Page 16 - 《广西植物》2024年第12期

２ １ ７ ４ 广 西 植 物 ４４ 卷
合进行杂交ꎮ 以上 ２ 个研究均成功获得了杂交后 １.２ 方法
代ꎬ但未对亲本及后代的抗病性进行评价ꎮ １.２.１ 枯萎病抗性鉴定 对所有百合材料采用离
虽然枯萎病已成为遏制龙牙百合种球生产的 体叶片接种法进行枯萎病抗性鉴定ꎮ (１) 离体叶
重要因素之一ꎬ但有关培育龙牙百合抗枯萎病杂 片的准备:每个百合品种选择生长健壮发育阶段
交后代的研究鲜见报道ꎮ 因此ꎬ本研究以湖南省 一致的植株ꎬ每个品种分别从上、中、下 ３ 个部位
隆回县的龙牙百合ꎬ以及目前国内市场上畅销的 等量摘取叶片ꎬ共摘取 ３０ 片叶片ꎮ (２) 菌丝块的
１４ 个百合栽培品种为材料ꎬ对其进行枯萎病的抗 准备:用直径为 ０.５ ｃｍ 的打孔器将尖孢镰刀菌打
性评价ꎬ将筛选出抗病性强的百合栽培品种与龙 成菌丝块ꎬ待用ꎮ (３) 接种:将摘取的叶片用 ７５％
牙百合分别进行正交和反交ꎬ并对杂交后代进行 酒精灭菌 １５ ｓꎬ用无菌水冲洗干净ꎬ摆放于铺有无
枯萎病抗性鉴定ꎬ以期为龙牙百合的远缘杂交提 菌滤纸的培养皿上ꎬ滤纸用无菌水保湿ꎻ用接种针
供参考ꎬ为后期培育抗性强的百合新品种提供材 挑取菌丝块ꎬ每个叶片上分别接种 ２ 个菌丝块ꎬ菌
料基础ꎮ 本研究拟探讨以下问题:(１) 参与杂交的 丝面朝下和叶片充分接触ꎻ将叶片基部用湿润的
亲本材料的枯萎病抗性ꎻ(２) 通过重复授粉、子房 棉球覆盖ꎬ接种完成后包上保鲜膜ꎬ置于 ２５ ℃ 条
切片及胚珠离体培养能否克服龙牙百合远缘杂交 件下培养ꎬ分别于 １ ｄ、３ ｄ、５ ｄ、７ ｄ、９ ｄ 的同一时
障碍ꎻ(３)通过 ＳＳＲ 分子标记鉴定以及杂交后代的 间调查叶片的发病情况ꎬ每日观察时在滤纸上滴
枯萎病抗性鉴定能否鉴定出具有枯萎病抗性的龙 加无菌水ꎮ
牙百合杂交后代ꎮ 百合尖孢镰刀菌侵染叶片致病的分级标准、
枯萎病抗性评价标准参照朱丽梅等( ２０１２) 的方
１ 材料与方法 法ꎮ 枯萎病叶部病斑分级标准如下:０ 级ꎬ无病斑ꎻ
１ 级ꎬ叶片病斑较少ꎬ病斑面积占整片叶面积的
１.１ 材料 ５％以下ꎻ３ 级ꎬ病斑较多ꎬ病斑面积占整个叶面积
研究所用植物材料包括传统栽培变种龙牙百 的 ５％ ~ ３０％ꎻ５ 级ꎬ病斑较多ꎬ病斑面积占整个叶
合(购自湖南一线情农业有限公司) 和观赏百合栽 面积的 ３１％ ~ ５０％ꎻ７ 级ꎬ病斑很多或融合成大斑ꎬ
培品种(５ 个杂种系 １４ 个品种ꎬ均购自浙江的虹越 病斑面积占整个面积的比例在 ５０％以上ꎮ 根据相
花卉股份有限公司和湖南的龙山县印家界生态农 对抗性指数进行抗性划分ꎬ抗性水平及对应的相
业开发有限公司)ꎮ 其中ꎬ亚洲百合杂种系品种 对抗性指数分别为高抗( ＨＲ) ＝ ０.７０ ~ １.００、中抗
( Ａ ) 为 ‘ 金 百 合 ’、 ‘ Ｔｒｅｓｏｒ ’、 ‘ Ｒｅｄ ｃｏｕｎｔｙ ’、 (ＭＲ)＝ ０.４０ ~ ０.６９、中感( ＭＳ) ＝ ０.２０ ~ ０.３９、高感
‘Ｐｅｔｅｒ’、‘ Ｂｌａｃｋ ｓｔｏｎｅ’、‘ Ｓｅｃｒｅｔ ｋｉｓｓ’、‘ Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ (ＨＳ) <０.２０ꎮ
ｅｖｅｎｔ’ꎻ东方百合杂种系品种(Ｏ)为‘Ｓｏｒｂｏｎｎｅ’ꎻ麝 病情指数的计算公式如下:
香百合 杂 种 系 品 种 ( Ｌ) 为 新 铁 炮 百 合 ( Ｌｉｌｉｕｍ × 病情指数 (％) ＝ Σ ( 病 级 叶 片 数 × 病 级 代 表
ｆｏｒｍｏｌｏｎｇｉ)、‘ Ｐｉｎｋ ｐｌａｎｅｔ’ꎻ麝亚百合杂种系品种 值) / (调查总叶片数 ×最高病级代表值) × １００ꎻ相

