Page 8 - 《广西植物》2025年第12期
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２ １ ５ ０                                广  西  植  物                                         ４５ 卷
            对利 用 该 方 法 无 法 完 成 拼 接 的 个 别 样 品 使 用               取:将极细解剖针针尖制成弯钩状ꎬ挑取成熟的孢
            Ｇｅｎｅｉｏｕｓ 继续 组 装ꎮ 通 过 Ｇｅｎｅｉｏｕｓ Ｐｒｉｍｅ ｖ. ２０２０        子囊投入 ５０％次氯酸钠的载玻片溶液中ꎬ使材料
            软件 ( Ｋｅａｒｓｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１２) 对 质 控 得 到 的 “ Ｃｌｅａｎ      完全浸没ꎻ(２)漂白:由于次氯酸钠具有氧化性ꎬ静
            ｒｅａｄｓ”以及拼接获取的“ Ｃｏｎｔｉｇｓ” 数据进行手动组                    置 ２ ~ ３ ｍｉｎ 后可看到材料的颜色逐渐变深又变
            装ꎮ 借 助 软 件 中 的 “ Ｍａｐ ｔｏ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ” 功 能 和           浅ꎻ(３)清洗:为避免材料被过度褪色ꎬ用解剖针将
            “Ｆｉｎｄ Ｒｅｐｅａｔｓ”功能将“Ｃｌｅａｎ ｒｅａｄｓ”数据比对回贴               漂白后的孢子囊投入滴加蒸馏水的载玻片上ꎬ用

            到已经组装成的“ Ｃｏｎｔｉｇｓ” 上ꎬ并查找重复片段ꎮ                       滤纸吸取大部分蒸馏水ꎬ然后再次滴加 １ 滴蒸馏
            接着根据重复片段的位置ꎬ对延长后的“ Ｃｏｎｔｉｇｓ”                        水ꎻ(４)制片:盖上载玻片ꎬ并将多余的水分用吸水
            进行首尾连接ꎮ 使用 ＭＡＦＦＴ ｖ.７.４７１ 软件( Ｋａｔｏｈ                 纸从一侧吸干ꎬ制成临时装片ꎻ(５) 观察:可以看到
            ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００２ꎻＫａｔｏｈ ＆ Ｓｔａｎｄｌｅｙꎬ ２０１３) 对叶绿体基         制备好的玻片中孢子囊环带呈深色ꎬ孢子囊壁透
            因组进行比对ꎬ构建叶绿体基因组数据矩阵ꎮ 使                             明ꎻ(６)拍照:将制备的临时装片用显微图像分析

