Page 145 - 《广西植物》2025年第12期
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１２ 期 刘依婷等: 低温胁迫下兴安白芷与川白芷种子转录组特征及激素调控基因的比对研究 ２ ２ ８ ７
ＫＥＧＧ 数据库比对分析ꎮ 将获得的 ＫＥＧＧ 注释结 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 验证ꎮ 使用 ＮＣＢＩ 进行引物设计ꎬ采用
果ꎬ基于 ＩｎｔｅｒＰｒｏ 整合数据库进行 ＧＯ 功能注释ꎬ ＲＮＡｐｒｅｐ Ｐｕｒｅ 多糖多酚植物总 ＲＮＡ 提取试剂盒
对 Ｕｎｉｇｅｎｅ 的氨基酸序列与 Ｐｆａｍ 数据库比对ꎬ获 [天根生化科技( 北京) 有限公司] 提取不同组别
得 Ｕｎｉｇｅｎｅ 的注释信息ꎮ 采用 Ｂｏｗｔｉｅ 软件将测序 白芷的 ＲＮＡꎬ使用 ＦａｓｔＫｉｎｇ ｃＤＮＡ 第一链合成试剂
得到的 Ｒｅａｄｓ 与 Ｕｎｉｇｅｎｅ 库以 ＦＰＫＭ 值的形式进 盒[天根生化科技( 北京) 有限公司] 将其反转录
行序列比对ꎮ 通过基因在各个样本中的 Ｃｏｕｎｔ 值ꎬ 成 ｃＤＮＡꎬ作为 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 模板ꎮ 以 Ａｃｔｉｎ 为内参基
利用差异分析软件筛选差异表达基因ꎬ对于有生 因ꎬ配制 ２０ μＬ( １ μＬ ｃＤＮＡꎬ上下游引物各 ０. ５
物学重复的样本组ꎬ使用 ＤＥＳｅｑ２ 进行差异分析ꎮ μＬꎬ１０ μＬ ２ × Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｂｌｕｅ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ｑＰＣＲ
在差异表达基因检测过程中ꎬ设置错误率 ＦＤＲ≤ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘꎬ８ μＬ ｄｄＨ Ｏ)扩增体系ꎬ设置反应程序
２
０.０１、 ｜ ｌｏｇ ＦＣ ｜ ≥２ 为筛选条件ꎬ对比差异表达基 为 ９５ ℃ ３０ ｓꎻ９５ ℃ １５ ｓꎬ６０ ℃ ３０ ｓꎬ４０ 个循环ꎮ
２
因ꎮ 将筛选出的差异表达基因进行低温胁迫转录 设置 ３ 次重复ꎮ 使用 ２ －ΔΔＣｔ 方法进行相对表达量计
水平研究ꎮ 算ꎬ使用 ＤＰＳ 软 件 进 行 统 计 学 分 析ꎬ 通 过 Ｇｒａｐｈ
１.２.３ 差异基因 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 实验验证 基于转录组 Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ 软件进行绘图ꎮ 为方便后续分析ꎬ对 ７
的差异基因分析ꎬ选取 ７ 条注释明确的基因进行 条基因进行命名(表 ２)ꎮ
表 ２ 白芷 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 实验基因重命名对照
Ｔａｂｌｅ ２ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅ ｒｅｎａｍｉｎｇ ｆｏｒ ｑＲＴ￣ＰＣＲ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
序号 基因 ＩＤ 基因名称 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 引物 (５′→３′)
