Page 68 - 《广西植物》2024年第2期
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2 7 0                                  广  西  植  物                                         44 卷
                                               表 1  该文所用的引物和序列
                                        Table 1  Primers and sequences used in this study
                    引物 Primer               序列 (5′-3′) Sequence (5′-3′)                 用途 Usage
                                         F: ATGGTTGTGAAACTATACGGACAGG                   基因克隆
                     GSTF12
                                           R: TCAAGCTAATCCAAAACCAGCC                    Gene clone
                                          F: TTTGAAATCAGTGTGAATCAGCTTC                  启动子克隆
                    GSTF12pro
                                         R: TGAGAAGAAGTGAGAGTAGATGTGT                  Promoter clone
                                            F: CTCAAAGTGAAGCTCGGGGT                    荧光定量 PCR
                    q ̄GSTF12
                                            R: CGTAACCTCTTCCCACCACC                    Real ̄time PCR
                                            F: CATCCTCCGTCTCGACCTTG                荧光定量 PCR 内参基因
                      Actin2
                                           R: AGTCCACAGCGACAAAGGAG               Reference gene of real ̄time PCR

                                               表 2  该文所用的软件及网址
                                        Table 2  Software and websites used in this study

                   软件 Software                  网址 Website                           用途 Usage
                                                                                    理化特性分析
                  ExPASY ProtScale          https: / / web.expasy.org /
                                                                             Analysis of physicochemical properties
                                                                                     亚细胞定位
                  Plant ̄PLoc server     www.csbio.sjtu.edu.cn / bioinf/ plant/
                                                                                 Sub ̄cellular localization
                                                                                    跨膜结构分析
                 TMHMM Server 2.0  https: / / sevices.healthtech.dtu.dk / services/ TMHMM ̄2.0 /
                                                                              Analysis of protein transmembrane
                                                                                   磷酸化位点分析
                    NetPhos 3.1       http: / / www.cbs.dtudk / services/ NetPhos/
                                                                                Phosphorylation site analysis
                                                                                  蛋白质信号肽预测
                    SignalP 5.0   https: / / sevices.healthtech.dtu.dk / services/ SignalP ̄5.0 /
                                                                               Protein signal peptide prediction
                                                                                   蛋白质三级结构
                   SWISS ̄MODEL          https: / / www.swissmode.expasy.org /
                                                                             Three ̄dimensional structure of protein
                                                                                    保守基序分析
                     MEME                 http: / / meme ̄suite.org / meme /
                                                                                 Conserved motif analysis
                                                                                   保守结构域分析
                     SMART               http: / / smart.embl ̄heidelberg.de /
                                                                                Conserved domains analysis
                                                                                    蛋白互作分析
                     STRING                  https: / / string ̄db.org /
                                                                                Protein interaction analysis
                                                                                  顺式作用元件分析
                     Plantcare  http: / / bioinformatics.psb.ugent.be / webtools/ plantcare / html/
                                                                             Cis ̄acting regulatory element analysis
                                                                                  顺式作用元件可视化
                     TBtools                  Chen et al.ꎬ 2020
                                                                          Visualization of cis ̄acting regulatory elements


            F / R 为引物ꎬ克隆芥菜 BjGSTF12 基因ꎮ 经过 PCR                 片段 与 甘 蓝 型 油 菜 BnGSTF12 ( B. napusꎬ XM _
            扩展ꎬ获得目的条带如图 1 所示ꎮ 测序结果显示ꎬ                          013794351)、 白菜(Brassica rapaꎬXM_009127922.3)、
            芥菜 BjGSTF12 基因的基因组序列和开放阅读框                         拟 南 芥 AtGSTF12 ( Arabidopsis thalianaꎬ NM _
            序列分别为 808、651 bpꎮ                                  121728.4)核苷酸序列的同源性分别为 94%、94%
                 利用 Gene Structure Display Server 2.0 软件绘制     和 88%ꎮ 因此ꎬ将该芥菜基因命名为 BjGSTF12ꎮ
            芥菜 BjGSTF12 基 因 结 构 图ꎮ 由 图 2 可 知ꎬ 芥 菜              2.2 芥菜 BjGSTF12 蛋白序列的生物信息学分析
            BjGSTF12 基因序列中包含 2 个内含子ꎬ内含子序列                          利用 ProtParam 对芥菜 BjGSTF12 基因编码氨
            分别 在 148 ~ 232 bp、 282 ~ 353 bp 之 间ꎮ 芥 菜           基酸序列进行分析发现ꎬ芥菜 BjGSTF12 基因编码
            BjGSTF12 基因全长 CDS 序列为 651 bpꎬ编码 216 个              216 个氨基酸ꎬ分子量为 24.80 kDaꎬ原子组成为
            氨基酸ꎮ 通过 BLAST 在线比对ꎬ芥菜 GSTF12 基因                    C 1121 H 1765 N 297 O  313 S ꎬ主要由亮氨酸( Leuꎬ11.6%)、
                                                                               12
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