Page 35 - 《广西植物》2024年第7期

７ 期 席守鸿等: 南亚热带乡土树种与桉树人工林土壤真菌群落多样性和功能类群的比较 １ ２ ３ ５

表 １ ５ 个林分的立地条件和林分特征
Ｔａｂｌｅ １ Ｓｉｔｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｓｔａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｆｉｖｅ ｓｔａｎｄｓ
海拔 坡度 胸径 树高 林分密度
林分类型 坡向
Ａｌｔｉｔｕｄｅ Ｓｌｏｐｅ ｇｒａｄｉｅｎｔ ＤＢＨ Ｔｒｅｅ ｈｅｉｇｈｔ Ｓｔａｎｄ ｄｅｎｓｉｔｙ
Ｓｔａｎｄ ｔｙｐｅ Ｓｌｏｐｅ ａｓｐｅｃｔ
￣２
(ｍ) (°) (ｃｍ) (ｍ) (ｐｌａｎｔｈｍ )
ＰＭＰ ５４０ ＳＷ ３１ ２７.５ １９.７ ４３５
ＭＭＰ ５５０ ＮＥ ３５ １７.４ １８.０ １ ２２５
ＭＬＰ ５５０ ＮＥ ３０ １９.２ １９.７ １ ２０８
２４.７(Ｉ) １８.８(Ｉ) ３４０(Ｉ)
ＣＨＰ ５３０ Ｓ ３０
１０.２(Ⅱ) ８.５(Ⅱ) ６１２(Ⅱ)
ＥＵＧＰ ４７５ Ｓ １５ ５.８ ７.５ ２ ３００
注: ＰＭＰ. 马尾松林ꎻ ＭＭＰ. 火力楠林ꎻ ＭＬＰ. 米老排林ꎻ ＣＨＰ. 红锥林ꎻ ＥＵＧＰ. 尾巨桉林ꎮ Ｉ. 主林层ꎻ Ⅱ. 次林层ꎮ 下同ꎮ
Ｎｏｔｅ: ＰＭＰ. Ｐｉｎｕｓ ｍａｓｓｏｎｉａｎａ ｐｌａｎｔａｔｉｏｎꎻ ＭＭＰ. Ｍｉｃｈｅｌｉａ ｍａｃｃｌｕｒｅｉ ｐｌａｎｔａｔｉｏｎꎻ ＭＬＰ. Ｍｙｔｉｌａｒｉａ ｌａｏｓｅｎｓｉｓ ｐｌａｎｔａｔｉｏｎꎻ ＣＨＰ. Ｃａｓｔａｎｏｐｓｉｓ
ｈｙｓｔｒｉｘ ｐｌａｎｔａｔｉｏｎꎻ ＥＵＧＰ. Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ ｕｒｏｐｈｙｌｌａ × Ｅ. ｇｒａｎｄｉｓ ｐｌａｎｔａｔｉｏｎ. Ｉ. Ｍａｉｎ ｆｏｒｅｓｔ ｌａｙｅｒꎻ Ⅱ. Ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｆｏｒｅｓｔ ｌａｙｅｒ. Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ.

２０ μＬ 反应体系为 ５ × ＦａｓｔＰｆｕ Ｂｕｆｆｅｒ ４ μＬ、 ｄＮＴＰｓ 据库来解析各样品真菌群落的营养型和功能类
￣１ ￣１ 群ꎮ 为了保证解读真菌功能类群的可靠性ꎬ只保
(２.５ ｍｍｏｌＬ )２ μＬ、Ｆｏｒｗａｒｄ Ｐｒｉｍｅｒ(５ μｍｏｌＬ )
￣１ 留置信 度 为 “ 极 可 能” ( ｈｉｇｈｌｙ ｐｒｏｂａｂｌｅ) 和 “ 很 可
０.８ μＬ、Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｐｒｉｍｅｒ(５ μｍｏｌＬ )０.８ μＬ、ＦａｓｔＰｆｕ
Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ０. ４ μＬ、ＢＳＡ ０. ２ μＬ、Ｔｅｍｐｌａｔｅ ＤＮＡ １０ 能”(ｐｒｏｂａｂｌｅ)２ 个等级(Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６)ꎮ
ｎｇꎬ补ｄｄＨ Ｏ至 ２０ μＬꎮ ９５ ℃ 预变性 ３ ｍｉｎꎬ之后 ９５ １.５ 数据处理
２
℃ ３０ ｓꎬ５５ ℃ ３０ ｓꎬ７２ ℃ ４５ ｓꎬ３５ 个循环ꎬ然后 ７２ 利用 Ｋｒｕｓｋａｌ￣Ｗａｌｌｉｓ 秩和检验法对不同林分土
℃ 延伸 １０ ｍｉｎꎬ１０ ℃ 至停止ꎬ达到 ＰＣＲ 扩增条件ꎮ 壤真菌门和目进行差异显著性检验ꎮ 土壤样品真
每个样本 ３ 个重复ꎬ将同一样本的 ＰＣＲ 产物混合后 菌群落的 α 多样性采用基于 ＯＴＵ 的 Ｃｈａｏ１ 指数、
用 ２％琼脂糖凝胶电泳检测ꎬ使用 ＡｘｙＰｒｅｐ ＤＮＡ 凝 Ｓｈａｎｎｏｎ 指数和 Ｓｉｍｐｓｏｎ 指数来表征ꎬ其中 Ｓｉｍｐｓｏｎ
胶回收试剂盒( ＡＸＹＧＥＮ 公司) 切胶回收 ＰＣＲ 产 指数越小代表多样性越大ꎬ由 Ｍｏｔｈｕｒ 软件完成计
物ꎬ并将 ＰＣＲ 产物用 ＱｕａｎｔｉＦｌｕｏｒ ￣ＳＴ 蓝色荧光定 算(Ｐａｔｒｉｃｋ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１７)ꎮ 不同林分之间土壤理化
ＴＭ
量系统(Ｐｒｏｍｅｇａ 公司)进行检测定量ꎮ 委托美吉生 性质、真菌群落 α 多样性的差异显著性采用单因

