Page 128 - 《广西植物》2025年第2期

３ ３ ０ 广 西 植 物 ４５ 卷
１.３ 试剂 μＬꎮ 于 ５％ ＣＯ ꎬ３７ ℃ 培养箱中培养 ２４ ｈ 后ꎬ分别
２
细胞培养级二甲基亚砜( ＤＭＳＯꎬ 北京索莱宝 加入各浓度受试药物( 化合物 ６、７、８、１２) 和阳性
科技有限公司)ꎻＬ￣１５ 培养基( 北京索莱宝科技有 对照药奥沙利铂ꎬ使其终浓度分别为 ２０、４、０.８、
限公司)ꎻ１６４０ 培养基、青链霉素混合液、ＰＢＳ( 北 ０.１６、０.０３４ μｍｏｌＬ ꎬ每个样品均设 ３ 个复孔ꎬ阴
￣１
京索莱宝科技有限公司)ꎻ胎牛血清( 上海达特希 性对照为等体积培养基及相应的 ＤＭＳＯ 浓度为溶
尔生物科技有限公司)ꎻＣＣＫ８ 检测液(东仁化学科 媒对照ꎬ以消除 ＤＭＳＯ 对细胞生长的影响ꎮ 于 ５％
技有限公司)ꎻ胰酶( 赛默飞世尔科技公司)ꎻ氘代 ＣＯ ꎬ３７ ℃ 培养箱中孵育 ７２ ｈ 后ꎬ每孔加入 １０ μＬ
２
试剂 ＤＭＳＯ￣ｄ 、ＣＤ ＯＤ(上海阿达玛斯试剂有限公 ＣＣＫ８ 溶液ꎮ 孵育(３７℃ ꎬ５％ ＣＯ ) ４０ ~ ６０ ｍｉｎ 后
６ ３ ２
司)ꎻ乙腈、甲醇为色谱纯(广东光华科技股份有限 用酶标仪检测 ４５０ ｎｍ 下的吸光度值( ＯＤ)ꎮ 将测
公司)ꎻ人结直肠癌细胞 ＳＷ６２０、 ＨＴ￣２９ 及人正常 得的 ＯＤ 值计算抑制率ꎬ并用 Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ８ 软
结肠上皮细胞 ＮＣＭ４６０ 均购自中国科学院上海生 件拟合化合物的 ＩＣ 值ꎮ
５０
命科学研究院细胞资源中心ꎻ其余化学试剂均为
２ 结果与分析
分析纯ꎮ
１.４ 实验方法
２.１ 结构鉴定
１.４.１ 提取分离 鬼点灯地上部分 ２.５ ｋｇꎬ切碎后ꎬ
经甲醇冷浸提取 ３ 次ꎬ每次 ７ ｄꎬ滤过ꎬ提取液减压 利用 ２.１ 方法对鬼点灯乙酸乙酯部位进行分
浓缩至无醇味得总浸膏(２００.３ ｇ)ꎮ 总浸膏加水混 离纯化ꎬ共获得 １２ 个化合物ꎬ经质谱和核磁等波
悬ꎬ依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取ꎬ回收溶 谱分析进行结构鉴定ꎬ化合物 １－１２ 的化学结构如
剂ꎬ得到各萃取部位ꎬ其中石油醚萃取物(９０.３ ｇ)、 图 １ 所示ꎮ
乙酸乙酯 萃 取 物 ( １５. ０ ｇ)、正 丁 醇 萃 取 物 ( ２３. ５ 化合物 １ 黄色块状晶体ꎬＥＳＩ￣ＭＳ ｍ / ｚ:１１７.０
＋
ｇ)ꎮ 取乙酸乙酯部位(７.５ ｇ) 用反相 ＯＤＳ 中压色 [Ｍ＋Ｈ] ( Ｃ Ｈ Ｏ ꎬ 理 论 值:１１７. ０８)ꎬ 分 子 式 为
５
４
４
１
谱进行分离ꎬ以甲醇－水(１０％→１００％) 梯度洗脱ꎬ Ｃ Ｈ Ｏ ꎮ Ｈ￣ＮＭＲ ( ５００ ＭＨｚꎬ ＣＤ ＯＤ￣ｄ ) δ: ６. ７６
４
３
４
４
４
通过薄层色谱检测ꎬ合并得到 ２０ 个流分ꎮ Ｆｒ. Ｆ 重 (２ＨꎬｓꎬＨ￣２ꎬ３)ꎻ Ｃ￣ＮＭＲ(１２６ ＭＨｚꎬＣＤ ＯＤ￣ｄ ) δ:
１３
３ ４
结晶后制得化合物 ＢＺＣ￣２(１ꎬ ５０ ｍｇ)ꎻＦｒ. Ｈ 经反 １６６.６８( Ｃ￣１ꎬ４)ꎬ１３３.７７( Ｃ￣２ꎬ３)ꎮ 以上数据与田
