Page 181 - 《广西植物》2024年第2期

２ 期 易航等: 小黄花茶内生真菌的多样性分析及抑菌活性初筛 ３ ８ ３

Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｅｓ ａｎｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｉｎ Ｃａｍｅｌｌｉａ ｌｕｔｅｏｆｌｏｒａꎬ ａｓ ｗｅｌｌ
ａｓ ｔｈｅｉｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉꎬ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｕｓｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｙ
ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｉｎ Ｃ. ｌｕｔｅｏｆｌｏｒａ. Ｔｈｅｓｅ ｆｕｎｇｉ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ
ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｗａｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ. Ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｅｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｏｕｔ ｂｙ ｔｈｅ ｐｌａｔｅ
ｃｏｎｆｒｏｎｔａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ: (１) Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ２６１ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ３２４
Ｃ. ｌｕｔｅｏｆｌｏｒａ ｔｉｓｓｕｅ ｓａｍｐｌｅｓꎬ ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ ｔｏ １ ｐｈｙｌｕｍꎬ ５ ｃｌａｓｓｅｓꎬ ９ ｏｒｄｅｒｓꎬ ａｎｄ ２２ ｇｅｎｅｒａ. Ｔｈｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｇｅｎｅｒａ ｗｅｒｅ
Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍꎬ Ｄｉａｐｏｒｔｈｅ ａｎｄ Ｐｅｓｔａｌｏｔｉｏｐｓｉｓ ｗｉｔｈ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ２１.８４％ꎬ １６.８６％ ａｎｄ １０.３４％ꎬ
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. (２) Ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｉｎ Ｃ. ｌｕｔｅｏｆｌｏｒａ ｖａｒｉｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｅａｓｏｎｓ. Ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｓｔｒａｉｎｓ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ ｗｉｎｔｅｒ (７２ ｓｔｒａｉｎｓꎬ ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇ ｆｏｒ ２７.５９％ꎬ ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ ｔｏ １６ ｇｅｎｅｒａ)ꎬ ６２ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ
ｓｐｒｉｎｇ (ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ ｔｏ １３ ｇｅｎｅｒａ)ꎬ ５９ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ ｓｕｍｍｅｒ (ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ ｔｏ １５ ｇｅｎｅｒａ)ꎬ ａｎｄ ６８ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ
ｉｓｏｌａｔｅｄ ｉｎ ａｕｔｕｍｎ (ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ ｔｏ １３ ｇｅｎｅｒａ). Ｔｈｅ Ｓｈａｎｎｏｎ￣Ｗｉｅｎｅｒ ｉｎｄｅｘ (Ｈ′)ꎬ Ｓｉｍｐｓｏｎ ｉｎｄｅｘ (Ｄ)ꎬ Ｐｉｅｌｏｕｓ ｅｖｅｎｎｅｓｓ
ｉｎｄｅｘ (Ｅ)ꎬ ａｎｄ Ｍａｒｇａｌｅｆｓ ｒｉｃｈｎｅｓｓ ｉｎｄｅｘ (Ｍ) ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｉｎ ｗｉｎｔｅｒ. Ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇａｌ ｓｐｅｃｉｅｓ
ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｐｒｉｎｇ ａｎｄ ｗｉｎｔｅｒ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｕｍｍｅｒ ａｎｄ ａｕｔｕｍｎ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ. (３) Ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ
ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ａｌｓｏ ｖａｒｉｅｄ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ ｏｆ Ｃ. ｌｕｔｅｏｆｌｏｒａ. Ｔｈｅ ｓｔｅｍｓ ｈａｄ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ａｂｕｎｄａｎｔ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉꎬ ｗｉｔｈ
１０２ ｓｔｒａｉｎｓ ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇ ｆｏｒ ３９.０８％ (ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ ｔｏ １５ ｇｅｎｅｒａ)ꎬ ６１ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ (ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ ｔｏ １０
ｇｅｎｅｒａ)ꎬ ａｎｄ ９８ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ (ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ ｔｏ １５ ｇｅｎｅｒａ). Ｔｈｅ Ｈ′ꎬ Ｄꎬ Ｅꎬ ａｎｄ Ｍ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｉｎ
ｔｈｅ ｓｔｅｍｓꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇａｌ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ ｗｅｒｅ ｍｏｓｔ ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｅｍｓ. (４) Ｔｈｅ ｐｌａｔｅ
ｃｏｎｆｒｏｎｔａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ３５ ｔｅｓｔｅｄ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉꎬ ２６ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｈａｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ａｔ
ｌｅａｓｔ ｏｎｅ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉꎬ ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇ ｆｏｒ ７４.２９％ꎬ ａｍｏｎｇ ｗｈｉｃｈ ＣＪ￣Ⅱ￣２ꎬ ＸＹ￣Ｖ￣３ꎬ ＱＹ￣Ⅱ￣４ꎬ ＱＪ￣Ⅲ￣２ ａｎｄ ＤＪ￣Ｉ￣２
ｈａｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｅｉｇｈｔ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｆｕｎｇｉ ｔｏ ｖａｒｙｉｎｇ ｄｅｇｒｅｅｓ. ＸＹ￣Ｖ￣３ ｈａｄ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｅｉｇｈｔ
ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ５０％. ＸＹ￣Ｖ￣３ ａｎｄ ＱＪ￣Ⅲ￣２ ｈａｖｅ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅ
ｔｈａｎ ５０％ ｏｎ ｔｗｏ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉ ｉｎ Ｃ. ｌｕｔｅｏｆｌｏｒａꎬ ｗｈｉｃｈ ｈａｄ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ Ｃ.
ｌｕｔｅｏｆｌｏｒａ. Ｔｏ ｓｕｍ ｕｐꎬ ｔｈｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉ ｉｎ Ｃ. ｌｕｔｅｏｆｌｏｒａ ｉｓ ｒｉｃｈꎬ ａｎｄ ｓｏｍｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｈａｖｅ ｈｉｇｈｅｒ ｅｆｆｅｃｔ
ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｆｕｎｇｉꎬ ｗｈｉｃｈ ｌａｙ ａ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ
ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｃ. ｌｕｔｅｏｆｌｏｒａ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｃａｍｅｌｌｉａ ｌｕｔｅｏｆｌｏｒａꎬ ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ ｆｕｎｇｉꎬ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎꎬ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ

