Page 90 - 《广西植物》2025年第11期
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２ ０ ３ ４ 广 西 植 物 ４５ 卷
植株活性和生理指标恢复良好ꎮ 由此可见ꎬ利用 １.２.３ 微波脱除宿根矮化病菌 将 １０ ｃｍ 的甘蔗单
微波对植物进行处理可以在保证植株健康存活的 芽种茎随机分成实验组( Ａ－Ｉ) 和对照组( ＣＫ)ꎬ共
条件下有效杀灭内生致病菌ꎮ １０ 组ꎬ每组随机取 ２５ 段ꎬ重复 ３ 次ꎮ 实验组微波
目前ꎬ 甘 蔗 种 茎 仍 主 要 采 用 传 统 方 法 脱 毒 处理条件分别为 Ａ(５２ ℃ ꎬ１０ ｍｉｎ)、Ｂ( ５２ ℃ ꎬ２０
(Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１０ꎻ 黄勇等ꎬ２０１７)ꎬ尚缺乏微 ｍｉｎ)、Ｃ(５２ ℃ ꎬ３０ ｍｉｎ)、Ｄ(５４ ℃ ꎬ１０ ｍｉｎ)、Ｅ(５４
波脱菌技术的应用ꎬ微波对甘蔗发芽势、发芽率、 ℃ ꎬ２０ ｍｉｎ)、Ｆ(５４ ℃ ꎬ３０ ｍｉｎ)、Ｇ(５６ ℃ ꎬ１０ ｍｉｎ)、
芽高等生理指标影响也有待考证ꎮ 本研究旨在通 Ｈ(５６ ℃ ꎬ２０ ｍｉｎ)、Ｉ(５６ ℃ ꎬ３０ ｍｉｎ)ꎬＣＫ 不作任何
过科学的实验设计和数据分析ꎬ系统地比较甘蔗 处理ꎮ 使用红外热成像仪检测甘蔗种茎的温度变
种茎在微波处理过程中的不同摆放方式、处理温 化ꎬ实验组温度达到目标温度后微波改为自动控
度以及处理时间等因素对甘蔗种茎生长发育以及 制的间歇加热方式ꎬ设置种茎检测温度≥目标温
宿根矮化病脱菌效果的影响ꎬ探究相关的生物机 度 ０.５ ℃ 时停止微波加热ꎬ种茎检测温度≤目标温
理ꎬ并初步确定甘蔗微波脱菌的最佳条件ꎬ为甘蔗 度 ０.５ ℃ 时开启微波加热ꎬ直到处理时间结束ꎮ
健康种苗的培育及其产业化提供技术支撑ꎮ １.２.４ 种茎培育与萌芽 对微波处理后的实验组
和对照组种茎ꎬ用椰糠包裹ꎬ置于 ３４ ℃ 恒温恒湿
１ 材料与方法 培育箱培育ꎬ保持空气湿度为 ９５％ꎮ 分别检测甘
蔗种茎 ３、７、１０ ｄ 的发芽率ꎬ并测量第 １０ 天甘蔗种
１.１ 实验材料 茎腋芽的高度ꎮ
实验材料选择广西种植 的 主 要 甘 蔗 品 种 之 １.２.５ 宿根矮化病病原检测 取培育至第 １０ 天的
一———‘新台糖 ２２ 号’ꎬ２０２３ 年 １２ 月采自广西大 甘蔗萌动芽进行病菌检测ꎮ 采集幼叶ꎬ使用广谱
学亚热带农业科技新城( 广西崇左扶绥)ꎬ通过对 性植物 ＤＮＡ 提取试剂盒( 广东美基生物科技股份
甘蔗生长情况进行观察和初筛ꎬ选取疑似感染宿 有限公司)进行 ＤＮＡ 提取ꎬ采用 ＲＳＤ 特异性引物:
根矮化病的甘蔗作为实验样本ꎬ制备成长度约 １０ 上游引物 ５′ － ＧＧＡＡＴＡＣＴＣＧＣＴＡＴＧＴＧＴＴＧ － ３′ꎬ下
ｃｍ 的单芽种茎ꎬ将单芽种茎混匀后随机分组进行 游引物 ５′ －ＣＣＡＡＴＡＣＴＡＴＧＣＣＧＴＡＧＡＡＡＧ － ３′( Ｆｕ
