Page 131 - 《广西植物》2025年第10期

１０ 期 张高荣等: 宽筋藤内生真菌 Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄｉｃｕｍ ＫＪＴ￣１ 的分离鉴定及其微生物转化研究 １ ８ ６ １

样品溶液反应后测定的吸光度ꎻＡ 是 ３ ｍＬ 样品溶 内ꎬ与 Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄｉｃｕｍ ＯＢＰ２２ 的序列
２
液 ２ ｍＬ ＤＰＰＨ 溶液反应后测定的吸光度ꎮ 相似 性 最 高ꎬ 为 ９９. ６７％ꎬ 故 鉴 定 ＫＪＴ￣１ 菌 株 为
２.８ 微生物转化前后宽筋藤正丁醇萃取物化学成 Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄｉｃｕｍꎮ
分分析 ３.２ 微生物转化前后宽筋藤各提取物抑菌活性
本研究采用 ＬＣ￣ＭＳ 联用技术在负离子模式下 由表 １ 可知ꎬ除阳性对照外ꎬ微生物转化前宽

对微生物转化前后宽筋藤的正丁醇萃取物 ( ｎ￣ＢＥ￣ 筋藤各提取物对 ５ 种测试菌株均无抑菌作用ꎬ并
１、ｎ￣ＢＥ￣２) 进行数据采集ꎬ得到其总离子流图ꎬ通 且目前对宽筋藤提取物的抗菌作用研究尚未报
过质谱信息及比对数据库 ( ＮＩＳＴ２３.Ｌ) 进行化学 道ꎮ 由表 ２ 可知ꎬ微生物转化后宽筋藤的粗提物、

成分分析ꎮ 乙酸乙酯与石油醚萃取物对 ５ 种测试菌株均无抑
色谱条件:色谱柱为 ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣ￣ＢＥＨ Ｃ１８ 制作用ꎬ正丁醇萃取物能够抑制金黄色葡萄球菌
(２.１ ｍｍ × １００ ｍｍꎬ １.７ μｍ)ꎬ以 ０.１％甲酸水(Ａ)－甲 的生长ꎬ其抑菌圈直径为 (９.８２ ± ０.２０) ｍｍꎮ 由

