Page 152 - 《广西植物》2024年第5期

９ ４ ０ 广 西 植 物 ４４ 卷
甘蓝和白菜中已鉴定的 ＡＰ２ 基因ꎬ通过 ＢＬＡＳＴ 获 ＣＡＡＴ￣ｂｏｘ 等核 心 启 动 子 元 件ꎬ 光 应 答 元 件 ( Ｇ￣
得油菜中的同源序列ꎬ经过筛选去除重复序列ꎬ得 ｂｏｘ、ＡＡＡＣ￣ｍｏｔｉｆ、Ｂｏｘ４、ＧＴ￣１ 等ꎬ用于响应光照长
到 ９ 条序列ꎻ经 ＴＡＰＩＲ 网站预测 ｍｉＲ１７２ 和 ＡＰ２ 的 度和光周期刺激)ꎬ激素应答元件( ＡＢＲＥ、 Ｗ￣ｂｏｘ、
互补配对位点(表 ２)ꎬ选择错配碱基数小于 ３ 的序 ＧＡＲＥ、ＣＧＴＣＡ、 ＴＧＡＣＧ 等ꎬ 用 于 响 应 乙 烯、 脱 落
列保留ꎬ最终得到 ６ 条 ＡＰ２ 候选序列ꎮ 其中ꎬ根据 酸、赤霉素、生长素、乙酰水杨酸、茉莉酸的刺激)ꎬ

白菜 ＡＰ２ 序列比对得到 ２ 条序列 ＸＭ＿０１３８８７０７１ 生长发育应答元件( ＴＡＴＴＡＧꎬ参与细胞分裂)ꎬ逆
和 ＸＭ ＿ ０４８７７８０６８ꎬ 其 对 应 的 蛋 白 序 列 为 ＸＰ ＿ 境胁迫响应元件( ＭＹＢ２、ＵＰ１￣ｍｏｔｉｆ 等ꎬ参与响应
０１３７４２５２５ 和 ＸＰ＿０４８６００９８１ꎻ根据甘蓝 ＡＰ２ 序列 水胁迫、损伤胁迫等机制)ꎬ此外ꎬ启动子区还存在

比对 得 到 ４ 条 序 列 ＨＱ６３７４６８、 ＸＭ ＿０４８７７０４４５、 组织 特 异 性 元 件 ( ｒｏｏｔ￣ｍｏｔｉｆ、 ＰＯＬＬＥＮ￣ＥＬＥＭＥＮＴꎬ
ＸＭ＿０１３８８７０７３ 和 ＸＭ＿０４８７６３４２６ꎬ其对应的蛋白 调控相应基因在根和花这些特定组织中表达)ꎮ
序列为 ＡＤＵ０４４９９、ＣＤＹ２９５３８、ＸＰ ＿０１３７４２５２７ 和 这说明 ｍｉＲ１７２ 和 ＡＰ２ 可能参与调控开花过程ꎮ

ＸＰ＿０４８６１９３８３ꎮ ２.３ 油菜 ＡＰ２ 系统发育分析
２.２ 油菜 ｍｉＲ１７２ 和 ＡＰ２ 启动子区顺式调控元件 ２.３.１ ＡＰ２ 蛋白性质分析 由表 ２ 可知ꎬＡＰ２ 蛋白
的预测分析 由 ３５７ ~ ４３３ 个氨基酸组成ꎻ分子量为 ３９.７ ~ ４７.９
截取 ｐｒｅ￣ｍｉＲ１７２ 和 ＡＰ２ 基因上游 ２ ０００ ｂｐ 作 ｋＤａꎻ等电点为 ６.３１ ~ ６.７７ꎬ此外ꎬ亚细胞定位预测
为启动子区ꎬ经 ＮｅｗＰＬＡＣＥ 网站预测分析ꎬ在 ｐｒｅ￣ 发现ꎬ６ 条油菜 ＡＰ２ 均位于细胞核ꎬ说明这 ６ 条
ｍｉＲ１７２ 和 ＡＰ２ 启 动 子 区 发 现 存 在 ＴＡＴＡ￣ｂｏｘ、 ＡＰ２ 序列均属核基因ꎬ在细胞核内发挥不同功能ꎮ