实验ꎮ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１６)ꎬ进行常规 ＰＣＲ 扩增ꎮ ＰＣＲ 扩增的
１.２ 实验方法 １０ μＬ 体系:５ μＬ ２ ×Ｐｈａｎｔａ Ｍａｘ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ ( Ｄｙｅ
１.２.１ 种茎摆放方式 将甘蔗切成 １０ ｃｍ 的单芽种 Ｐｌｕｓ)(南京诺唯赞生物科技股份有限公司)、１ μＬ
茎ꎬ分别按照层叠状、竖立集束状、竖立分散状、环 ＤＮＡ、上下游引物各 ０.４ μＬ、３.２ μＬ ｄｄＨ Ｏꎮ ＰＣＲ
２
绕平铺状和环绕堆叠状摆放方式放入 ＷｅｂｏＸ￣Ａ６ 扩增程序:９５ ℃ 预变性 ３ ｍｉｎꎻ９５ ℃ 变性 １５ ｓꎬ５５
全数字化变频工业微波炉( 株洲市微朗科技有限 ℃ 退火 １５ ｓꎬ７２ ℃ 延伸 ３０ ｓꎬ３５ 个循环ꎻ７２ ℃ 延伸
公司ꎬ微波频率为 ２ ４５０ ＭＨｚꎬ功率为 １５０ ~ ５ １００ ５ ｍｉｎꎮ ＰＣＲ 结束后ꎬ取 ５ μＬ 产物进行 １％琼脂糖
Ｗꎬ可调)进行微波处理ꎬ微波功率为 ５００ Ｗꎬ处理 凝胶电泳检测ꎮ
时间为 ４ ｍｉｎꎬ使用 Ｔｅｓｔｏ￣８６９ 红外热成像仪 [ 德国 １.２.６ 数据分析方法 使用统计学分析软件 ＳＰＳＳ
仪器国际贸易( 上海) 有限公司] 对 ５ 种不同摆放 １９.０(ＳＰＳＳ Ｉｎｃ.ꎬＣｈｉｃａｇｏꎬＩＬꎬＵＳＡ)进行单因素方差
方式的甘蔗受热温度进行监测ꎬ考察种茎不同摆 分析(ｏｎｅ￣ｗａｙ ＡＮＯＶＡ)ꎬ对种茎的发芽率和平均
放方式对微波处理温度均匀性的影响ꎮ 萌动芽高度进行差异显著性分析ꎬ显著水平为 Ｐ<
１.２.２ 种茎加热温度耐受性测试 将 １０ ｃｍ 的单芽 ０.０５ꎻ使用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｏｆｆｉｃｅ Ｅｘｃｅｌ ２０２１ 进行数据整
种茎随 机 分 成 ７ 组ꎬ 设 置 微 波 处 理 温 度 范 围 为 理ꎻ使 用 Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ １０. １. ２、 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｏｆｆｉｃｅ
５０ ~ ６０ ℃ 、梯度为 ２ ℃ 的温度耐受实验组 ６ 组ꎬ对 Ｐｏｗｅｒ Ｐｏｉｎｔ ２０２１ 和 ＯｒｉｇｉｎＰｒｏ ２０２５ 进行作图ꎮ
照组 １ 组(不作任何处理)ꎬ每组 ２５ 段种茎ꎬ３ 次重
复ꎬ采用微波对温度耐受实验组进行单次加热处 ２ 结果与分析
理ꎬ温度耐受实验组的种茎温度达到设置温度后
微波停止加热ꎬ考察甘蔗种茎对不同微波加热温 ２.１ 不同摆放方式的微波加热效果
度的耐受性ꎮ 将甘蔗种茎按照 ５ 种不同的摆放方式放入变
