ꎬ 登 录 ＮＣＢＩ 表 １ 马铃薯内生真菌的分离情况
(ｈｔｔｐ:/ / ｗｗｗ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ / )ꎬ将 ＩＴＳ 测序结果上 Ｔａｂｌｅ １ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｆｒｏｍ
Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ
传至 ＮＣＢＩ 核酸序列数据库与已知序列进行比对ꎬ
选择相似性高的序列进行分析ꎮ 利用 ＭＥＧＡ ７.０ 软 分离株数 总菌株数 占比
来源 部位 Ｔｏｔａｌ
Ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ
件ꎬ采用邻接法(ｎｅｉｇｈｂｏｒ ｊｏｉｎｉｎｇ)构建系统进化树ꎮ Ｓｏｕｒｃｅ Ｔｉｓｓｕｅ ｎｕｍｂｅｒ
ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｓｔｒａｉｎｓ (％)
１.４ 内生真菌数据分析
德宏芒市 根 １７ ４０ ４０.８２
１.４.１ 定殖率(ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅꎬ ＣＲ) 定殖率 ＝ 在 Ｄｅｈｏｎｇ Ｍａｎｇｓｈｉ Ｒｏｏｔ
培养基中分离出的内生真菌组织块数 / 所有组织 茎 ８
块数×１００％ ( Ｋáｔｉａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６)ꎮ 内生真菌的定 Ｓｔｅｍ
殖率反映了宿主植物不同组织部位中受内生真菌 块茎 １５
Ｔｕｂｅｒ
侵染的程度ꎮ
大理喜洲 根 １４ ２７ ２７.５５
１.４.２ 分离率( ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｒａｔｅꎬ ＩＲ) 分离率 ＝ 培养 Ｄａｌｉ Ｘｉｚｈｏｕ Ｒｏｏｔ
基中分离的内生真菌总株数 / 总分离组织块数 × 茎 ２
１００％(康茜ꎬ２０１７)ꎮ 内生真菌的分离率反映了宿 Ｓｔｅｍ
块茎 １１
主植物不同组织部位中内生真菌存在的丰度ꎮ
Ｔｕｂｅｒ
１.４.３ 分离频率( ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙꎬ ＩＦ) 指某一
临沧双江 根 １３ ３１ ３１.６３
指定类型真菌的菌株数量占分离培养的内生真菌 Ｌｉｎｃａｎｇ Ｓｈｕａｎｇｊｉａｎｇ Ｒｏｏｔ
菌株数量的百分率ꎬ用于比较和判断优势菌群( 柴 茎 ４
Ｓｔｅｍ
新义等ꎬ２０１６)ꎮ
块茎 １４
１.４.４ 香农多样性指数(Ｓｈａｎｎｏｎ￣Ｗｉｅｎｅｒ ｉｎｄｅｘꎬＨ′)
Ｔｕｂｅｒ
反映了分离的内生真菌中的物种丰富度ꎮ 香农
多样性指数可用以下公式计算ꎬ即
ｋ ２.１.２ 内生真菌定殖率和分离率 分离得到的 ９８
Ｈ′ ＝ －∑Ｐ ×ｌｎＰ ꎮ
ｉ
ｉ
ｉ ＝ １ 株内生真菌中ꎬ有 ４４ 株来自根部、１４ 株来自茎部、
式中: ｋ 指某种植物或组织中内生真菌种类 ４０ 株来自块茎( 表 ２)ꎮ 由表 ２ 可知ꎬ根、茎、块茎
的总数ꎻＰ 表示植物组织中分离出来的某一种内 中内 生 真 菌 的 定 殖 率 分 别 为 ６８. ３３％、６５. ００％、
ｉ
生真菌的株数占分离得到的总菌株数的百分数 ７６.６７％ꎬ表明块茎中内生真菌定殖率最高ꎮ 马铃
(Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０)ꎮ 薯根部、茎部和块茎中内生真菌的分离率分别为
７３.３３％、２３.３３％、６６.６７％ꎬ表明根部分离率最高ꎮ
２ 结果与分析 马铃薯组织中内生真菌总定殖率和总分离率分别
为 ７０.００％和 ５４.４４％ꎮ
２.１ 马铃薯内生真菌的分离 ２.２ 马铃薯内生真菌的鉴定
２.１.１ 不同地区马铃薯内生真菌分离情况 不同 ２.２.１ 内生真菌的分子生物学鉴定 挑选出测序
组织部位间马铃薯内生真菌的分离数量有一定差 成功的 １４ 株不同种的内生真菌的 ＩＴＳ 序列上传至
异性ꎬ利用组织块分离法和尖端菌丝挑取法ꎬ从云 ＮＣＢＩ 数据库中进行核酸序列 ＢＬＡＳＴ 比对ꎬ选择和