植物内生真菌是指生活史中的某一阶段或整 不同ꎮ 除此之外ꎬ不同地区的同种植物分离得到
个阶段ꎬ寄生在健康植物组织内部ꎬ但不会使宿主 的内 生 真 菌 种 类 和 数 量 也 不 相 同ꎬ 如 周 婀 等
植物出 现 明 显 病 害 症 状 的 微 生 物 ( Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ (２０２３)统计分析了红河谷和蒿坪两地野生桃儿七
２０１１)ꎮ 内生真菌与宿主植物形成互惠共生体ꎬ植 (Ｓｉｎｏｐｏｄｏｐｈｙｌｌｕｍ ｈｅｘａｎｄｒｕｍ) 内生真菌的多样性ꎬ
物为内生真菌提供营养物质和栖息场所ꎬ内生真 发现蒿坪野生桃儿七内生真菌多样性要高于红河
菌能够产生抑菌活性物质和促生性物质ꎬ保护宿 谷ꎮ 因此ꎬ根据当地植物生长特点分析其内生真
主植物抵御病虫害ꎬ促进宿主植物的生长ꎬ两者协 菌的多样性ꎬ筛选出优势菌株和特有菌株ꎬ是挖掘
同进化ꎬ相互作用( Ｍａｒｔｉｎａ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１４)ꎮ 研究发 具有生防作用和其他功能性作用菌株的基础ꎮ 内
现ꎬ植物内生真菌种类繁多ꎬ分布广泛ꎬ其多样性 生真菌既可以产生抗病原真菌的次生代谢产物ꎬ
体现在同一地区内同种植物在不同年龄段、不同 如萜类、生物碱、黄酮等(Ａｌｙ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１０)ꎬ也能通
部位以及所处的季节不同ꎬ分离得到的内生真菌 过抢占生态位点和营养物质等竞争方式ꎬ抑制病
种类和数量都不同ꎮ 例如ꎬ王京等(２０１７) 发现不 原真菌的生长(宋金秋和田璨熙ꎬ２０２０)ꎮ 同时ꎬ利
同年龄段的侧柏( Ｐｌａｔｙｃｌａｄｕｓ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ) 鳞叶内生 用植物内生菌进行生物防治ꎬ具有无污染、无耐药
真菌的多样性和相似性存在一定差异ꎻ李梦歌等 性、安全可持续的优点ꎮ
(２０１８)发现陕西宜君核桃( Ｊｕｇｌａｎｓ ｒｅｇｉａ) 不同季 小黄花茶(Ｃａｍｅｌｌｉａ ｌｕｔｅｏｆｌｏｒａ)ꎬ我国特有珍稀
节和不同组织部位其内生真菌多样性和相似性均 植物ꎬ隶属山茶科( Ｔｈｅａｃｅａｅ) 山茶属( Ｃａｍｅｌｌｉａ)ꎬ