相 ＯＤＳ 中压色谱、高压制备液相色谱得到化合物 宇洁等(２０１３)报道的一致ꎬ故鉴定化合物 １ 为富
ＢＺＣ￣３(２ꎬ １６.２ ｍｇ)、ＢＺＣ￣４(３ꎬ ７.４ ｍｇ)ꎻＦｒ. Ｊ 经反 马酸ꎮ
相 ＯＤＳ 中压色谱、高压制备液相色谱得到化合物 化 合 物 ２ 白 色 粉 末ꎬ ＥＳＩ￣ＭＳ ｍ / ｚ: １５３. ０
ＢＺＣ￣５(４ꎬ ６.１ ｍｇ)、ＢＺＣ￣６(５ꎬ １４ ｍｇ)ꎻＦｒ. Ｌ 经反 [Ｍ－Ｈ] ( Ｃ Ｈ Ｏ ꎬ 理 论 值:１５３. ０２)ꎬ 分 子 式 为
－
４
５
７
相 ＯＤＳ 中压色谱、高压制备液相色谱得到化合物 Ｃ Ｈ Ｏ ꎮ Ｈ￣ＮＭＲ ( ５００ ＭＨｚꎬ ＤＭＳＯ￣ｄ ) δ: ７. ３１
１
７ ６ ４ ６
ＢＺＣ￣９(８ꎬ １２ ｍｇ)、 ＢＺＣ￣１０ ( ９ꎬ ７. ０ ｍｇ)、 ＢＺＣ￣１１ (１ＨꎬｓꎬＨ￣２)ꎬ７.２６(１ＨꎬｄꎬＪ ＝ ８.２ ＨｚꎬＨ￣６)ꎬ６.７５
１３
(１０ꎬ ３.８ ｍｇ)、ＢＺＣ￣１２(１１ꎬ １.０ ｍｇ)、ＢＺＣ￣１３(１２ꎬ (１Ｈꎬｄꎬ Ｊ ＝ ８. ２ Ｈｚꎬ Ｈ￣５)ꎻ Ｃ￣ＮＭＲ ( １２５ ＭＨｚꎬ
３.０ ｍｇ)ꎻＦｒ. Ｍ 经反相 ＯＤＳ 中压色谱、高压制备液 ＤＭＳＯ￣ｄ ) δ: １６７. ５９ ( １￣ＣＯＯＨ)ꎬ １５０. １５ ( Ｃ￣３)ꎬ
６
相色谱得到化合物 ＢＺＣ￣７(６ꎬ １１ ｍｇ)、ＢＺＣ￣８(７ꎬ １４５.０３(Ｃ￣４)ꎬ１２２.０９( Ｃ￣１)ꎬ１２１.９３( Ｃ￣６)ꎬ１１６.７３
３０ ｍｇ)ꎮ (Ｃ￣２)ꎬ １１５. ３４ ( Ｃ￣５)ꎮ 以 上 数 据 与 Ｒａｍａｄａｎ 等
１.４.２ 体外抗结直肠癌活性检测 釆用 ＣＣＫ８ 法 (２００９)报道的一致ꎬ故鉴定化合物 ２ 为原儿茶酸ꎮ
(Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０２２)检测细胞增殖情况ꎮ 样品用 化 合 物 ３ 白 色 粉 末ꎬ ＥＳＩ￣ＭＳ ｍ / ｚ: １３１. ０
＋
细胞培养级 ＤＭＳＯ 溶解成 １０ ｍｍｏｌＬ 的母液ꎬ低 [Ｍ＋Ｈ] (Ｃ Ｈ Ｏ ꎬ 理 论 值:１３１. ０３)ꎬ 分 子 式 为
￣１
７
５
４
温保存ꎬＤＭＳＯ 在最终体系中的浓度控制在不影响 Ｃ Ｈ Ｏ ꎮ Ｈ￣ＮＭＲ ( ５００ ＭＨｚꎬ ＤＭＳＯ￣ｄ ) δ: ６. ６３ ~
１
５ ６ ４ ６
１３
检测活性的范围之内ꎬ倍比稀释为 ０.１ ~ ２０ μｍｏｌ ６.７４(２ＨꎬｍꎬＨ￣２ꎬ３)ꎬ３.７３(３ＨꎬｓꎬＨ￣１′)ꎻ Ｃ￣ＮＭＲ
Ｌ 的工作浓度ꎮ 取对数生长期的上述癌细胞ꎬ用 (１２５ ＭＨｚꎬＤＭＳＯ￣ｄ )δ:１６５.９( Ｃ￣１)ꎬ１６５.２( Ｃ￣４)ꎬ
￣１
６
含 １０％ 小牛血清的 Ｌ￣１５ ( ＳＷ６２０) 或 ＲＰＭＩ￣１６４０ １３５.４( Ｃ￣３)ꎬ１３１.４( Ｃ￣２)ꎬ５２.２( Ｃ￣１′)ꎮ 以上数据
(ＨＴ￣２９、ＮＣＭ４６０)培养液ꎬ制成单细胞悬液每毫升 与 Ｒａｍａｄａｎ 等(２００９) 报道的一致ꎬ故鉴定化合物
６
１×１０ 个ꎬ将该悬液加到 ９６ 孔板中ꎬ每孔加入 １００ ３ 为富马酸单甲酯ꎮ