Page 61 - 《广西植物》2025年第12期

１２ 期 梁云慧等: 基于 ＭＳＡＰ 技术对不同蒙古黄芪居群表观遗传多样性的研究 ２ ２ ０ ３

表 １ 不同蒙古黄芪居群样本信息
Ｔａｂｌｅ １ Ｓａｍｐｌｅ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ｍｅｍｂｒａｎａｃｅｕｓ ｖａｒ. ｍｏｎｇｈｏｌｉｃｕｓ

编号 居群采集地 经度 纬度 海拔 样本量
Ｎｏ. Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｓｉｔｅ Ｌｏｎｇｉｔｕｄｅ Ｌａｔｉｔｕｄｅ Ａｌｔｉｔｕｄｅ (ｍ) Ｓａｍｐｌｅ ｓｉｚｅ
ＮＭＧ 内蒙古自治区呼和浩特市武川县得胜沟村 １１１°１７′６０″ Ｅ ４１°１３′４８″ Ｎ １ ６７９.３６ ２０
Ｄｅｓｈｅｎｇｇｏｕ Ｖｉｌｌａｇｅꎬ Ｗｕｃｈｕａｎ Ｃｏｕｎｔｙꎬ Ｈｏｈｈｏｔ Ｃｉｔｙꎬ
Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｒｅｇｉｏｎ
ＺＺ 陕西省榆林市子洲县眠虎沟村 １０９°３１′１２″ Ｅ ３７°１２′００″ Ｎ １ ０５５.７３ ３１
Ｍｉａｎｈｕｇｏｕ Ｖｉｌｌａｇｅꎬ Ｚｉｚｈｏｕ Ｃｏｕｎｔｙꎬ
Ｙｕｌｉｎ Ｃｉｔｙꎬ Ｓｈａａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ
ＰＤＪ 山西省大同市浑源县破兑臼村 １１３°２５′４８″ Ｅ ３９°１９′１２″ Ｎ １ ８４３.８１ ２０
Ｐｏｄｕｉｊｉｕ Ｖｉｌｌａｇｅꎬ Ｈｕｎｙｕａｎ Ｃｏｕｎｔｙꎬ
Ｄａｔｏｎｇ Ｃｉｔｙꎬ Ｓｈａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ
ＱＳ 山西省大同市浑源县千哨村 １１３°１６′１２″ Ｅ ３９°１９′１２″ Ｎ １ ８３４.００ ３２
Ｑｉａｎｓｈａｏ Ｖｉｌｌａｇｅꎬ Ｈｕｎｙｕａｎ Ｃｏｕｎｔｙꎬ
Ｄａｔｏｎｇ Ｃｉｔｙꎬ Ｓｈａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ
ＬＤ 宁夏回族自治区固原市隆德县神林乡神林村 １０５°３１′１２″ Ｅ ３５°１９′４８″ Ｎ １ ７３９.５８ ４０
Ｓｈｅｎｌｉｎ Ｖｉｌｌａｇｅꎬ Ｓｈｅｎｌｉｎ Ｔｏｗｎｓｈｉｐꎬ Ｌｏｎｇｄｅ Ｃｏｕｎｔｙꎬ
Ｇｕｙｕａｎ Ｃｉｔｙꎬ Ｎｉｎｇｘｉａ Ｈｕｉ Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｒｅｇｉｏｎ
ＣＤ 河北省承德市围场满族蒙古族自治县白家店村 １１７°１６′４８″ Ｅ ４１°３２′６０″ Ｎ ９２０.３１ ３３
Ｂａｉｊｉａｄｉａｎ Ｖｉｌｌａｇｅꎬ Ｗｅｉｃｈａｎｇ Ｍａｎｃｈｕ ａｎｄ Ｍｏｎｇｏｌｉａｎ
Ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ Ｃｏｕｎｔｙꎬ Ｃｈｅｎｇｄｅ Ｃｉｔｙꎬ Ｈｅｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ
ＷＺ 山西省忻州市五寨县胡会村 １１１°２８′１２″ Ｅ ３８°５３′６０″ Ｎ １ ３７１.０９ ４０
Ｈｕｈｕｉ Ｖｉｌｌａｇｅꎬ Ｗｕｚｈａｉ Ｃｏｕｎｔｙꎬ Ｘｉｎｚｈｏｕ Ｃｉｔｙꎬ Ｓｈａｎｘｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ
ＬＸ 甘肃省定西市陇西县福星镇裴家湾村 １０４°１９′４８″ Ｅ ３５°４２′００″ Ｎ ２ １４２.７６ ４３
Ｐｅｉｊｉａｗａｎ Ｖｉｌｌａｇｅꎬ Ｆｕｘｉｎｇ Ｔｏｗｎꎬ Ｌｏｎｇｘｉ Ｃｏｕｎｔｙꎬ
Ｄｉｎｇｘｉ Ｃｉｔｙꎬ Ｇａｎｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ

