Page 102 - 《广西植物》2025年第5期
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９ ０ ６ 广 西 植 物 ４５ 卷
１.２.５ 菠萝蜜 ＷＲＫＹ 基因家族在低温胁迫下的表达 (Ｓｔｕｄｅｎｔｓ ｔ 检验)ꎬ并使用 ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ９ 进行
模式分析 从杜英俊等(２０２３)已发表的低温胁迫 图形化显示ꎮ
下不同品种菠萝蜜转录组数据中ꎬ提取 ＡｈＷＲＫＹ
基因家族成员在 ＧＸ 菠萝蜜和 ＴＨＡ 菠萝蜜中的 ２ 结果与分析
ＦＰＫＭ 值ꎬ并利用 ＴＢｔｏｏｌｓ 软件的 ＨｅａｔＭａｐ 功能绘
制热图ꎮ ２.１ 菠萝蜜 ＷＲＫＹ 基因家族的注释和理化性质分析
使用 ＨｉＳｃｒｉｐｔ Ｑ ＲＴ ＳｕｐｅｒＭｉｘ ｆｏｒ ｑＰＣＲ( ＋ｇＤＮＡ 利用拟南芥 ＷＲＫＹ 蛋白 ＰＥＰ(ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｃｏｄｉｎｇ
ｗｉｐｅｒ)试剂盒 ( 诺维赞ꎬ南京) 提取 ＧＸ 菠萝蜜和 ｓｅｑｕｅｎｃｅ)序列与菠萝蜜基因组进行 ＢＬＡＳＴ 获得
ＴＨＡ 菠萝蜜的总 ＲＮＡꎬ使 用 ＣｈａｍＱ ＳＹＢＲ ｑＰＣＲ 候选基因序列ꎬ并利用 Ｐｆａｍ 在线网站对 ＷＲＫＹ 基
Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ 试剂盒( 诺维赞ꎬ南京) 进行 ｃＤＮＡ 合 因家族保守结构域进行鉴定( ＰＦ０３１０６)ꎮ 在菠萝
成ꎬ 将 其 稀 释 １０ 倍 后 作 为 扩 增 模 板ꎬ 于 蜜中注释到 ６１ 个 ＷＲＫＹ 基因家族成员( 表 ２)ꎬ根
ＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ５ Ｒｅａｌ￣Ｔｉｍｅ ＰＣＲ 仪器中进行 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 据其在染色体上的位置分布情况ꎬ将菠萝蜜 ＷＲＫＹ
验证(表 １)ꎬ以 Ｔｕｂｕｌｉｎ 为低温胁迫下不同品种菠 基因家族成员命名为 ＡｈＷＲＫＹ１－６１ꎮ 其蛋白理化
萝蜜 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 的内参基因ꎬ反应程序:９５ ℃ 预变 性质分析显示ꎬ菠萝蜜 ＷＲＫＹ 基因家族成员氨基
性 ３０ ｓꎬ９５ ℃ 变性 １０ ｓꎬ６０ ℃ 退火 ３０ ｓꎬ７２ ℃ 延伸 酸数 目 为 ２２７ ~ ７６３ ａａꎬ 分 子 质 量 为 ２５ ５８１.１３ ~
－ΔΔＣｔ 法 ８２ ４３８.０６ Ｄａꎬ理论等电点为 ５.０８ ~ ９.８０ꎬ不稳定系
３０ ｓꎬ共 ５０ 个循环ꎬ重复 ３ 次ꎮ 结果采用 ２
计算 ＡｈＷＲＫＹ 基 因 的 相 对 表 达 量ꎮ 采 用 Ｄｕｎｃａｎ 数均在 ４０ 以 上ꎬ 亚 细 胞 定 位 预 测 显 示ꎬ 菠 萝 蜜