Ｎｏ. Ｇｅｎｅ ＩＤ Ｇｅｎｅ ｎａｍｅ Ｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ｑＲＴ￣ＰＣＲ (５′→３′)
１ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ３５２２１＿ｃ０＿ｇ２ ＡａＣＹＰ７０７Ａ２ Ｆ: ＡＴＧＣＴＧＴＧＧＧＡＣＴＧＧＧＡＡＴＧＧ
Ｒ: ＣＧＡＧＣＴＴＧＣＧＡＡＡＣＴＧＧＡＧＡＴＧ
２ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ２４８０＿ｃ１＿ｇ１ ＡａＣＡＴ Ｆ: ＡＧＧＧＴＣＧＴＣＡＣＡＧＴＧＧＴＣＡＡＧ
Ｒ: ＣＡＧＣＡＡＧＴＴＣＡＧＧＧＡＧＣＡＣＡＡＧ
３ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ９０７４８＿ｃ０＿ｇ１ ＡａＣｕ / ＺｎＳＯＤ Ｆ: ＡＧＣＡＡＣＧＡＣＡＴＴＣＣＣＣＡＡＡＴＣＡＣ
Ｒ: ＧＡＴＡＣＣＡＣＣＡＡＴＧＧＣＴＧＣＡＴＣＴＣ
４ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ１９０４＿ｃ０＿ｇ２ ＡａＰＹＬ１ Ｆ: ＡＧＣＡＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣＴＣ
Ｒ: ＧＡＴＣＡＣＣＴＴＴＣＴＣＣＡＴＣＣＣＡＡＧＣ
５ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ１２３４３＿ｃ０＿ｇ１ ＡａＰＹＬ２ Ｆ: ＴＧＴＴＧＣＴＣＣＧＣＣＧＴＧＡＴＣＣ
Ｒ: ＣＴＴＧＡＣＧＡＡＧＴＧＴＴＴＧＴＡＴＧＣＴＴＧＴＧ
６ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ３８７＿ｃ１＿ｇ１ ＡａＳＮＥ Ｆ: ＧＣＴＧＧＣＧＧＴＴＣＧＧＡＣＡＴＴＧ
Ｒ: ＴＴＴＣＴＣＣＡＣＣＣＡＡＣＡＴＴＡＡＣＣＴＣＴＣ
７ ＴＲＩＮＩＴＹ＿ＤＮ１１５７６９＿ｃ０＿ｇ１ ＡａＧＩＳ Ｆ: ＡＡＡＣＡＣＴＣＣＣＡＴＧＣＧＡＡＡＣＣＴＧ
Ｒ: ＴＴＧＣＴＣＣＡＣＣＡＣＣＴＣＡＣＣＴＡＣ
种子 ＸＬ 与 Ｘ 萌发率相差 １３.３３％ꎮ
２ 结果与分析 发芽势是指日发芽种子数最大值占供测样品
种子数的百分比ꎮ 实验结果(图 １:ｂ) 表明ꎬ相同处
２.１ 种子萌发结果 理条件下 ２ 个品种的种子发芽势存在显著性差异:
发芽势与发芽率是评价 种 子 萌 发 的 关 键 指 Ｘ 组种子的发芽势为 １８. ３３％ꎻＸＬ 组的发芽势为
标ꎬ发芽率越高ꎬ发芽势越强ꎬ种子活力也越高ꎮ ２４.６７％ꎻＣ 组的发芽势为 ２５.６７％ꎻ而 ＣＬ 组的发芽势
实验以根尖≥２ ｍｍ 为种子萌发标准ꎬ统计并计算 最低ꎬ为 ７.００％(图 １:ｂ)ꎮ
种子萌发率ꎮ 结果( 图 １: ａ) 显示ꎬ不同处理组种 结合发芽势与发芽率的统计结果可知ꎬＣ 组种
子的萌发率由高到低依次为 Ｘ 组(４６.３３％)、Ｃ 组 子萌发能力最强ꎬ种子活力最强ꎻ而 ＣＬ 组种子的
(４２.６６％)、ＸＬ 组(３３.００％)、ＣＬ 组(９.３３％)ꎮ 低 萌发能力最弱ꎬ种子活力最弱ꎮ 这表明温度对川
温胁迫下ꎬ２ 个白芷品种种子萌发率差异显著ꎬ川 白芷种子活力有显著性影响ꎬ并且低温环境下川
白芷种子 ＣＬ 与 Ｃ 萌发率相差 ３３.３３％ꎬ兴安白芷 白芷种子活力下降更为明显ꎮ
