Page 129 - 《广西植物》2025年第5期
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５ 期 黄以书等: 太子参 Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ 转录因子鉴定及表达分析 ９ ３ ３
产物环肽 Ｂ 的生物合成尚不清楚ꎮ 化科技股份有限公司ꎻ太子参环肽 Ｂ 对照品( 批号
因此ꎬ本研究以太子参为试验材料ꎬ基于前期 ＡＦＣＢ１７０５ꎬ纯度>９８％)购自成都埃法生物科技有
建立的太子参全长转录组数据库ꎬ拟对太子参中 限公司ꎮ
的 Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ 转录因子成员进行鉴定ꎬ并对其蛋 １.４ 研究方法
白理化性质、进化关系、保守基序、组织表达等特 １.４.１ 太子参 Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ 家族鉴定及蛋白序列信
征进行分析ꎮ 基于基因共表达分析的方法ꎬ通过 息分析 在 Ｐｆａｍ( ｈｔｔｐ: / / ｐｆａｍ.ｘｆａｍ.ｏｒｇ) 网站下载
太子参不同组织中 Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ 基因的表达量与环 ＭＹＢ 转录因子的隐马尔可夫模型( ＰＦ００２４９)ꎬ使
肽 Ｂ 含量、ｐｒｅＰｈＨＢ 基因表达量的相关性分析来筛 用 ＨＩＭＭＥＲ ｖ３.０ 软件中的 ｈｍｍｓｅａｒｃｈ 程序对太子
选与太子参中环肽 Ｂ 生物合成调控相关的候选 参的蛋白序列进行搜索ꎮ 以拟南芥的 ＭＹＢ 蛋白
Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ 转录因子ꎬ并通过 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 分析其在 序列作为种子文件ꎬ利用 ＢＬＡＳＴ ｖ２.２.８ 中的 ｂｌａｓｔｐ
ＡＢＡ 处理后的表达情况ꎬ为后续解析其调控太子 进行序列比对ꎮ 综合 ｈｍｍｓｅａｒｃｈ 与 ｂｌａｓｔｐ 的鉴定
参中环肽 Ｂ 生物合成的分子机制提供基础ꎮ 结果作为太子参 ＭＹＢ 基因家族的侯选基因ꎬ并使
用 ＳＭＡＲＴ ( ｈｔｔｐ: / / ｓｍａｒｔ. ｅｍｂｌ￣ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ. ｄｅ / ) 和
１ 材料与方法 ＮＣＢＩ￣ＣＤＤ ( ｈｔｔｐｓ: / / ｗｗｗ. ｎｃｂｉ. ｎｌｍ. ｎｉｈ. ｇｏｖ /
Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ / ｂｗｒｐｓｂ / ｂｗｒｐｓｂ. ｃｇｉ) 数据库对 候 选 基 因
１.１ 植物材料 进行 ＭＹＢ 保守结构域分析ꎬ根据 ＭＹＢ 转录因子
太子参品种‘施太 １ 号’(ＳＴ１)采自贵州省施秉 所含 ＭＹＢ 结构域数目筛选获得 ＰｈＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 转
县太子参种植基地ꎬ于贵州中医药大学人工气候室 录因子ꎬ并对其进一步分析ꎮ
育苗ꎮ 收集 ＳＴ１ 品种的不同组织———茎、叶、块根的 通过 ＴＢｔｏｏｌｓ ｖ１. １２０ 软 件 中 Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐａｒａｍｔｅｒ
韧皮部及木质部ꎬ 一部分于液氮中速冻ꎬ 用于总 Ｃａｌｃ(ＰｒｏｔＰａｒａｍ￣ｂａｓｅｄ)对 １５ 个 ＰｈＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 蛋白
ＲＮＡ 的提取ꎬ另一部分用于环肽 Ｂ 含量测定ꎮ 进行基 本 理 化 性 质 预 测ꎻ 利 用 在 线 网 站 Ｂｏｌｏｇｎａ
激素处理实验材料为 ＳＴ１ 组培苗ꎬ待 ＳＴ１ 组培 Ｕｎｉｆｉｅｄ Ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ａｎｎｏｔａｔｏｒ ( ｈｔｔｐ: / /