            用 Ｇｅｎｅｉｏｕｓ Ｐｒｉｍｅ 软件中的“ Ｍａｓｋ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｔｏｏｌ”        系统 (型号:Ｏｌｙｍｐｕｓ ＢＸ５１) 置于 ２０ 倍下进行观
            插件将叶绿体基因组数据矩阵中的 ｇａｐ 位点删除                           察拍照并统计分析ꎮ
            (删除标准为序列的 Ｍｉｓｓｉｎｇ ｄａｔａ≥８０％)ꎮ 使用最                   １.３.４ 叶片分裂情况及羽片形态  进一步细化凤
            大似然 法 ( ｍａｘｉｍｕｍ ｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄꎬ ＭＬ) 和 贝 叶 斯 法          了蕨属网脉组的形态学研究ꎬ针对物种界定更为
            (Ｂａｙｅｓｉａｎ ｉｎｆｅｒｅｎｃｅꎬ ＢＩ)构建系统发育树ꎮ                   混乱的具有 ２ ~ ３ 行连续网眼的类群ꎬ选取形态性
            １.３ 形态学研究                                          状保存良好的样品进行以下研究:(１) 对同一居群
                 在凤了蕨属以往的分类学研究中ꎬ采用的形态                          中不同个体的叶片分裂情况进行观测ꎬ并比对同
            性状主要为叶脉联结方式、水囊位置和羽片形状等                             一类群不同居群以及不同类群之间叶片分裂回数
            (邢公侠ꎬ１９８１ꎻ秦仁昌和邢公侠ꎬ１９９０ꎻＺｈａｏ ｅｔ ａｌ.ꎬ                的差异ꎻ(２) 对大量样品的羽片进行观测ꎬ总结其
            ２０１８)ꎮ 此外ꎬＷａｎｇ 等 (２０２０) 曾对凤了蕨属全缘                   形态特征及变异情况ꎮ
            系(ｓｅｒ. Ｆｒａｘｉｎｅａｅ)的孢子囊环带细胞数进行了统计
            分析ꎬ结果表明该性状对该属物种划分具有极其重                             ２  结果与分析
            要的分类学价值ꎮ 因此ꎬ本研究从叶脉联结状况、
            水囊位置、孢子囊环带细胞数以及叶片分裂回数和                             ２.１ 分子系统学研究
            羽片形态等性状入手ꎬ对凤了蕨属网脉组所涉及的                                 基于叶绿体基因组序列分别使用最大似然法
            类群展开深入的形态学研究ꎮ                                      和贝叶斯法构建系统发育树ꎬ其拓扑结构完全一
            １.３.１ 叶脉  在此前对凤了蕨属网脉组的研究中ꎬ                         致(图 １)ꎮ 在系统发育树中ꎬ凤了蕨属网脉组各
            蕨类分类学家们往往更注重网眼数量这一性状ꎬ                              类群并没有聚为一个单系:安康凤了蕨和南岳凤
            而忽略了种间网眼形态的差异以及网眼形成的联                              了蕨的各个居群镶嵌于日本凤了蕨中ꎬ三者共同
            结方式ꎮ 因此ꎬ本研究对网眼的长和宽分别进行                             构成一个 单 系 且 得 到 强 烈 支 持 ( ＭＬ￣ＢＳ ＝ １００％、
            测量并统计分析ꎬ并对网脉组各物种的叶脉网结                              ＢＩ￣ＰＰ ＝ １.０)ꎻＣｏｎｉｏｇｒａｍｍｅ ｇｒａｃｉｌｉｓ 的 ３ 个居群独立

            方式进行总结ꎮ                                            为一个单系ꎬ并与由上述三者所形成的分支共同
            １.３.２ 水囊  水囊是蕨类叶脉末端膨大的部分ꎮ                          构成一个更大的分支ꎮ 它们与黑轴凤了蕨所在的
            在凤了蕨属中ꎬ水囊形态及其到羽片边缘的距离                              分支互为姐妹群ꎬ支持率高达 ＭＬ￣ＢＳ ＝ １００％、ＢＩ￣

            可以作为区分物种的性状( Ｄｉｘｉｔ ＆ Ｄａｓꎬ １９７９)ꎮ                   ＰＰ ＝ １.０ꎮ 其他几个网脉组的成员并没有与日本
            本研究对不同类群羽片上水囊的位置进行拍照比                              凤了蕨聚在一起ꎬ而是分散于其他分支中:疏网凤

            对ꎬ获得足量数据并进行统计分析ꎮ                                   了蕨(Ｃ. ｆａｕｒｉｅｉ)和巴山凤了蕨所在的分支与乳头
            １.３.３ 孢子囊环带  孢子囊形态在区分难以通过                          凤了蕨(Ｃ. ｒｏｓｔｈｏｒｎｉｉ)互为姐妹群ꎬ支持率高达 ＭＬ￣
            其他形态区分的类群上发挥着重要作用ꎬ是蕨类                              ＢＳ ＝ １００％、ＢＩ￣ＰＰ ＝ １.０ꎻ单网凤了蕨与红杆凤了蕨
            植物分类的重要指标( 福斯特和小吉福德ꎬ１９８３ꎻ                          (Ｃ. ｒｕｂｅｓｃｅｎｓ) 互为姐妹群ꎬ支持率高达 ＭＬ￣ＢＳ ＝
            周喜乐等ꎬ２０１７ꎻＷａｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２０)ꎮ 本研究对孢                １００％、ＢＩ￣ＰＰ ＝ １.０ꎻ紫柄凤了蕨和井冈山凤了蕨则
            子囊环带细胞数进行观察统计ꎬ步骤如下ꎮ (１) 挑                          是和普通凤了蕨等类群有更近的亲缘关系ꎮ
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