物科 技 ( 上 海) 有 限 公 司 ( ｈｔｔｐｓ:/ / ｗｗｗ. ｍａｊｏｒｂｉｏ. 素方差分析( ｏｎｅ￣ｗａｙ ＡＮＯＶＡ) 检测ꎬ并用 Ｄｕｎｃａｎ
ｃｏｍ)用 Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＭｉＳｅｑ ＰＥ３００ 平台进行文库构建以 法进行多重比较ꎻ使用 Ｓｐｅａｒｍａｎ 秩相关系数检验
及高通量测序ꎮ 全部样品的高通量测序结果已提 α 多样性与土壤理化性质因子之间的相关性ꎮ 以
交至 ＮＣＢＩ ＳＲＡ(ｈｔｔｐｓ:/ / ｗｗｗ.ｎｃｂｉ.ｎｌｍ.ｎｉｈ.ｇｏｖ / )ꎬ编 上 计 算 均 使 用 ＳＰＳＳ ２６. ０ 软 件 ( ＳＰＳＳꎬ Ｉｎｃꎬ

号为 ＰＲＪＮＡ９３６１８８ꎮ Ｃｈｉｃａｇｏꎬ ＩＬ)完成ꎮ
１.４ 生物信息学分析 基于 ＯＴＵ 的 Ｂｒａｙ￣Ｃｕｒｔｉｓ 距 离ꎬ 利 用 Ｒ 软 件
使用 Ｔｒｉｍｍｏｍａｔｉｃ 软件对测序读数( ｒｅａｄｅｒ) 的 ｖｅｇａｎ 程序包中的“ｍｅｔａＭＤＳ ( )” 函数对不同土壤
接头(ａｄａｐｔｅｒ)序列和低质量序列进行过滤ꎮ 利用 样品的真菌群落 β 多样性进行非度量多维标度

ＵＳＥＡＲＣＨ 软 件 ( ｖｓｅｓｉｏｎ ７. １ꎬ ｈｔｔｐ: / / ｄｒｉｖｅ５. ｃｏｍ / (ｎｏｎ￣ｍｅｔｒｉｃ ｍｕｌｔｉｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｓｃａｌｉｎｇꎬＮＭＤＳ)分析ꎻ进
ｕｐａｒｓｅ / )按照 ９７％相似性对非重复序列(不含单序 而用基于 ９９９ 次置换检验的置换多元方差分析
列)进行 ＯＴＵ 聚类ꎬ在聚类过程中去除嵌合体ꎬ得 ( ｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎａｌ ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅꎬ
到 ＯＴＵ 的 代 表 序 列ꎮ 在 Ｑｉｉｍｅ１ 平 台 采 用 ＲＤＰ ＰＥＲＭＡＮＯＶＡ)法检测各土壤样品真菌群落 β 多样
ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ 贝叶斯算法对 ９７％相似水平的 ＯＴＵ 代表 性的差异显著性ꎬ计算由 Ｒ 软件 ｖｅｇａｎ 程序包中的
序 列 比 对 Ｓｉｌｖａ ( Ｒｅｌｅａｓｅ１２３ꎬ ｈｔｔｐ: / / ｗｗｗ. ａｒｂ￣ “ａｄｏｎｉｓ ( )”函数完成ꎮ 以加权 Ｂｒａｙ￣Ｃｕｒｔｉｓ 非相似
ｓｉｌｖａ.ｄｅ)数据库(置信度阈值为 ０.７)获得各土壤样 性矩阵作为响应变量ꎬ以土壤理化性质为预测变
品真菌的分类学信息ꎬ将 ＯＴＵ 表和物种信息表合 量ꎬ采用广义非相似模型 ( ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ ｄｉｓｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ
并后ꎬ利用 Ｐｙｔｈｏｎ ３.８ 软件比对 ＦＵＮＧｕｉｌｄ ｖ１.１ 数 ｍｏｄｅｌꎬ ＧＤＭ)(Ｆｅｒｒｉｅｒ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００７)分析土壤理化性