Page 154 - 《广西植物》2024年第2期
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３ ５ ６ 广 西 植 物 ４４ 卷
里奇公司)ꎬ 无 水 碳 酸 钠 ( 西 陇 化 工 股 份 有 限 公 液(ＰＢＳꎬ５０ ｍｍｏｌＬ )为溶剂系统ꎬα￣葡萄糖苷酶
￣１
司)ꎬ磷酸 缓 冲 液 ( ＰＢＳꎬ北 京 索 莱 宝 科 技 有 限 公 配置成 ０.２５ ＵｍＬ ꎮ 实验设置 ４ 个组ꎬ即样品
￣１
司)ꎬ分析甲醇( 西陇化工股份有限公司)ꎬ分析乙 组、样品背景对照组、空白组和空白对照组ꎮ 按表
醇(西陇化工股份有限公司)ꎬ色谱甲醇( 美国斯百 １ 的反应体系进行活性测试ꎬ具体步骤如下ꎮ 首
全化学公司)ꎬ色谱乙腈(美国斯百全化学公司)ꎮ 先ꎬ取 ９６ 孔板ꎬ样品组依次加入样品溶液 ４０ μＬ、
１.３ 提取和分离 α￣葡萄糖苷酶溶液 ２０ μＬꎬ样品背景对照组依次加
取甜茶的干燥叶(５.５ ｋｇ)ꎬ加入 ９５％乙醇溶液 入样品溶液 ４０ μＬ、ＰＢＳ 缓冲液 ２０ μＬꎬ空白组依次
于室温下浸泡提取 ３ 次ꎬ每次 ７ ｄꎬ合并提取液ꎬ减 加入 α￣葡 萄 糖 苷 酶 溶 液 ２０ μＬ、 ＰＢＳ 缓 冲 液 ４０
压回收溶剂后得到总浸膏(４３２.２ ｇ)ꎮ 总浸膏中加 μＬꎬ空白对照组加入 ＰＢＳ 缓冲液 ６０ μＬꎻ然后ꎬ将
入 ４０％乙醇水溶液ꎬ充分溶解ꎬ静置分层ꎬ弃去下 加液后的 ９６ 孔板置于恒温箱中于 ３７ ℃ 条件下平
层沉淀物ꎬ将上清液减压回收溶剂至无醇味后ꎬ经 衡 ５ ｍｉｎ 后取出ꎻ接着ꎬ各实验组加入 ＰＮＰＧ 溶液
凝胶柱 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０(１０ ｃｍ × ３０ ｃｍ)ꎬ以甲醇－ ５０ μＬꎬ并将其置于恒温箱中于 ３７ ℃ 条件下反应
水溶液 ( ０％ ~ １００％ꎬ Ｖ / Ｖ) 为 洗 脱 剂 进 行 梯 度 洗 ３０ ｍｉｎꎬ取出ꎻ最后ꎬ向各实验组加入 Ｎａ ＣＯ 溶液
２ ３
脱ꎬ在薄层色谱分析指导下合并洗脱液ꎬ得到 １１ ５０ μＬ 终止反应ꎬ于 ４０５ ｎｍ 波长下测定并读取吸
个组分 Ｆｒ.１ ~ Ｆｒ.１１ꎮ 光度值ꎮ 样品组的吸光度值记为 Ａ ꎬ样品背景对
１
将 Ｆｒ.４ (２１.９ ｇ) 以树脂 ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ２０ＳＳ 色 照组的吸光度值记为 Ａ ꎬ空白组的吸光度值记为
２
谱柱(４ ｃｍ × ３０ ｃｍ) 进行分离ꎬ以甲醇－水(０％ ~ Ｂ ꎬ空白对照组的吸光度值记为 Ｂ ꎮ 按如下公式
１
２
１００％ꎬＶ / Ｖ)为洗脱剂进行梯度洗脱ꎬ得到化合物 １ 计算抑制率:抑制率 ＝ [１－(Ａ －Ａ ) / (Ｂ －Ｂ )] ×
１
２
２
１
１００％ꎮ 所有数据均平行测试 ３ 次ꎬ测试结果以平
(５.５ ｇ)ꎮ Ｆｒ.６ (８.１ ｇ) 经过 ＭＣＩ 柱(３ ｃｍ × ２３
ｃｍ)ꎬ以甲醇－水溶液(０％ ~ １００％ꎬＶ / Ｖ) 进行梯度 均值±标准偏差表示ꎮ
洗脱ꎬ得到 Ｆｒ.６１ ~ Ｆｒ.６６ꎮ Ｆｒ.６１ 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０
表 １ α￣葡萄糖苷酶抑制活性测试反应体系
柱ꎬ甲醇－水溶剂分离ꎬ得到化合物 ３ (６６.０ ｍｇ)ꎮ