苗形成块根后ꎬ在 ＭＳ 液体培养基中分别添加 １０、 ｂｕｓｃａ.ｂｉｏｃｏｍｐ.ｕｎｉｂｏ.ｉｔ/ )进行亚细胞定位预测ꎮ
２０、５０、１００ μｍｏｌＬ 的 ＡＢＡ 进行处理ꎬ添加等量无 １.４.２ 太子参 Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ 蛋白序列系统进化分析与
￣１
水乙醇为对照ꎬ２３ ℃下光照培养ꎬ光照时间为 １６ ｈ / 分类 利用 ＭＥＧＡ ｖ１１.０ 软件中的 Ｍｕｓｃｌｅ 子程序对
８ ｈ(明/ 暗)ꎬ每组设置 ３ 个重复ꎮ 上述材料分别培 １５ 条太子参和 １２６ 条拟南芥的 Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ 蛋白序
养 ３、５、７ ｄ 后收集块根ꎬ烘干后进行环肽 Ｂ 含量检 列进 行 多 重 序 列 比 对ꎬ 采 用 邻 接 法 ( ｎｅｉｇｈｂｏｒ￣
测ꎮ 选择最适的 ＡＢＡ 处理浓度ꎬ分别处理 ＳＴ１ 组培 ｊｏｉｎｉｎｇꎬ ＮＪ ) 构 建 蛋 白 序 列 系 统 进 化 树ꎬ 通 过
苗 １、３、６、１２ ｈꎬ对照处理加等量无水乙醇ꎬ处理后收 ｂｏｏｔｓｔｒａｐ 检验( ｎ ＝ １ ０００)、Ｅｖｏｌｖｉｅｗ 网站( ｈｔｔｐｓ:/ /
集块根ꎬ速冻于液氮中ꎬ用于总 ＲＮＡ 提取ꎮ ｗｗｗ.ｅｖｏｌｇｅｎｉｕｓ.ｉｎｆｏ / )进行系统进化树分析ꎮ
１.２ 仪器 １.４.３ 太子参 Ｒ２Ｒ３￣ＭＹＢ 蛋白序列保守基序及特
台式 冷 冻 离 心 机 ( ５８１０Ｒꎬ 德 国 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ 公 征结构域分析 利用 ＭＥＭＥ( Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｅｍ ｆｏｒ Ｍｏｔｉｆ
司)ꎻ核 酸 微 量 测 定 仪 ( Ｎａｎｏｄｒｏｐ ８０￣Ｔｏｕｃｈꎬ 德 国 Ｅｌｉｃｉｔａｔｉｏｎ)在线分析软件( ｈｔｔｐｓ: / / ｍｅｍｅ￣ｓｕｉｔｅ.ｏｒｇ /
Ｉｍｐｌｅｎ 公司)ꎻ实时荧光定量 ＰＣＲ 仪( ＣＦＸ９６ Ｒｅａｌ￣ ｍｅｍｅ / ｔｏｏｌｓ/ ｍｅｍｅ)对 ＰｈＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 转录因子的保
Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍꎬ 美 国 伯 乐 公 司 )ꎻ 凝 胶 成 像 系 统 守基序进行分析ꎮ 参数设置如下:基序数量小于 ５
(ＣｈｅｍｉＤｏｃ Ｔｏｕｃｈꎬ美国伯乐公司)ꎻ高效液相色谱 个ꎬ最大宽度值为 ５０ꎬ最小宽度值为 ５ꎬ其余参数
仪(Ｗａｔｅｒｓ ｅ２６９５ꎬ美国 Ｗａｔｅｒｓ 公司)ꎮ 为默认设置ꎮ 使用 ＴＢｔｏｏｌｓ 软件对分析结果进行可
１.３ 试剂 视化ꎮ 采用 Ｊａｌｖｉｅｗ ｖ２.１１ 进行 ＰｈＲ２Ｒ３￣ＭＹＢ 蛋白
Ｅａｓｔｅｐ Ｓｕｐｅｒ 总 ＲＮＡ 提取试剂盒购自上海普 序 列 特 征 结 构 域 展 示ꎬ ＷｅｂＬｏｇｏ ( ｈｔｔｐｓ: / /
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洛麦格生物产品有限公司ꎻＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ ＲＴ ｒｅａｇｅｎｔ ｗｅｂｌｏｇｏ.ｔｈｒｅｅｐｌｕｓｏｎｅ.ｃｏｍ / ｃｒｅａｔｅ.ｃｇｉ) 绘制 Ｒ２ 和 Ｒ３
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Ｋｉｔ ｗｉｔｈ ｇＤＮＡ Ｅｒａｓｅｒ 及 ＴＢ Ｇｒｅｅｎ ｐｒｅｍｉｘ Ｅｘ Ｔａｑ 特征结构域的序列标识ꎮ
Ⅱ试剂盒购自宝日医生物技术有限公司ꎻ脱落酸 １.４.４ 太子参环肽 Ｂ 含量测定 参照文献( 刘洋
(批号＃Ｄ２１１０１６４ꎬ纯度≥９０％)购自上海阿拉丁生 等ꎬ２０２４)对太子参不同组织( 块根韧皮部、块根木
