Page 69 - 《广西植物》2024年第2期
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２ 期 朱云娜等: 芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 基因克隆及表达分析 ２ ７ １
氨基酸ꎬ 整条肽链的亲水性氨基酸数量多于疏水
性氨基酸数量ꎮ 由此推测ꎬ芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 可能为
亲水性蛋白ꎮ
利用 ＮｅｔＰｈｏｓ ３.１ 对芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 进行了潜
在 磷 酸 化 位 点 分 析ꎮ 由 图 ３: Ｃ 可 知ꎬ 芥 菜
ＢｊＧＳＴＦ１２ 存在若干个潜在的磷酸化位点ꎮ 芥菜
ＢｊＧＳＴＦ１２ 磷 酸 位 点 最 多 的 是 苏 氨 酸 磷 酸 位 点
( ｔｈｒｅｏｎｉｎｅꎬ Ｔｈｒ)ꎬ 为 ４ 个ꎬ 酪 氨 酸 磷 酸 化 位 点
(ｔｙｒｏｓｉｎｅꎬ Ｔｙｒ) 次 之ꎬ 为 ３ 个ꎬ 丝 氨 酸 磷 酸 位 点
(ｓｅｒｉｎｅꎬＳｅｒ)最少ꎬ为 １ 个ꎮ 这说明芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２
可能被苏氨酸、酪氨酸、丝氨酸激酶磷酸化ꎬ从而
实现其调控功能ꎮ 通过 ＳｉｇｎａｌＰ ５.０ 预测分析芥菜
ＢｊＧＳＴＦ１２ 氨基酸序列ꎬ发现无信号肽序列ꎬ说明芥
Ｍ. ＤＬ２０００ Ⅱ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒꎻ １. 以 ｃＤＮＡ 为模板的 ＰＣＲ 扩 菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 为非分泌型蛋白ꎮ
运用 ＥｘＰＡＳＹ 的 ＳＯＰＭＡ 对芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 的
增产物ꎻ ２. 以基因组 ＤＮＡ 为模板的 ＰＣＲ 扩增产物ꎮ
Ｍ. ＤＬ２０００ Ⅱ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒꎻ １. ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ ｏｆ
二级 结 构 进 行 了 分 析 预 测ꎮ 由 图 ３: Ｄ 可 知ꎬ
ｃＤＮＡꎻ ２. ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ ｏｆ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ.
ＢｊＧＳＴＦ１２ 蛋白含有 α￣螺旋(ａｌｐｈａ ｈｅｌｉｘ)４６.３０％、延
图 １ 芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 基因的 ＰＣＲ 产物琼脂凝胶电泳
伸链 ( ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｓｔｒａｎｄ) １５. ２８％、 β￣折 叠 ( ｂｅｔａ ｔｕｒｎ)
Ｆｉｇ. １ Ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ
ｏｆ ＢｊＧＳＴＦ１２ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ ７.４１％、无规则卷曲(ｒａｎｄｏｍ ｃｏｉｌ)３１.０２％ꎮ 由此可见ꎬ
芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 蛋白的主要组成部分为 α￣螺旋ꎬ而
缬氨酸( Ｖａｌꎬ９.７％)、丙氨酸( Ａｌａꎬ８.８％)、谷氨酸 延伸链、β￣折叠、无规则卷曲则散布于蛋白结构中ꎮ
利用 Ｐｌａｎｔ￣ＰＬｏｃ ｓｅｒｖｅｒ(ｗｗｗ.ｃｓｂｉｏ.ｓｊｔｕ.ｅｄｕ.ｃｎ /
(Ｇｌｕꎬ８.８％)等氨基酸组成ꎮ 该氨基酸序列的理论
ｂｉｏｉｎｆ/ ｐｌａｎｔ)预测芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 亚细胞定位发现