Ｔａｂｌｅ １ Ｒｅａｃｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ α￣ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ
Ｆｒ.６２ 经甲醇溶剂反复结晶得到化合物 ６ ( ４６. ２
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｔｅｓｔ
ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.６３ 依次经 ＭＣＩ 柱( 甲醇 － 水溶液ꎬ０％ ~
(μＬ)
１００％ꎬＶ / Ｖ)、ＨＰＬＣ 液相色谱柱(５０％ 甲醇 － 水溶
样品背景 空白
液ꎬＶ / Ｖ)纯化得到化合物 ２ ( ５.９ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.６４ 经 样品组 对照组 空白组 对照组
试剂
ＨＰＬＣ 液相色谱柱ꎬ以 ２５％乙腈－水溶液等度洗脱 Ｒｅａｇｅｎｔ Ｓａｍｐｌｅ Ｓａｍｐｌｅ Ｂｌａｎｋ Ｂｌａｎｋ
ｇｒｏｕｐ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ｇｒｏｕｐ ｃｏｎｔｒｏｌ
(Ｖ / Ｖ)ꎬ纯化得到化合物 ４ (３０.７ ｍｇ) 和化合物 ５ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｇｒｏｕｐ
(６.０ ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.６５ 经 ＯＤＳ 柱色谱分离( 甲醇－水溶 样品 ４０ ４０ — —
Ｓａｍｐｌｅ
液ꎬ０％ ~ １００％ꎬＶ / Ｖ)ꎬ得到化合物 ７ ( ７８.３ ｍｇ)ꎮ
Ｆｒ.６６ 经 ＯＤＳ 色谱柱ꎬ以甲醇－水溶液进行梯度洗 α￣葡萄糖苷酶 ２０ — ２０ —
α￣ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ
脱(０％ ~ １００％ꎬＶ / Ｖ)ꎬ得到化合物 ８ (２６.７ ｍｇ)ꎮ
Ｆｒ.５ (４.６ ｇ) 以 ＯＤＳ 色谱柱进行分离ꎬ甲醇 － 水 ＰＢＳ — ２０ ４０ ６０
(０％ ~ １００％ꎬ Ｖ / Ｖ) 为 洗 脱 剂 进 行 梯 度 洗 脱ꎬ 经 ＰＮＰＧ ５０ ５０ ５０ ５０
Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ￣２０ 色谱柱纯化ꎬ得到化合物 ９ (５９.８
Ｎａ ２ ＣＯ ３ ５０ ５０ ５０ ５０
ｍｇ)ꎮ Ｆｒ.８ (５.４ ｇ) 以 ＭＣＩ 色谱柱进行分离ꎬ以甲
醇－水(０％ ~ １００％ꎬＶ / Ｖ) 为洗脱剂进行梯度洗脱ꎬ
２ 结果与分析
得到化合物 １０ (２３.６ ｍｇ)ꎮ
１.４ α￣葡萄糖苷酶抑制活性测试
α￣葡萄糖苷酶抑制活性测试参考文献( Ｐａｎ ｅｔ ２.１ 化合物的结构鉴定 (图 １)
ａｌ.ꎬ ２０２０ꎻ梁森 林 等ꎬ２０２２) 的 方 法ꎬ 并 作 适 当 调 化 合 物 １ 白 色 粉 末ꎮ ＨＲ￣ＥＳＩ￣ＭＳ ｍ / ｚ:
＋
整ꎬ以阿卡波糖为阳性对照药ꎬ对硝基苯￣α￣Ｄ￣吡喃 ６６５. ３１１ ５ [ Ｍ ＋ Ｎａ] ( ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ Ｈ Ｏ Ｎａꎬ
５０
１３
３２
１
葡萄糖苷(ＰＮＰＧꎬ１ ｍｍｏｌＬ ) 为底物ꎬ磷酸缓冲 ６６５.３１４ ４)ꎮ Ｈ ＮＭＲ (５００ ＭＨｚꎬ Ｄ Ｏ) δ: ５.３８ (１Ｈꎬ
￣１
２