检验的单向方差分析来确定显著性差异ꎮ 将数据 ＷＲＫＹ 基因家族成员都定位在细胞核中ꎬ这一结果
导入 ＩＢＭ ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ １６. ０ 进 行 统 计 学 分 析 可能和 ＷＲＫＹ 基因家族成员的功能相关ꎮ
表 １ ｑＲＴ￣ＰＣＲ 引物序列
Ｔａｂｌｅ １ ｑＲＴ￣ＰＣＲ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ
引物 正向引物序列 (５′→３′) 反向引物序列 (５′→３′) 产物大小
Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′→３′) Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｑｕｅｎｃｅ (５′→３′) Ｐｒｏｄｕｃｔ ｓｉｚｅ (ｂｐ)
ＡｈＷＲＫＹ１ ＧＣＣＧＣＴＴＴＣＣＴＣＧＡＣＴＡＣ ＣＣＴＣＴＧＴＴＴＣＣＴＴＴＴＣＴＴＧＧＴ １２４
ＡｈＷＲＫＹ２ ＡＣＧＧＡＣＡＧＡＡＡＣＣＣＡＴＣＡ ＴＴＣＧＴＡＧＧＴＣＡＣＣＡＣＡＡＧＣ １３４
ＡｈＷＲＫＹ３ ＣＧＡＧＧＴＴＧＡＡＧＡＧＧＧＴＡＧＴＴ ＴＧＡＴＧＧＧＴＴＴＣＴＧＴＣＣＧＴ １０２
ＡｈＷＲＫＹ６ ＧＡＧＡＡＡＧＴＧＡＡＴＴＧＣＧＡＧＡＴＡＧ ＡＴＧＧＴＴＴＧＡＧＧＴＣＣＡＧＴＧＴＴ １５１
ＡｈＷＲＫＹ１０ ＴＧＧＡＡＡＴＡＡＴＴＣＧＧＡＧＧＡＴＡＡＣ ＴＧＴＧＡＡＡＣＴＧＡＣＴＡＡＧＣＡＡＡＣＣ １２２
ＡｈＷＲＫＹ１１ ＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＡＡＡＣＣＣＴＡＡ ＴＡＣＴＧＡＣＴＣＧＣＣＧＡＣＡＡＣＴ ２４２
ＡｈＷＲＫＹ１２ ＧＡＡＡＡＣＧＡＡＡＧＡＴＴＡＡＡＧＧＴＧＣ ＴＣＣＡＡＧＧＣＴＧＡＧＧＧＡＡＡＣ １８６
ＡｈＷＲＫＹ１８ ＡＧＣＡＴＴＡＴＴＣＣＣＣＡＴＣＡＴＣＡ ＴＣＣＣＣＡＡＧＡＡＡＧＴＧＴＣＧＣ １９６
ＡｈＷＲＫＹ３１ ＣＡＴＴＡＴＴＣＣＣＣＡＴＣＡＧＣＡＡ ＡＧＴＡＡＡＧＣＣＡＴＣＴＴＣＡＣＣＣＴ １６０
ＡｈＷＲＫＹ３７ ＣＣＡＧＣＧＧＴＴＧＡＡＡＣＡＧＧＡ ＣＣＡＧＡＧＧＣＧＡＧＡＣＧＡＡＧＡ ２２８
ＡｈＷＲＫＹ３９ ＴＡＡＧＡＡＡＣＣＡＡＧＧＧＡＡＧＡＡＣＣ ＡＡＡＣＧＡＧＣＡＴＴＴＧＡＡＧＴＡＡＧＣ １６９
ＡｈＷＲＫＹ４７ ＧＡＧＡＣＧＡＡＧＡＡＧＡＣＧＡＡＡＡＴＣ ＴＣＣＣＧＴＧＡＣＡＧＡＣＧＡＣＡＡＡ １０８
ＡｈＷＲＫＹ５４ ＴＧＧＣＡＡＴＣＣＣＣＡＡＡＴＡＡＴ ＴＣＣＡＧＡＡＡＴＧＧＣＡＧＣＡＧＡ １３３
ＡｈＷＲＫＹ５７ ＡＧＡＡＡＧＡＧＴＣＡＧＧＣＡＡＡＧＡＡＧ ＣＣＡＡＧＣＣＣＡＡＡＧＡＴＣＡＧＡ ９９
２.２ 菠萝蜜 ＷＲＫＹ 基因家族系统进化分析 关系ꎬ对 ６１ 个菠萝蜜 ＡｈＷＲＫＹ 蛋白、７２ 个拟南芥
为探究菠萝蜜 ＷＲＫＹ 基因家族成员的系统进化 ＡｔＷＲＫＹ 蛋白和 ９３ 个水稻 ＯｓＷＲＫＹ 蛋白的系统进
