Page 17 - 《广西植物》2024年第12期

１２ 期 李泽等: 龙牙百合远缘杂交后代鉴定及枯萎病抗性评价 ２ １ ７ ５

Ａ. 龙牙百合ꎻ Ｂ. ‘金百合’ꎻ Ｃ. ‘Ｒｅｄ ｃｏｕｎｔｙ’ꎻ Ｄ. ‘ Ｐｅｔｅｒ’ꎻ Ｅ. ‘ Ｂｌａｃｋ ｓｔｏｎｅ’ꎻ Ｆ. ‘ Ｔｒｅｓｏｒ’ꎻ Ｇ. ‘ Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｅｖｅｎｔ’ꎻ Ｈ. ‘ Ｓｅｃｒｅｔ
ｋｉｓｓ’ꎻ Ｉ. ‘Ｓｏｒｂｏｎｎｅ’ꎻ Ｊ. 新铁炮百合ꎻ Ｋ. ‘Ｐｉｎｋ ｐｌａｎｅｔ’ꎻ Ｌ. ‘Ｙｅｌｌｏｗ ｂｒｕｓｈ’ꎻ Ｍ. ‘Ｂｒｉｎｄｉｓｉ’ꎻ Ｎ. ‘Ｃａｌｉ’ꎻ Ｏ. ‘Ｍａｇｎｅｆｉｑｕｅ’ꎮ 下同ꎮ
Ａ. Ｌｉｌｉｕｍ ｂｒｏｗｎｉｉ ｖａｒ. ｖｉｒｉｄｕｌｕｍꎻ Ｂ. ‘Ｊｉｎ’ꎻ Ｃ. ‘Ｒｅｄ ｃｏｕｎｔｙ’ꎻ Ｄ. ‘Ｐｅｔｅｒ’ꎻ Ｅ. ‘Ｂｌａｃｋ ｓｔｏｎｅ’ꎻ Ｆ. ‘Ｔｒｅｓｏｒ’ꎻ Ｇ. ‘Ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ｅｖｅｎｔ’ꎻ
Ｈ. ‘Ｓｅｃｒｅｔ ｋｉｓｓ’ꎻ Ｉ. ‘ Ｓｏｒｂｏｎｎｅ’ꎻ Ｊ. Ｌｉｌｉｕｍ × ｆｏｒｍｏｌｏｎｇｉꎻ Ｋ. ‘ Ｐｉｎｋ ｐｌａｎｅｔ’ꎻ Ｌ. ‘ Ｙｅｌｌｏｗ ｂｒｕｓｈ’ꎻ Ｍ. ‘ Ｂｒｉｎｄｉｓｉ’ꎻ Ｎ. ‘ Ｃａｌｉ’ꎻ Ｏ.
‘Ｍａｇｎｅｆｉｑｕｅ’. Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ.
图 １ 参与实验的百合种及品种的开花照片
Ｆｉｇ. １ Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ ｐｈｏｔｏｓ ｏｆ ｌｉｌｙ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ

１.２.３ 子房切片培养及胚珠离体培养 授粉 ５０ ｄ 新鲜幼嫩叶片ꎬ并提取 ＤＮＡꎮ 利用周艳萍(２０２０)
后ꎬ摘下尚未成熟的子房ꎬ刷洗表面污垢ꎬ于自来流 筛选发表的百合 ＳＳＲ 引物进行 ＰＣＲ 扩增ꎮ 反应体

水下冲洗 １ ｈ 左右ꎬ在组培台上用 ７５％酒精消毒 ３０ 系 ２５.０ μＬ:２×Ｒａｐｉｄ Ｔａｑ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ １２.５ μＬꎬＤＮＡ
ｓꎬ无 菌 水 冲 洗 ３ 次ꎬ 放 于 １０％ 次 氯 酸 钠 溶 液 模板 １.０ μＬꎬ１０ μｍｏｌＬ 上游和下游引物各 １.０
￣１
(ＮａＣｌＯ)中不断摇晃 ５ ｍｉｎꎬ无菌水冲洗 ５ 次ꎬ置于 μＬꎬ补足 ｄｄＨ Ｏ 至 ２５ μＬꎮ 扩增程序:９５ ℃ 预变性
２
接种盘上将子房横切为 ０.３ ｃｍ 的薄切片ꎻ之后接种 ３ ｍｉｎꎻ９５ ℃１５ ｓꎬ５６ ~ ６３ ℃ １５ ｓꎬ７２ ℃ １５ ｓꎬ进行
在子房切片培养基上ꎬ培养基配方为 １ / ２ ＭＳ ＋ ３０ ３５ 个循环ꎻ７２ ℃ 延伸 ５ ｍｉｎꎬ４ ℃ 保存ꎮ 用 ２％琼脂
￣１ ￣１
ｇＬ 蔗糖＋０.０１ ｍｇＬ 萘乙酸(ＮＡＡ) ＋０.１ ｍｇ 糖凝胶电泳筛选出条带稳定清晰、无杂带且多态
Ｌ ６￣苄氨基嘌呤(６￣ＢＡ) ＋７.５ ｇＬ 琼脂ꎬｐＨ 值为 性较好的引物ꎬ加上荧光标记后送至北京睿博兴
￣１
￣１
５.８~ ６.０ꎮ 培养 ２５ ｄ 后ꎬ将膨大胚珠取出放于胚珠 科生物技术有限公司进行毛细管电泳检测ꎮ
￣１
离体培养基上ꎬ培养基配方为 ＭＳ＋３０ ｇＬ 蔗糖＋ １.２.５ 杂交后代枯萎病抗性鉴定 选取直径 １.５ ｃｍ
￣１ ￣１ 左右的组培小鳞茎移植到无菌基质中培养 ７ ｄꎬ将小
０.０１ ｍｇＬ ＮＡＡ＋７.５ ｇＬ 琼脂ꎬｐＨ 值为 ５.８ ~
６.０ꎮ 大约 ２ 个月后统计胚珠的萌发率ꎬ胚珠萌发率 鳞茎移入大小一致的装有灭菌基质的花盆中ꎬ用直
(％)＝ 萌发出苗的胚珠数/ 膨大胚珠数×１００ꎮ 径 １ ｃｍ 的打孔器将尖孢镰刀菌打成菌丝块放入基
１.２.４ 杂种苗 ＳＳＲ 分子标记鉴定 采用 ＳＳＲ 分子 质中ꎬ每 ５ 小球为一组ꎬ设置 ３ 次重复ꎬ置于 ２５ ℃培
标记鉴定杂种的真实性ꎬ采集杂种苗及其亲本的 养箱中培养ꎬ培养 ３ ｄ、６ ｄ、９ ｄ、１２ ｄ、１５ ｄ、１８ ｄ、２１