(Ｌｉｌｉｕｍ ｌｏｎｇｉｆｌｏｒｕｍ ｈｙｂｒｉｄｓ × Ｌｉｌｉｕｍ Ａｓｉａｔｉｃ ｈｙｂｒｉｄｓꎬ 对抗性指数(％)＝ １００－相对病情指数ꎮ
ＬＡ)为‘ Ｙｅｌｌｏｗ ｂｒｕｓｈ’、‘ Ｂｒｉｎｄｉｓｉ’ꎻ麝东百合杂种 １.２.２ 杂交组合与杂交方式的确定 根据不同百

系品 种 ( Ｌｉｌｉｕｍ ｌｏｎｇｉｆｌｏｒｕｍ ｈｙｂｒｉｄｓ × Ｌｉｌｉｕｍ Ｏｒｉｅｎｔａｌ 合种及品种的枯萎病抗病程度、前期测定的花粉
ｈｙｂｒｉｄｓꎬＬＯ)为‘Ｃａｌｉ’、‘ Ｍａｇｎｅｆｉｑｕｅ’ꎮ 以上植物材 生活力情况ꎬ确定杂交组合ꎮ 选择枯萎病抗性为
料的种球均于 ２０２２ 年春季栽培于湖南农业大学 高抗、中抗的观赏百合栽培品种与龙牙百合分别

园林花卉基地ꎬ植物材料开花图片如图 １ 所示ꎮ 进行正交和反交ꎬ作父本的观赏百合栽培品种要
供试菌种尖孢镰刀菌(菌株编号为 ＡＣＣＣ３７２６２ꎬ购 求具有较强的花粉生活力ꎮ 采用常规杂交授粉方
自中国农业微生物菌种保藏管理中心)ꎬ该菌为百 式ꎬ分别于花蕾期、盛花期、末花期进行不同时期
合枯萎病的致病菌ꎮ 菌种接种于马铃薯葡萄糖琼 授粉ꎬ每天早、中、晚重复授粉 ３ 次ꎬ每个杂交组合
脂培养基( ｐｏｔａｔｏ ｄｅｘｔｒｏｓｅ ａｇａｒꎬＰＤＡ)ꎬ购自北京索 杂交 ３０ 朵花以上ꎬ授粉后套袋ꎬ并挂上标签( 周敏
￣１ 等ꎬ２０２３)ꎮ 授粉后 ３０ ｄ 统计子房膨大率ꎬ子房膨
莱宝科技有限公司ꎬ３７ ｇＬ ꎬ置于 ２５ ℃ 下培养 ７
ｄ 后保存于 ４ ℃ 冰箱待用ꎮ 大率(％)＝ 膨大子房数 / 授粉花朵数×１００ꎮ