表 ２ 油菜中 ＡＰ２ 蛋白性质分析
Ｔａｂｌｅ ２ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＡＰ２ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｉｎ ｒａｐｅ
序列名称 靶标起点 靶标终点 氨基酸长度 分子量 等电点 亚细胞定位
Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｎａｍｅ Ｔａｒｇｅｔ ｓｔａｒｔ Ｔａｒｇｅｔ ｅｎｄ Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｌｅｎｇｔｈ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｐＩ Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｏｃａｔｉｏｎ
ＸＰ＿０１３７４２５２５ １ ３４８ １ ３６８ ４３３ ４７ ７３６.５８ ６.４４ 细胞核
Ｎｕｃｌｅｕｓ
ＸＰ＿０４８６００９８１ １ ３７３ １ ３９３ ４３２ ４７ ９２４.７７ ６.７７ Ｎｕｃｌｅｕｓ
细胞核
ＡＤＵ０４４９９ １ １７８ １ １９８ ４３２ ４７ ７５７.４７ ６.３１ Ｎｕｃｌｅｕｓ
细胞核
ＣＤＹ２９５３８ １ ３４８ １ ３６８ ４３２ ４７ ９２４.７７ ６.７７ Ｎｕｃｌｅｕｓ
细胞核
ＸＰ＿０１３７４２５２７ １ ３５１ １ ３７１ ３５７ ３９ ７５３.８６ ６.４２ Ｎｕｃｌｅｕｓ
细胞核
ＸＰ＿０４８６１９３８３ １ ３５７ １ ３７７ ４３１ ４７ ６８５.４１ ６.４１ Ｎｕｃｌｅｕｓ
细胞核

２.３.２ 油菜 ＡＰ２ 的选择压力分析 对油菜中 ６ 个 ０４８７７０４４５、ＸＭ＿０１３８８７０７３ 与白菜 ＢｒａＡＰ２￣２ 关系
ＡＰ２ 候选序列与白菜(Ｂｒａ０１７８０９ 和 Ｂｒａ０１１７４１) 和 较近ꎬＸＭ＿０４８７６３４２６ 与甘蓝 ＢｒｏＡＰ２ 关系较近(图
甘蓝(ＫＣ５８４０９４)中 ＡＰ２ 进行 ｋａ、ｋｓ 计算ꎬ通过比较 １:Ａ)ꎮ Ｐｒｅ￣ｍｉＲ１７２ 进化树分析发现ꎬｂｎａ￣ｍｉＲ１７２ａ
ｋａ / ｋｓ 进行选择压力分析ꎮ 由表 ３ 可知ꎬ旁系同源 与 ｂｒａ￣ｍｉＲ１７２ａ 关 系 最 近ꎻ ｂｎａ￣ｍｉＲ１７２ｂ 和 ｂｎａ￣
基因 ７ 对ꎬ直系同源基因 ６ 对ꎬ全部 ｋａ / ｋｓ<１ꎬ表明 ｍｉＲ１７２ｃ 聚 类 在 一 组ꎬ 和 ｂｒａ￣ｍｉＲ１７２ｄ、 ａｔｈ￣

ＡＰ２ 家族在进化过程中经历了强烈的纯化选择ꎮ ｍｉＲ１７２ｅ 关 系 较 近ꎻ ｂｎａ￣ｍｉＲ１７２ｄ 和 ｂｒａ￣ｍｉＲ１７２ｃ
２.３.３ 系统进化树分析 为进一步确定油菜 ＡＰ２、 关系较近( 图 １:Ｃ)ꎮ ｍｉＲ１７２ 成熟序列的进化树
ｍｉＲ１７２ 和 ｐｒｅ￣ｍｉＲ１７２ 各 自 的 进 化 关 系ꎬ 利 用 分析ꎬ发现 ｍｉＲ１７２ｂ 和 ｍｉＲ１７２ｃ 聚 类 在 一 组 ( 图
ＭＥＧＡ６ 软件对多种植物的 ＡＰ２ 家族、ｍｉＲ１７２ 成 １: Ｂ )ꎬ 表 明 二 者 可 能 功 能 相 似ꎻ ｍｉＲ１７２ａ 和
熟序列和 ｐｒｅ￣ｍｉＲ１７２ 序列进行进化树分析ꎬ结果 ｍｉＲ１７２ｄ 分 别 聚 类 在 其 他 组 ( 图 １: Ｂ)ꎬ 可 能 与
显 示 油 菜 ＡＰ２ 序 列 ＸＭ ＿ ０１３８８７０７１、 ＸＭ ＿ ｍｉＲ１７２ｂ、ｍｉＲ１７２ｃ 的功能存在差异ꎮ