应体系(王芳等ꎬ２０２３)ꎬ将 ４ 个 ＥｃｏＲ Ｉ 选扩引物和 酶切组合扩增得到的 ０ / １ 谱带分别代表了 ３ 种甲基
１６ 个 Ｈｐａ Ⅱ / Ｍｓｐ Ｉ 选扩引物进行组合ꎬ得到 ６４ 对 化模式ꎬ即 Ｉ 型[非甲基化(１ꎬ１)]、Ⅱ型[半甲基化

不同引物ꎮ 酶切、连接、预扩增和选择性扩增后ꎬ (１ꎬ０)]、Ⅲ型[ 全甲基化(０ꎬ１)] ( 张芳等ꎬ２０２２)ꎮ
用 １.５％琼脂糖凝胶进行电泳检测ꎬ筛选出条带清 利用 Ｒ ４.４.１ 软件的 ｍｓａｐ 包计算不同蒙古黄芪居群
晰、多态性良好、信号强的组合作为选择性扩增引 非甲基化和甲基化相对水平ꎮ

物ꎮ 对选择性扩增引物中的 ＥｃｏＲ Ｉ 序列进行 ５′￣ １.５.２ 居群表观遗传多样性与表观遗传结构等数据
ＦＡＭ 荧光标记ꎬ利用 ＡＢＩ ３７３０ｘｌ 毛细管电泳分析 分析 利用 Ｒ ４.４.１ 软件中 ｍｓａｐ 包ꎬ参照 Ｈｅｒｒｅｒａ 和

仪对选扩产物进行检测ꎬ得到毛细管电泳图谱ꎮ Ｂａｚａｇａ(２０１１)的评分标准ꎬ将扩增得到的所有位点
其中ꎬ横坐标代表样本甲基化位点的大小ꎬ纵坐标 按照 Ｈｐａ Ⅱ/ Ｍｓｐ Ｉ 甲基化不一致比例超过 ５％的位
代表该位点样本的浓度ꎮ 接头与预扩引物序列见 点定 义 为 甲 基 化 敏 感 位 点 ( ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ

表 ２ꎮ ｌｏｃｕｓꎬＭＳＬ)ꎬ未超过的位点定义为非甲基化位点
１.５ 数据分析 (ｎｏｎｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｌｏｃｕｓꎬＮＭＬ)ꎬ统计各引物组合和各
１.５.１ ＤＮＡ 甲基化模式和水平分析 本试验利用 居群 ＮＭＬ 和 ＭＳＬ 总数ꎬ多态性位点数、并分别计算

Ｇｅｎｅ Ｍａｒｋｅｒ ２.２.０ 软件对 ＥｃｏＲ Ｉ/ Ｈｐａ Ⅱ和 ＥｃｏＲ Ｉ/ 每对引物和每个居群的多态性位点百分比ꎮ 基于
Ｍｓｐ Ｉ 酶切组合扩增得到条带的强度信号和位置信 ＭＳＬ 和 ＮＭＬ 得到的 Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓ 多样性指数(Ｉ)评估
息进行扫描ꎮ 强度信号反映扩增条带在该位置的 表观 遗 传 多 样 性 和 遗 传 多 样 性ꎮ 同 时 通 过
可见度ꎬ基于此采用 ０ / １ 赋值法ꎬ将同一位置出现扩 ＧｅｎＡＬＥｘ ６.５ 软件结合 ＭＳＬ 表观遗传数据对蒙古黄
增条带标记为“１”ꎬ未出现扩增条带标记为“０”ꎬ绘 芪居群进行分子方差分析( ＡＭＯＶＡ)ꎬ检测蒙古黄
制二进制矩阵ꎮ 由于 ＥｃｏＲ Ｉ/ Ｈｐａ Ⅱ和 ＥｃｏＲ Ｉ/ Ｍｓｐ Ｉ 芪居群内和居群间的变异ꎬ计算居群间的表观遗传
两组限制性内切酶均可识别同一样本的 ５′￣ＣＣＧＧ￣ 变异系数(Φ )ꎮ 使用 ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ 软件以贝叶斯
ｓｔ
３′位点ꎬ但对甲基化修饰的敏感程度不同ꎬ因此上述 聚类模型来评估种群结构ꎮ 设置亚群数(Ｋ) 为 ２ ~