Page 79 - 《广西植物》2025年第4期
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４ 期 覃先玉等: 增补无性系对湿地松种子园遗传多样性的影响 ６ ９ ３
传多样性略有提升ꎮ 提升幅度最大的是群体等位
２ 结果与分析 基因数ꎬ而 Ｎ 、Ｉ 和 Ｈ 提升幅度均不超过 ５％ꎮ 这
ｏ
ｅ
说明通过增补无性系可以为种子园引入一部分低
２.１ 多态性引物筛选 频等位基因ꎬ但对整体的基因频率改变不大ꎬ对基
采用 ８ 个湿地松样本进行引物初步筛选ꎮ １３６ 因型的复杂度提升有限ꎮ
对引物中有 ９８ 对引物成功扩增出目的片段ꎬ有效 ２.３ 湿地松种子园指纹图谱构建
扩增率为 ７２.０６％ꎮ 再用 １８ 个样本进行复筛ꎬ最终 ＤＮＡ 指纹图谱的构建应用尽可能少的引物区
筛选出 １６ 对条带清晰、重复性好、多态性高的引 分尽量多的种质资源ꎬ用以达到提高检测效率、降
物(表 ３)ꎬ多态性比率为 １６.３３％ꎮ 用 １６ 对引物对 低成本的目的(孙泽硕等ꎬ２０２３)ꎮ 分析结果显示ꎬ
５０ 个湿地松无性系 ＤＮＡ 进行多态性检测( 图 １)ꎬ 通 过 ＰＱ１１１、 ＰＱ１２８、 ＰＱ５９３、 ＰＱ１２５、 ＰＱ１９、 ＰＱ１、
并用 Ｐｏｐｇｅｎｅ １.３２ 软件进行分析ꎮ ＰＱ３１９、ＰＱ４、ＰＱ９０、ＰＱ６０６ 和 ＰＱ４２９ 共 １１ 个 ＳＳＲ
多态性分析结果( 表 ４) 显示ꎬ增补前 １６ 个位 标记即可区分该园中全部的无性系ꎬ依次用字母
点的观测等位基因数( Ｎ ) 为 ２.００ ~ ５.００ꎬ平均值 Ａ－Ｌ来表示(因字母 Ｉ 和数字 １ 相似而排除)ꎬ记录
ｏ
为 ２.６３ꎬＰＩＣ 值为 ０.１０ ~ ０.５９ꎬ最大的是 ＰＱ１１１ꎬ最 每份湿地松无性系在 １１ 对 ＳＳＲ 引物中扩增出来
小的是 ＰＱ１、ＰＱ２６ 和 ＰＱ５８５ꎬ均为 ０.１０ꎬ其中 ２ 个 的等位基因碱基长度(ｂｐ)ꎬ编辑 ５０ 份湿地松无性
位点的 ＰＩＣ > ０.５０ꎬ具有高度多态性ꎬ７ 个位点的 系的指纹图谱代码(表 ６)ꎬ如 １ 号湿地松无性系的
ＰＩＣ> ０.２５ꎬ 具 有 中 度 多 态 性ꎬ ７ 个 位 点 的 ＰＩＣ < 指 纹 图 谱 代 码 Ａ１１２ / １１２Ｂ８０ / ９０Ｃ４３５ / ４３５Ｄ０００ /
０.２５ꎬ具有 低 度 多 态ꎻ增 补 后 １６ 个 位 点 的 Ｎ 为 ０００Ｅ２５５ / ２６７Ｆ２８６ / ２８６Ｇ３７４ / ３８６Ｈ２０４ / ２０４Ｊ２５７ /
ｏ
２.００ ~ ５.００ꎬ平均值为 ３.００ꎬＰＩＣ 值为 ０.０６ ~ ０.５８ꎬ ２５７Ｋ４０７ / ４０７Ｌ３７０ / ３７８ꎬ其中 Ａ１１２ / １１２ 代表引物
最大的是 ＰＱ１２８ 和 ＰＱ５９３ꎬ均为 ０.５８ꎬ最小的是 ＰＱ１１１ 的等位基因为 ９１ ｂｐ / ９１ ｂｐꎬＤ０００ / ０００ 代表
ＰＱ５８５ 且 引 物 ＰＱ４、 ＰＱ２６、 ＰＱ３１、 ＰＱ９０、 ＰＱ１１１、 引物 ＰＱ１２５ 在 １ 号湿地松无性系上没有扩增出
ＰＱ３１９ 和 ＰＱ６０６ 共 ８ 个引物随着无性系的增补而 位点ꎮ
有所降低ꎬ其中 ２ 个位点的 ＰＩＣ>０.５０ꎬ具有高度多 ２.４ 湿地松种子园遗传聚类分析
态性ꎬ６ 个位点的 ＰＩＣ>０.２５ꎬ具有中度多态性ꎬ８ 个 采用 Ｐｏｐｇｅｎｅ １.３２ 软件估算种子园无性系间