醇(Ｂ) 作 为 流 动 相 进 行 梯 度 洗 脱 ( ０ ~ ４０ ｍｉｎꎬ 表 ３ 可知ꎬ最低杀菌浓度实验结果表明ꎬ微生物转
￣１ 化后宽筋藤正丁醇萃取物对金黄色葡萄球菌的
１０％ Ｂ ~ １００％ Ｂ)ꎬ流速为 １ ｍＬｍｉｎ ꎬ柱温 ３５
℃ ꎬ进样量 １ μＬꎬ检测波长设为 ２５４ ｎｍꎮ 质谱条 ＭＢＣ 值为 ３１.３ ｍｇｍＬ ꎬ而对其他 ４ 种测试菌株
￣１
件:本实 验 利 用 Ｗａｔｅｒｓ 系 统 中 的 电 喷 雾 离 子 源 无抗菌作用ꎬ因此未测定其 ＭＢＣ 值ꎮ
(ＥＳＩ)对样品进行负离子模式下的全扫描ꎬ毛细管 ３.３ 微生物转化前后宽筋藤各提取物 ＤＰＰＨ 自由
￣１ 基清除实验结果
压 ３.０ ｋＶ、锥孔压 ３０ Ｖ、锥孔回流流速 ５０ Ｌｈ 、
￣１ 如图 ２ 所示ꎬ转化前后宽筋藤各提取物均具有
去溶剂气体流速 １ ０００ Ｌｈ 、离子源温度 ２３０ ℃ 、
去溶剂气体温度 ３００ ℃ 、每 ０.２ ｓ 取 １ 次谱图ꎬ扫描 一定的 ＤＰＰＨ 自由基清除能力ꎬ其清除能力与浓
范围 ｍ / ｚ ５０ ~ １ ０００ꎮ 采用 ＵＮＩＦＩＴＭ １.９.４ 质谱分 度呈剂量 依 赖 性ꎮ 由 图 ２: Ａ 可 知ꎬ 在 １. ０ ｍｇ
￣１
析软件进行数据采集和分析 (郭宁ꎬ２０２２)ꎮ ｍＬ 浓度下ꎬ微生物转化前宽筋藤粗提物的 ＤＰＰＨ
自由基清除率约为 ３７.５０％ꎬ转化后 ＤＰＰＨ 自由基
３ 结果与分析 清除率约为 ３６.５８％ꎬ相比转化前减少了０.９２％ꎻ由
图 ２:Ｂ 可知ꎬ在 １.０ ｍｇｍＬ 浓度下ꎬ转化前宽筋
￣１
３.１ 内生真菌 ＫＪＴ￣１ 菌株的菌种鉴定 藤石油醚萃取物其清除率为 ８８.８０％ꎬ转化后其清
在微生物的纯化过程中ꎬ总共分离得到内生 除率达到了 ９５.７０％ꎬ较转化前升高了 ６.９０％ꎻ由图
真菌 １０ 株 (编号 ＫＪＴ￣１－ＫＪＴ￣１０)ꎮ 本研究对分离 ２:Ｃ 可知ꎬ在 １.０ ｍｇｍＬ 浓度下ꎬ转化前宽筋藤
￣１
得到的 １０ 株内生真菌进行转化研究发现ꎬＫＪＴ￣１ 乙酸乙酯萃取物清除率达到 ９０.５０％ꎬ转化后清除
菌株代谢产物及其转化前各提取物对 ５ 种指示菌 率为 ７８.９２％ꎬ较转化前降低了 １１.５８％ꎻ由图 ２:Ｄ
￣１
株无抗菌活性ꎬ仅其转化后的正丁醇萃取物 ( ｎ￣ 可知ꎬ在 １.０ ｍｇｍＬ 浓度下ꎬ转化前宽筋藤正丁
ＢＥ￣２) 对指示菌株金黄色葡萄球菌表现出明显的 醇萃 取 物 清 除 率 达 ９３.８５％ꎬ 转 化 后 清 除 率 为
抗菌活性ꎬ其他菌株转化前后的各提取物对 ５ 种 ８９.２３％ꎬ较转化前降低了 ４.６２％ꎮ 综上所述ꎬ微生
指示菌株的抗菌活性无明显差异ꎬ说明 ＫＪＴ￣１ 具有 物转化前后宽筋藤各提取物均具有一定的 ＤＰＰＨ
较好的转化能力ꎬ值得深入研究ꎮ 另外ꎬＫＪＴ￣１ 菌 自由基清除能力且转化后其清除能力有所改变ꎬ
株的代谢产物转化前后均无抗菌活性ꎬ也减少了 说明微生物转化过程使宽筋藤提取物的化学成分

转化过程的不确定因素对转化结果产生的影响ꎮ 发生了一定改变ꎮ
故以 ＫＪＴ￣１ 菌株作为实验菌株并进行鉴定ꎮ 如图 ３.４ 微 生 物 转 化 前 后 宽 筋 藤 正 丁 醇 萃 取 物 化 学
１:Ａ 所示ꎬＫＪＴ￣１ 菌株在 ＰＤＡ 平板上生长良好ꎬ菌 成分
丝白色ꎬ质地柔软ꎬ表面光滑ꎬ容易挑起ꎮ 基于基 图 ３ 和图 ４ 分别为微生物转化前后宽筋藤正
因测序结果及经 Ｂｌａｓｔ 比对ꎬ得到与其同源性较高 丁醇萃取物的总离子流图ꎮ 由图 ３ 和表 ４ 可知ꎬ从
的序列信息菌株ꎬ利用 ＭＥＧＡ ７ 软件和邻位相连 微生物转化前的宽筋藤正丁醇萃取物中识别并鉴
法构建系统进化树ꎮ 如图 １:Ｂ 所示ꎬＫＪＴ￣１ 菌株与 定出 ３３ 个化合物ꎬ包括 １ 个黄酮、８ 个萜类、３ 个
Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｑｕｅｅｎｓｌａｎｄｉｃｕｍ ＯＢＰ２２ 分 在 同 一 簇 苯丙素、４ 个酯、７ 个酚、２ 个甾体、３ 个生物碱、３ 个