等电点(ｐＩ)为 ５.７３ꎬ平均疏水率为－０.０７５ꎬ脂肪酸
芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 定 位 于 细 胞 质 中ꎮ 利 用 ＴＭＨＭＭ
系数为 ９８.３８ꎬ不稳定系数为 ３８.３０ꎮ 这表明芥菜
Ｓｅｒｖｅｒ ２.０ 分析该蛋白无跨膜结构ꎮ 使用 ＳＷＩＳＳ￣
ＢｊＧＳＴＦ１２ 为稳定性蛋白ꎮ
ＭＯＤＥＬ 在 线 软 件 预 测 芥 菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 的 三 级 结
利用 ＮＣＢＩ 网站保守结构域分析网站(ｈｔｔｐｓ:/ /
构ꎮ 由图 ３:Ｅ 可知ꎬ芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 蛋白的主要结
ｗｗｗ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ/ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ/ ｃｄｄ/ ｗｒｐｓｂ.ｃｇｉ)对芥菜
构为 α￣螺旋ꎬ延伸链、β￣折叠、无规则卷曲则散分
ＢｊＧＳＴＦ１２ 基因编码氨基酸进行保守结构域分析ꎮ
布于蛋白结构中ꎬ与二级结构预测结果一致ꎻ芥菜
由图 ３:Ａ 可知ꎬ芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 具有 ＧＳＴ＿ＮＴＥＲＨＥ
ＢｊＧＳＴＦ１２ 蛋白三级结构为单体结构ꎮ
和 ＧＳＴ＿ＣＴＥＲ 两个结构域ꎬ保守结构域的位置为
２.３ 芥 菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 的 同 源 性 比 对 及 系 统 进 化
１
１ ~ ７５、 ９１ ~ ２０７ 位氨基酸ꎬ ＭＶＶＫＬＹＧＱＶＴＡＡＣＰＱ
分析
ＲＶＬＬＣＦＬＥＫＥＩＥＦＥＩＶＨＶＤＬＤＴＬＥＱＫＫＰＥＨＬＬＲＱＰ
将 芥 菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 与 油 菜 ＢｎＧＳＴＦ１２ ( ＸＰ ＿
７５ ９１
ＦＧＱＶＰＡＩＥＤＧＤＦＫＬＦＥＳＲＡＩＡＲＹＹＡ ꎻ ＥＨＲＡＩＶＤ
０４８６０２３８６. １ )、 拟 南 芥 ＡｔＧＳＴＦ１２ / ＡｔＴＴ１９ ( ＮＰ ＿
ＱＷＡＤＶＥＴＨＹ ＦＮＶＬＡＦＰＩＶＬＮＬＶＩＫＰＲＬＧＥＥＣＤＶＶＬ １９７２２４.１)、白菜 ＢｒＧＳＴＦ１２(ＸＰ＿００９１２６１７０.１)、萝卜
ＶＥＥＴＫＶＫＬＥＶＶＬＤＩＹＥＮＲＬＡＳＮＲＦＬＡＧＤＥＦＴＭＡＤ ＬＴ ＲｓＧＳＴＦ１２(ＸＰ＿０１８４４４３０５.１)、棉花 ＧｈＧＳＴＦ１２(ＸＰ＿
ＨＭＰＡＭＧＨＬＭＧＴＤＶＮＲＭＶＫＡＲＶＮＭＮＲＷＷＥＥＩＴＡＲＰ ０１６７４４８７７.２) 以及猕猴桃 ＡｃＧＳＴ１(ＰＳＳ２１４３５.１) 等
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ＡＷＫＫＬ ꎮ 由此可见ꎬ芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 具有 ＧＳＴ￣Ｃ 序列进行了氨基酸序列多重比对分析ꎮ 由图 ４ 可
保守结构域ꎬ属于 ＧＳＴ 基因家族成员ꎮ 知ꎬ芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 与其他物种 ＧＳＴ 氨基酸的同源
利用 ＥｘＰＡＳＹ ＰｒｏｔＳｃａｌｅ 预测了芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 性相似性介于 ５２. ０７％ ~ ９５.３１％ 之间ꎬ 其中ꎬ 芥菜
氨基 酸 序 列 的 亲 疏 水 性ꎬ 由 图 ３: Ｂ 可 知ꎬ 芥 菜 ＢｊＧＳＴＦ１２ 与 猕 猴 桃 ＡｃＧＳＴ１ 的 相 似 性 最 低ꎬ 为
ＢｊＧＳＴＦ１２ 的最大正分值(２.５２２) 位于肽链中的第 ５２.０７％ꎬ与油菜 ＢｎＧＳＴＦ１２ 相似性最高ꎬ达 ９５.３１％ꎮ
１１６ 位氨基酸ꎬ最小负分值( －２.２５６) 位于第 ４０ 位 利用 ＭＥＭＥ 在线分析工具对芥菜 ＢｊＧＳＴＦ１２