位点的 ＰＩＣ≤０.２５ꎬ具有低度多态性ꎮ 综上所述ꎬ 的 Ｎｅｉｓ 遗传距离( ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅꎬ ＧＤ)ꎮ 结果表
无论是增补前还是增补后的种子园ꎬ１６ 个位点的 明ꎬ原有无性系的 ＧＤ 范围为０.０１８ ~ ０.６００ꎬ两两无
多态性均不高且无性系增补降低了 ８ 个位点的多 性系组合间 ＧＤ 大于平均值( ＧＤ ＝ ０.２６０) 的占比
态性ꎮ 为 ８１.７０％ꎬ无性系 ５ 和 ７ 之间的 ＧＤ 最大ꎻ无性系
２.２ 湿地松种子园遗传多样性分析 １０ 和 １８ 之间的 ＧＤ 最小ꎻ增补无性系的 ＧＤ 范围
利用 Ｐｏｐｇｅｎｅ １.３２ 软件对种子园无性系扩充 为 ０.０５５ ~ ０.６７０ꎬ两两无性系组合间 ＧＤ 大于平均
前后的遗传多样性分析ꎮ 由表 ５ 可知ꎬ１６ 对引物 值(ＧＤ ＝ ０.２５１)的占比为 ４４.７６％ꎬ无性系 ４３ 和 ４９
在改建前的 １８ 个无性系中共检测出 ４２ 个等位基 之间的 ＧＤ 最大ꎬ无性系 ２９ 和 ３３ 之间的 ＧＤ 最
因ꎬ平均每对引物扩增出 ２.６２ 个等位基因ꎻ有效等 小ꎻ增 补 无 性 系 与 原 有 无 性 系 间 的 ＧＤ 范 围 为
位基因数(Ｎ )范围为 １.１２ ~ ２.７９ꎬ平均值为 １.６３ꎻ ０.０１８ ~ ０.６７０ꎬ增补无性系与原有无性系两两组合
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Ｓｈａｎｎｏｎ 指 数 ( Ｉ) 范 围 为 ０. ２２ ~ １. ２３ꎬ 平 均 值 为 间 ＧＤ 大于平均值(ＧＤ ＝ ０.２５１) 的占比为４５.６６％ꎬ
０.５７ꎻ观测杂合度( Ｈ ) 范围为 ０.２８ ~ ０.８９ꎬ平均值 无性系 ５ 和 ３２ 之间的 ＧＤ 最大ꎬ无性系 １７ 和 ３３
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为 ０.６７ꎮ 在无性系扩充至 ５０ 个后ꎬ共检测出 ４８ 之间的 ＧＤ 最小ꎮ
个等位基因ꎬ平均每对引物扩增出 ３.００ 个等位基 用 ＮＴＳＹＳ ２. １０ 软 件 根 据 ５０ 个 无 性 系 间 的
因ꎬ比扩充前提高了 １４.０７％ꎻＮ 平均值为 １.６５ꎬ比 Ｎｅｉｓ ＧＤ 进行聚类分析( 图 ２)ꎬ可在阈值为 ０.２５１
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扩充前提高了 １.２３％ꎻＨ 范围为 ０.２８ ~ ０.９４ꎬ平均 处分为 ７ 小类育种组( ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｇｒｏｕｐꎬ分别将其命
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值为 ０.６９ꎬ比扩充前提高了 ２.９９％ꎻＩ 范围为 ０.１４ ~ 为 Ｇ１－Ｇ７ꎬ表 ７)ꎬ从整体来看ꎬ各地区的无性系并
１.１３ꎬ平均值为 ０.５９ꎬ比扩充前提高了 ３.５１％ꎮ 不能有规律聚类在一起且并不能按地区单独聚
综上所述ꎬ湿地松种子园在增补无性系后遗 类ꎮ 在此基础上ꎬ对 ７ 小类育种组进行聚类分析ꎬ
